DB37/T3760—2019
肥料中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的测定
高效液相色谱法
Determination of abscisic acid, l-naphthaleneacetic acid, chlorfenuron and uniconazole in fertilizers by high performance liquid chromatography

前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省市场监督管理局提出并组织实施。本标准由山东化工标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、金正大生态工程集团股份有限公司、中国人民解放军疾病控制中心、山东农业大学。
本标准主要起草人：刘晖、张娟、朱海荣、张灿、商姗姆姗、赵丽芳、王景超、郑树林、徐楠、尹畅、刘金凤、孙文丹、刘鹏飞、邹惠玲、于军、苏本玉、杨越超。

警告：本标准有可能涉及到有害物质、危险操作和设备的安全。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的要求。

1 范围
本标准规定了肥料中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的高效液相色谱法。本标准适用于水溶肥料、复混肥料、掺混肥料、配方肥料中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的检测。
称样量为1.0g时，方法中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的检出限为3mg/kg。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682 分析实验室用水规格和实验方法

3 原理
试样中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑用甲醇进行超声提取，以甲醇-0.1%甲酸水为流动相，在选定的工作条件下，用高效液相色谱仪（配有二极管阵列检测器）测定，外标法定量。

4 试剂和材料
4.1 甲醇：色谱纯。
4.2 甲酸：分析纯。
4.3 甲酸-水溶液 (1+1000)：移取1.0mL甲酸与1000mL水混匀。
4.5 萘乙酸标准品：已知质量分数，$ge$98.0%。
4.6 氯吡脲标准品：已知质量分数，$ge$98.0%。
4.7 烯效唑标准品：已知质量分数，$ge$98.0%。
脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的标准物质信息详见附录A。
4.8 脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑混合标准溶液：称取脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑标准品，精确至0.0001g，用甲醇（4.1）配制成浓度为1000mg/L的混合标准溶液，现用现配。

5 仪器
5.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器和色谱数据处理机。
5.2 微量注射器：50$mu$L。
5.3 漩涡混合器。
5.4 高速离心机：最高转速不低于6000r/min。
5.5 分析天平：精度0.1mg。
5.6 超声波清洗器。
5.7 金属试验筛：0.5mm。
5.8 有机相微孔滤膜：0.22$mu$m。

6 分析步骤
6.1 样品制备
固体样品：将样品粉碎，全部过0.5mm试验筛，待用。液体样品混匀后直接称取。
6.2 样品提取
称取0.1g～1.0g样品（精确至0.0001g），置于10mL离心管中，加入8mL甲醇，涡旋振荡1min，超声提取30min，然后以6000r/min离心10min，定容至10mL，取上清液1mL过0.22$mu$m有机相滤膜，待测。
6.3 测定
6.3.1 液相色谱操作条件
推荐的液相色谱操作条件如下：
a) 色谱柱：250mm $ imes$ 4.6mm（i.d.）不锈钢柱，内装C18，5.0$mu$m填充物（或具有同等效果的色谱柱）；
b) 流动相：流动相及梯度洗脱条件见表1；
c) 流速：1.0mL/min；
d) 柱温：30℃；
e) 检测波长：氯吡脲、烯效唑的最佳检测波长为258nm，萘乙酸最佳检测波长为280nm；
f) 进样体积：10$mu$L。
上述操作参数是典型的，可根据不同仪器特点进行适当调整，以期获得最佳效果。典型的脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑标准溶液液相色谱图见附录B中图B.1。

表1 流动相及梯度洗脱条件
时间/min | [甲醇(4.1)]/% | [水-0.1%甲酸]/%
0 | 30 | 70
7.0 | 45 | 55
13.0 | 55 | 45
18.0 | 80 | 20

附录A 结构式
附录B （资料性附录）