本标准规定了出口动物毒素的抽样、制样、感官检验、毒素鉴别、水份、不溶物质、蛋白质含量、酶活性的测定及急性毒性试验方法。本标准适用于东亚钳蝎毒冻干粉的检验。其中水分、不溶物质、蛋白质含量测定及急性毒性试验方法亦适用于其他类动物毒素的检验。 SN/T 1040-2002 出口动物毒素(东亚钳蝎毒)检验方法 SN/T1040-2002 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1040—2002
出口动物毒素（东亚钳蝎毒）
检验方法
Fxamination methods of animal toxin (Ycom of thcScorpion Buthus martensii)for cxnort2002 - 01 - 16 发布
中华人民共和国
国家质量监梵检验检疫总局
2002-0601实施
SN/T 1040—2002
本标准是按照GB/T1.1-1993标准化T作导则「第1单元：核准的起草与表述规则第1部分：标维消写的函本规定的要求编了的，采用的方快主要是户华生物市案联合开发中心武没大学涉案检险壶1388年以来在工作实义中使开的方法。其小性谢性试检(LD测定方法范采用张缸、刘婉谷营控专编《事型学$(1S97年版）中的画恩(Hor\>法，技术内容销有变动，本标准的对录人民标确的附录。本标准的附录B是提示的附录。
本标准由国末认证认率监督管单垂员会提出并归口。本标准起草单位：中单人民共和国湖北出人境检發检度局.中华生物赛帝联合大发中心。本标准丰要起草人：张宗显、刘岱岳、徐新生、赵峰、拓为国。本标基首次发布的检验检变行业标准。1范围
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准出口动物毒素（东亚钳蝎毒）
检验方法
Exmtination ruelhods of animal toxtn (yenom ofthe Senrpinu Buthus murteasil) far expurt5N/T1040-2002
本标难规定可出口动物变宽的抽样、制样感宜检障，再费鉴别，水假，不游物质、蛋自质含草、鞋循慢的测定及急性毒性试验方法。本标准质用于东亚钳竭毒冻十粉的检验。其中水分，不薄物随，蛋白质监谢定政急性声三试验方法亦适用于其他类动物毒索的检验。2设备与材料
2.1天平，些通关乎，栋量10CCg够量C.51g：分祈天平，称量200g临量0.11n5。2.2721型分光产度计或等效者。2.3烘箱，0-200℃
2.4培养箱，35±1℃
2.5取样工具：不锈钢，盛样粒等。2.6恒温水裕锅。
2.7玻旁器血：坏、格液管、闹升、相制称树血等。2.8微鱼加样器：1L~10±,10al.~50μL,50--250L。2.9打孔器,外径.5 3
2.70注射端，1mL。
2-11试验动物，品明冲小鼠，体再1g--22.3试剂
3. 1 踪脂:
32叠熟钠。
3-3待羟氢二钠。
3.4磷酸二绿钠
3.5对照东亚纠寿源十格（由中华生物事索联合正发心心提供）3. 5扩东亚变而清(欲谢不低于 1 16)。3.了冰够
3.豆牛声清白诺方标准品（的市国药品生频制品检定所走供）：3-9.氨基黑。
中华人民共国国家虚量监将检验检峻总局20020116批准2002-06-01实栋
3.10竞蓝：
3.11 苦味酸。
3.12碳酸钩，
3.13驾氧化钳：
3-4统酸(CLS, 订,O)。
3.15酒石酸虾：
3. 16 乙醇.
3.18钥酸销(NgMo2ET0)。
能盐酸.
透明压酸。
说化十六烷基三平铵.
