DB37/T3755—2019
高效液相色谱法
肥料中2,4-D的测定
Determination of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid in fertilizers by high performance liquid chromatography

前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省市场监督管理局提出并组织实施。本标准由山东化工标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、菏泽金正大生态工程有限公司、中国人民解放军疾病预防控制中心、山东农业大学。
本标准主要起草人：刘爽、张娟、张灿、刘倩倩、朱海荣、田静、于燕萍、尹畅、程彬、商姗娜、郑树林、王景超、邹惠玲、苏本玉、李成亮。

警告：本标准有可能涉及到有害物质、危险操作和设备的安全。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的要求。

1 范围
本标准规定了肥料中2,4-D的液相色谱检测方法。本标准适用于水溶肥料、复混肥料、混肥料、配方肥料中2,4-D的检测。称样量为1.0g时，方法中2,4-D的检出限为3mg/kg。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682 分析实验室用水规格和实验方法

3 方法提要
试样中2,4-D用甲醇进行超声提取，在选定的工作条件下，用高效液相色谱仪（配有二极管阵列检测器）进行测定，外标法定量。

4 试剂和材料
本标准中试验用水应符合GB/T6682中一级用水的规格。
4.1 乙酸铵：色谱纯。
4.2 甲醇：色谱纯。
4.3 乙腈：色谱纯。
4.4 10mM乙酸铵水溶液：称取0.771g乙酸铵加水稀释至1000mL。
4.5 2,4-D标准品：已知质量分数，W≥98.0%。
4.6 2,4-D标准溶液：称取0.01g（精确至0.0001g）2,4-D标准品，定容至10mL，用甲醇（4.2）定容，配制成浓度为1000mg/L的标准溶液，现用现配。

5 仪器
5.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器（PDA），色谱数据处理机或色谱工作站。
5.2 涡旋混合器。
5.3 高速离心机：最高转速不低于6000r/min。
5.4 超声波清洗器。
5.5 金属试验筛：0.5mm。
5.6 分析天平：精度0.1mg。
5.7 有机相微孔滤膜：0.45μm。

6 分析步骤
6.1 样品制备
固体样品：将样品粉碎，过0.5mm试验筛，待用。液体样品混匀后直接称取。
6.2 提取
称取0.1g（精确至0.0001g）样品至离心管中，加入8mL甲醇（4.2），涡旋1min，超声30min，以6000r/min高速离心10min，放至室温后，定容至10mL，取1mL上清液过0.45μm有机相滤膜，待测。
6.3 测定
6.3.1 液相色谱操作条件
推荐的液相色谱条件如下：
a）色谱柱：250mm × 4.6mm (i.d.) 不锈钢柱，内装RP185.0μm填充物（或具有相同柱效的其他反相色谱柱）；
b）检测波长：283nm；
c）柱箱温度：35℃；
d）流动相：乙腈：乙酸铵水溶液 = 60:40；
e）流速：0.8mL/min；
f）进样量：10μL。
上述液相色谱操作条件，系典型操作参数。可根据不同仪器特点，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。
6.3.2 标准曲线绘制
分别移取2,4-D标准溶液（4.6）0.01、0.05、0.25、0.50和1.00mL至10mL容量瓶中，用甲醇（4.2）定容，配制成浓度分别为1mg/L、5mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L的标准工作溶液，按色谱条件（6.3.1）进行测定，以色谱峰面积为纵坐标，对应的溶液浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线。
6.3.3 试样测定
取适量待测液（6.2），按照色谱条件（6.3.1）进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积，外标法定量，同时进行平行试验。2,4-D含量高的试样可取适量试样溶液用甲醇稀释后进行测定。
6.4 空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。
6.5 结果表述
6.6 允许差