DB34/T2254-2014 水产品中氯霉素残留的检测—胶体金免疫层析法
发布单位：安徽省质量技术监督局
发布日期：2014-12-17
实施日期：2015-01-17
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前言
本标准按照 GB/T1.1-2009 的规则起草，由合肥市渔政监督管理站提出，安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位包括合肥市畜牧水产技术推广中心、合肥市渔业协会和杭州南开日新生物技术有限公司。本标准起草人包括赖年悦、孙德祥、桑丽雅、周作友、徐薇、陈友顺、杨锐、曹海、张军、夏俊华、陈元生、程定文、方凯、钱继银、桂涂、胡积清、戴靖、陈晓荣、徐丽、沈亭海、徐经云和季曙春。

1 范围
本标准规定了水产品中氯霉素（Chloramphenicol, CAP）残留的检测方法——胶体金免疫层析法的原理、试剂和材料、仪器设备、测定步骤、结果判断及确证方法。适用于鱼、甲鱼、龟肌肉组织和虾、蟹可食用组织的快速筛查。本方法的检出限为 0.3 μg/kg。

2 规范性引用文件
下列文件对于本标准的应用必不可少。注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用；未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。
- GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 原理
本方法为竞争抑制法。将氯金酸还原制备金溶胶颗粒并标记抗体。样品中残留的氯霉素经乙酸乙酯提取，正己烷净化后，滴加在氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板的加样孔中。样品溶液以硝酸纤维素膜为载体，利用毛细管作用缓慢迁移，氯霉素与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体与检测线抗原结合。未结合的抗体与检测线上的抗原反应，通过胶体金颜色显示红色条带。使用胶体金读卡仪或目测比较控制线（C线）与检测线（T线）红色条带的有无及颜色深浅进行判定。当样品中氯霉素含量达到或超过检出限时，检测线显色淡或无显色，判定为阳性；低于检出限或无残留时，检测线与控制线显色一致或偏深，判定为阴性。

4 试剂和材料
4.1 除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水符合 GB/T6682 二级水要求。
4.2 乙酸乙酯（CH3COOCH2CH3）
4.3 正己烷（C6H14）
4.4 氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板
4.4.1 氯霉素结合抗原：偶联率 1:10~1:20（载体蛋白：CAP）
4.4.2 抗氯霉素抗体：可为多抗或单抗。多抗效价应大于 5000（间接 ELISA 法）或有效抗体含量大于 0.05 mg/mL；单抗效价应大于 15000 或有效抗体含量大于 0.5 mg/mL，抗体特异性大于 5000（间接抑制 ELISA 法），相对亲和力大于 3.0×10⁶（结合率下降 50% 时对应的抗体浓度倒数）。