3.23浣、
SN/T1040—2002
除专用试别外,其余试剂均为分新纯级。4样与样品保存
1.1检编批
以每批真空冷冻下燥的产品为一检验批。一检验批的产品应具有相同的特征，就包装，标记产地，规格利等级等，
4.2编情效域
冻十蝎弱价格与贵之丧品，其包装适常为密时瓶浓，每瓶净重的为，在无特殊规定时，依照随机轴样原（F))A检龄操作于册>，1988年增订版》，按式（1)并避四含人规则计算样短数。=
武心，—·抽样瓶数
该批蜗毒流十粉的瓶效。
4.3、抽有法与样品保存
4.3.1抽样方法：数4.2规定的拍择数岸照机抽收准平深箱内逐瓶并户，用沾净下爆的不锈钢些以每施中抽及运量样品（也可在分表时温约整批产品后进行抽推），紫人清净十燥的技瑞瓶内，密封后标明标记。问捡验批取-准合栏作为原始详品，英质量不必于3号，为了游免分样测定时样品吸或受活染，根据测定项月的婴求，也可传原始样是混包旧分装成荐十小，作为子样品。，3-2样品存：样量被抽收后如不牌及时玲验，应敢人小型千操器内，以风小林密封，保下1效箱内，
5试祥制备
表据下述按验程序规定的检测或项占及每个项目的且体要求分别进行试样制备。6检验程序
6.1感亨检龄
6.1.1气味格液，在消洁、穿气消新，无异味的实验室内，旋瓶告，瓶口与检验者强逆器官长持证当所离，一尺手手指并就由多间内接试能口上力，喀共味。2
SN/T 1040—2002
6.1.2外观验险：在清、自然光线充是（书人阳光直射》的实验空内，将样点瓶频倒数次魂勾样品，热后恢开瓶差，观紫样品的结晶形状、松状态、色释等，燃后取适最样品，用蒸水醛戒1%溶液，观察其色泽及理期状况。
6.1-3结果表述
a）气味;对鼻粘膜有潮商味;或对奥粘膜无刺激味。b）外观结晶形，柏松，洁白酪带凯东色戏非结品形.非篷松状，非活白带很克色。c?替液：均半避明、白色或非均句、非半透明、非乳白色。6.2毒索鉴别试监（双而源器织敏法）6.2.1力族提要：抗原<刘照和待检幽毒)和抗休（抗每每血清)分别加人琼皆板的小孔内，抗原统体在琼游中自由扩敬，存举度、比词适当时，给过定时简，对应抗原和抗体在两孔之间彩成一录抗流。板据沉旋綫形成情况及其特德聚别牵紊的类别，6.2.2操作程序
6.2.2.1在迟录纸上画-~加样截孔模型，标出每个孔的内弃物和与玻片上惊脂极孔相一致的号码，取一洁净载疫片，在次上面均句案一质期化1%配制的1(W/V)琼脂：厚度约3m。固之后，预先面好板孔位置的记录纸上，用打孔需对谁板孔位置打孔，礼轻约3.5mm，6-2.2.2快用3040样将当带的扩车清十脂板的小间孔内：对照释跨液改不同依态的检样品转释微分别依次妇于球胎板上四孔内·并用细要荐排除孔内可能存在的气泡（见图1）。对照蝠和毒抗血询的装度用前盛进行预试验，所网来度应能在其两孔之间形成清晰缅靠的沉滨线，消测最大的数慢。6.2.2.3加作后，琼脂板被款人保持一定据虑的V血内，益上血盖，一97它保温24万或25保温1~-2灭。
.2.2.4巢心：先密琼陷板在生理盐水中漂洗微次，去除沉淀线以务的蛋自质，然后俊入苦标酸密液（控和苦味酸群满：冰=S1：5同定10min：接若用自米水沈度性叫定。老一张混然纸于球脂板表面，暨60七左右淇十或室满十块。十燥后移大感纸.再授人0.5%裂划想或亮染色浓中约1T。用醛性乙落兼（艺醇，H.0：冰之醛=?5：25：%>并行脱色，直到背乐完全透明，取出水冲洗下冷即可见弥消晰的免疫扩散图谱，6.2.2.5结果分析
琼脂做的中H孔与欢照蜗盘孔及各被检样品供释落孔改部分然格样品和罩液孔之间出玩消断可见特异沉衰线，索被检样品含有与对照蜗牵相假的抗原，必阁图3；中叫孔仅马剂照蜗再孔之间有沉淀缆，而与鼓检样品各耗释液孔之间无沉流战，表明被检样品中不含有上照竭击相以的抗原（匹图1）?
1抗幅每立动2披检样品希释落？服竭系毯释液：4一披检件品帮环液1一做格忙品极轻强：图
抗消与检品
情肝献孔之问形成沉淀线。
SN/T 1040-2G02
规蜥毒岛离孔与石膜些塞预逆液孔总部牙被检样品帮率液孔之同影戏说流照，
6.2.7.6站具述
仅抗螺毒止育凡与对岛蚂年我舜获孔之间形或沉旋线。检样品含有与对赋均再相似的抗原或被检弹品不含有与对照归毒相的抗原，必要时，前按附录旧提示的方法进一步鉴别。63水份含革测定（带压工媒法）6.3.1操卡和库
63.1.1将其量称川（25可m×mm）冒105心烘干2h，放人千燥器内，冷势至它温窃，再烘3重，此量至重，
6. 3.1,2称取得检格品 0, 1~~0. 2(W,),骨于 10.i烘2h,放人T续我内-冷却至案温称重接照6.3.1.1操作直至克（W)
6.3.2结果计算与表
以百分率表示水份含量。按式（证笋：W-里×1CG%
武中：x,
变分含量；监：
亍烧前样品质量·名：
于烧率恒量时样品质量：8.
