ICS65.120 B46 DB12 天津市地方标准 DB12/T847-2018 饲料中总糖的测定分光光度法 Animal feeding stuffs determination of total sugars Polarimetric method 2018-12-26发布 天津市市场监督管理委员会 2019-02-01实施 前言 本标准按照GB/T1.1-2009的规则起草，由天津市农业科学院提出并归口。标准起草单位为天津市农业质量标准与检测技术研究所。主要起草人为张强、陈秋生、王利宾、刘烨潼、股萍、孟兆芳、张玺。 1 范围 本标准规定了饲料中总糖含量的测定方法，包括原理、试剂与材料、仪器设备、分析步骤、结果计算及精密度要求。适用于饲料及其原料中总糖含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。注日期的引用文件仅适用于所注日期版本，不注日期的引用文件适用其最新版本，包括所有修改单。 - GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 - GB/T 20195 动物饲料试样的制备 3 原理 饲料中水溶性糖和水不溶性多糖经盐酸水解转化为还原糖，水解物在硫酸作用下与芳香族酚类化合物缩合生成黄色溶液，在490nm处有最大吸收。吸光度值在一定范围内与糖的浓度成正比，从而测定总糖含量。 4 试剂与材料 4.1 实验用水指标满足GB/T6682一级标准。 4.2 浓盐酸，p=1.18g/mL。 4.3 浓硫酸，p=1.84g/mL。 4.4 苯酚溶液（50g/L），称取5g苯酚，用水定容至100mL，摇匀后避光保存。 4.5 葡萄糖标准溶液（1g/L），葡萄糖于105℃烘干至恒重，准确称取1.0000g，用水溶解后加入5mL盐酸，并定容至1000mL。 5 仪器与设备 5.1 可见分光光度计 5.2 电子天平，感量0.1mg 5.3 电子天平，感量0.01g 5.4 恒温水浴锅 5.5 电热鼓风干燥箱 5.6 样品粉碎设备 5.7 实验室常用玻璃器具 6 分析步骤 6.1 采样与试样制备 按照GB/T20195规定执行。 6.2 试样前处理 称取约1g试样（精确至0.01g）于250mL锥形瓶中，加入25mL水和10mL盐酸，振荡摇匀形成均匀悬浊液。装上冷凝回流装置，在沸水浴中水解1h，冷却后过滤并洗涤滤渣，合并滤液及洗液，定容至250mL，摇匀待用。 6.3 标准系列溶液的制备 分取0mL、1mL、2mL、4mL、6mL、10mL葡萄糖标准溶液于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度并摇匀。此曲线浓度分别为0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、120μg/mL、200μg/mL。吸取各1mL标准溶液于10mL比色管中，加入苯酚溶液各1mL和浓硫酸5mL，反应静置10min后涡旋摇匀并冷却至室温，以490nm测定吸光度，绘制标准曲线。 6.4 测定 吸取待测溶液1mL于10mL比色管中，按6.3步骤操作至冷却至室温后测定吸光度。 7 结果计算 试样中总糖含量按公式计算： X = (a × V × 10^-6 × 1000) / (m × v) 其中，X为试样总糖含量，g/kg；a为标准曲线上查得葡萄糖含量，μg；V为试样经前处理后定容体积，mL；v为测定时吸取滤液体积，mL；m为试样质量，g。结果以葡萄糖计，精确到小数点后一位。 8 精密度 总糖含量50g/kg时，在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对值不得超过算术平均值的10%；总糖含量>50g/kg时，两次独立测定结果的绝对值不得超过算术平均值的5%.