DB37/T3747—2019
金针菇液体菌种生产技术规程
Technical progress of liquid spawn culture by *Flammulina velutipes*

【前言】
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省农业农村厅提出并组织实施。本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：山东农业工程学院、山东省农业技术推广总站、山东益生园菌业有限公司、齐鲁师范学院、济宁市蔬菜工作指导站、金乡食用菌管理办公室、山东常生源菌业有限公司、济宁利马菌业有限公司。
本标准主要起草人：牛贞福、国淑梅、于安军、徐金强、曹健、颜亚男、崔艳秋、周爱国、常猛、张广龙。

1 范围
本标准规定了金针菇（*Flammulina velutipes*）液体菌种生产环境、厂房设施、生产设备、品种、工艺流程及贮藏等技术要求。本标准适用于金针菇液体菌种的生产。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB150 钢制压力容器
GB5749 生活饮用水卫生标准
GB50073 洁净厂房设计规范
NY/T528 食用菌菌种生产技术规程
NY/T1284 食用菌菌种中杂菌及害虫的检验
NY5099 无公害食品食用菌栽培基质安全技术要求

3 术语和定义
GB/T12728 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
3.1 液体菌种 (liquid spawn)
液体菌种是指在装有液体培养的容器中，通过控制温度、不断通气搅拌或振荡，使菌丝短期内在液体中繁育并获得的大量菌丝体片段或菌核。
3.2 食用菌液体菌种培养器 (cultivation apparatus for edible fungus liquid spawn)
也称液体菌种培养罐，是指进行食用菌液体菌种培养的专用设备，包括固定式和可移动式两种类型。要求不锈钢材质，符合GB150钢制压力容器标准。
3.3 食用菌液体菌种接种器 (edible fungus-liquid interface inoculator)
指能将液体菌种从培养器中按无菌操作要求转接到食用菌固体培养基物料上的设备。

4 技术要求
4.1 技术人员
具有食用菌菌种生产或检验人员从业资格证的专业技术人员。
4.2 生产环境
4.2.1 基本要求
空气优良、地势高燥、交通方便、通风良好、水源电源充足、排水畅通，其中水源应符合GB5749的规定。
4.2.2 环境卫生要求
金针菇液体菌种生产场所应距工矿业的“三废”及微生物、烟尘和粉尘等污染源500m以上。生产场所有硬质路面、排水良好的道路。
4.2.3 液体菌种生产场所
液体菌种生产场所地面应能防水、防腐蚀、防渗漏、防滑，易清洗，应有1.0°～1.5°的排水坡度和良好的排水系统，排水沟应是圆弧式的明沟。墙壁和天花板应能防潮、防霉、防水、易清洗。
4.2.4 液体菌种接种间
液体菌种接种间应设置缓冲间和风淋消毒间，缓冲间入口处设置洗手、消毒和干手设施，设置与接种职工人数相适应的更衣室。接种车间设封闭式废物桶，安装排气管道或者排风设备，门窗应设置防蚊蝇纱网。

5 生产设施设备
5.1 生产设施
原料库、配料间、发菌间、冷却间、接种间、培养室、检测室规模要配套，布局合理，要有调温设施，设计符合GB50073要求。
5.2 生产设备
液体菌种培养器、液体菌种接种器、高压蒸汽灭菌锅、蒸汽锅炉、超净工作台、恒温摇床、恒温培养箱、冰箱、普通光学显微镜、磁力搅拌机、天平、酸度计等。其中液体菌种培养器、高压灭菌锅和蒸汽锅炉应使用经政府有关部门检验合格，符合国家压力容器标准的产品。

6 培养基质
应符合NY5099的规定。

7 生产品种
选用高产、优质、抗逆性强、商品性好的金针菇品种，从具有相应资质的供种单位引种或本单位选育，并清楚地追溯菌种来源。菌种生产过程应符合NY/T528的要求。

8 液体菌种生产
8.1 液体菌种生产工艺流程
金针菇液体菌种生产工艺流程：原料 $ ightarrow$ 液体培养基配制 $ ightarrow$ 液体培养基灭菌 $ ightarrow$ 液体菌种培养 $ ightarrow$ 液体菌种检测 $ ightarrow$ 液体菌种产品。
8.2 液体菌种培养器维护
8.2.1 检查
检查培养器上全部阀门、安全阀、压力表，要求完好、正常。
8.2.2 清洗
对罐内、外和全部阀门用流水冲洗，达到无死角、内壁无任何残留物。
8.2.3 煮罐和空消
培养器初次使用、出现杂菌、长期放置、更换品种时，都要求煮罐和空消进行灭菌。煮罐和空消要求蒸气压力0.12MPa、温度121℃、灭菌40min。
8.3 液体菌种培养基配方
金针菇液体菌种生产推荐选用以下配方：
配方一：黄豆粉10g/L、蔗糖3.0g/L、KH$_2$PO$_4$ 1g/L、MgSO$_4$ 0.5g/L。
配方二：玉米粉6g/L、黄豆粉4.5g/L。
配方三：玉米粉1.0g/L，黄豆粉5g/L，葡萄糖7.5g/L，酵母膏1.5g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.25g/L。
其中黄豆粉、玉米粉均应过100目筛（筛孔直径0.15mm）。
8.4 投料和定容
首先用温水把玉米粉、黄豆粉和配方中其他成分搅拌均匀，不能有结块，通过吸管或漏斗加入罐体，液体量在罐体容量的70%～80%为宜。然后加入0.03%消泡剂，最后打紧上料盖。
8.5 液体培养基灭菌
8.5.1 气动搅拌
调整控温箱温度至125℃，打开罐体加热棒开始对罐体进行加热，在100℃之前一直开启罐体夹层出水阀，以放掉夹层里的废压和多余的水。温度在70℃以下时打开空气压缩机，通过其储气罐和空气过滤器对罐体培养基进行气动搅拌，防止液体结块。