6.4人熔性物质含量烈定
E. 4. 操作差序
取有径？的定量诺纸，折叠后效入称血内，置19烘箱内供十至恒压。准确称取待愉群品0.8，望指净的小烧杯中，划适逐幕偏水，充分挑指使籍解，样满在请平中还过上还位生的滤纸过滤。异月适量苹够水选小烧怀小，并以此水洗涤能纸1的或前物，血此互复2--3次，从斗中取山有留物的纸，放人工述恒平称量血内：留133烘内洪干至恒取6.4.2结果计第与表途
以百分率表示不溶性物质含按（3)计算G×%
式.一一不州收质含量，%：
·-弥吊瓶滤浜节·号：
一瓶一纸十物
样品：
6.5蛋白质含量测定（:.0WFY法）4
SN/T1040—2002
6.5.1方运旋要：和月碱性溶液中的锯试剂与样品的蓝白质形成的铜-蛋口质变合物来还原薛钼融钨整成剂，得到蓝色的反应按，在65nm被长处测其吸光慎，经标准曲线计算样品白质含量，6.5.2试剂配制
a）4碳酸钠落液，段4g破酸钳，加蒸增水落解成10m。b）o.2ma1/氢化钠液取0.8R氨氧化钠，加薰锥水浴解虑10cml..）14ml/l硫酸铜熔：单1g硫酸钢(CuSO,+L0)，加蒸增水溶解尿100inL。d）2%禹石酸卵（或0.1mnl/1.石钠）溶液：收2多酒石酸铆（或酒石酸销）加蒸馏水婆解成100 mL,
）磁性钢液，临用前，试剂)和b)各25mL.或c)和d)各0.5mL混句配制而感，酚试剂称取100mL铭钠（NaWO，,)，25g销纳(NaMO2Fl,O），量150Uml烤瓶中，加人70mL蒸焰水，5CmL85%磷酸及100mL浓带醛，上联回流管（使用软本塞减摄纸包衰的橡皮窦），微沸同流10h取下同流笛，加150g航酸偶，5UmL蒸愧水和几清决液，煮沸约15min，夏除过盘的流。冷却，加葱瘤水稀释至100C血，过滤，为的试齐旺餐落。酚试剂亡条液经标准氧氧化的游波施定.测定触度，面底用滤恼水稀释至相当于1n1al/，盐酸液鹿，即为试剂。
g）标准蛋白质落液：取牛血消白蛋户林准品，用含0.025%叠氮钠（NaN）的蒸瘤水催确稀释至1m%/mL，为标准蛋内质扩备液，种确量取标猫登口质它备液2.51ml.于25-ml.烧瓶中，用含0.C2%叠东销（NaN)的燕埔水码释至制度，的为1g/ml的标胜爱自溶藏。6.5.3频作老序
6.5.3.1详液制各：取适量竹品.用骨C.02%益氮的（NaN.>的随确帮弃至100\g/mL：再精确量取适点件积（含蛋质5C左右）于试肾中加5m械性微，混列，于室温放置10min迹人0.5的试剂，捆勾案温效图3mir在0被长处定吸光但至色后，如发现混经3000r/rmin心15min,再行测）。
65.3.2标注曲线制件：销确量取1CCuR/mL的标准蛋白适序：0,0.2.C.40.6，0.8，1.0mL，分别量于试替中，加蒸诵术补率1mL，其余操作同6.5.3.1.以名管小的标准蛋与质降液的吸北值为泌垒标，测定的旁升为快必标作图，即可得到-标准比线。6.5.3.3结果计算与表述
蛋白质含量以球克每整克（F/mg）表示。性概测得的样液的盟光值，从标谨曲线查出相当的标消否白负落服的索升数，按式[4)计算结果x 100
式中，X，—样品蛋自质合量，ue/mg:V，持液的吸范值在标准曲线上查将的相当标准蛋两浮液的客几数V一用」吸光值测定约性液的享升效。6.6秀明质酸醉活生谢定
6.61方法提要：适明压解能水解透质照使其分了量变水弃亡增大冶良降调带以汕度率情表示醒的活件，并以125属物症37它被融水解，停其度障低50%的醉直作为一单位。通过测定成物酸作用前，后的者欲座，求得降的征性单位，6.6.2操作程.本
6.6-7.1计剂配制
剂A0.1mal/LplIg.0乙酸要冲整，含0.n65mn./L氧化弟。试剂R：0.03%ma1/滤化六烷基-甲较，便月0.05mo1/LPH4.2乙醛缓冲被配制剂C物试验液：使用试剂A尚透明质醛配成报度为250g/rmL的悬浮搬，SN/T 1040—2002
试剂D，持创样品路报：使用试剂A轻待谢样品配成适当浓度（在预试整中确定>的待谢就。6. 6 2. 2测定：取 2只试咨,在37℃多件下,缺表1所列操作步原加人试病,反应总体积为2mL。分别记录股光度。
择作步票
1.人起物登流
2人心.1mol/LPH6.D面酸冲抽
3。迅建加人待意忙品拍商，立即很合均与并记时37反30n立人剂整反位
5.两心后取上清撞于400nT谢吸光度6.6.2.3酶覆力单位计算发果表述空
透明质晚醇然活力以产/mg表示，按式(5>计算样品中遗明质酸酶的单位数，X=(n-Awn)/Agn
式中：X,-—透明适酿降的适·u/m：A空——案白的吸光险
A#品一
样品的吸光度：
样品智样品的质量mg.
6-7急性率性试验(I.10. 测定）6.7.1 试验程序
样品试情
1. 40~1.00
n.10~.0.5m
5.7.1.7试验动数：选用在实验室均养周后依重18~22品的注康民明种小忘供试动物必随快方估分为5组，每组,推各，能椎分开何养。其中1组用作对照,其余4组供架毒试验，策标前、后动物自中进食，饮求。
6.7.1.2试款剂量：根据预试验结果确定验剂量范带（应包含试验动物死亡率从心~·100%的剂量）核照采用的计算方法（在恩氏达）的婴求，设世4个剂量部，以10为剂量递增公比，其组距为%倍。在蜗薪L测定1，—般使用1.1ug/kg，2.15mg/k%4.54mg/kk和10.0r%/kp1齐：举组系列。果该系列中最大剂最组高动的不出坏！%死亡率或最小剂量组的试验动物就室不为0，可技原因室组距间上或问下调整剂册级。
67.1.3样品盘用策的配制：传用无南生玩益水将试样品配制感池度分别0.1/m1.0.215mg/mL.0.464mg/ml.1g/L的成用液，等种浓度醛制mt-，如采莉量级选行广满整，应按服调格后的减乱级配别相应浓度的应用液。6.71.4腔涉，快用1vL注射器，载0.1L/10体重注射容最，以无单操作分别对4个不同剂量经的实物版腔性射样品应用疫，对照妇动物料脱注射同量死苗生理益水，带后立即观赛动物中举症装、如症状出现的时间、临家表现，死亡情况等。测察期为14不，6.7.1.5关数致量《1.3）>及95%可信限的计算，根据采用的试验齐进范用各适担动物在观案期内中术死亡的第计效，从附录A表A1户求得检样品半数教死且CL,>及可信限。6.7.1.G结果我递
半数致死量（1.D）单位以ng/kg体至表示。各对量机动物观亡灶
SN/T140
附隶A
《标准的附录）
计算表
当每组5只动物组臣么15时的LDn计算表表A1
剂量=0.464
剂盒=1:03
剂量，2.15
剂量.-4.e
可信限
1.37--2 91
1- 26 ~2.33
1. 28 ~ --2-1
1.G5--2-73
0. 91 ~2. 27
n.956--1.71
1- CJ~2-91
0. B622. E0
0. Tr5~2. t
0.741 --1.E7
D. T4D~2. 14
0. 665--1.75
1.24--3-1
1.C--2-43
1. 65 -- 1. 70
1. C3-- 3. 60
0. X5~3.61
0. 727--2. d1
D. 6F1--1. ^3
0. R15 -3. 15
D. 6E8-7. 72
0. 550--3.25
0. 533---3. 28
1. GO-- J. 55
0. R6~7. F7
0. 674--1. 52
0. K9-- 4. F?
0. 616--3. 55
0. 41:6--7. 77
n. 573 --3. 76
0. 4U6~-N.JR
1.13-3.23
1.27~2.65
0. 978--3. 52
0. 853 ~2. 52
剂量：=3-15
剂量，=4.64
刻量，1e-c
可抗限
2. 95 ~-5. 26
3.71~5.01
2.65-6.98
2- 27 5. 99
3. 0a-~r2- 88
2.00~-3. 9
2. J *- 0- 28
1.66~-5.$8
1. 67 ~4-4.Www.bzxZ.net
1.60~-3.39
1. 59 ~ -- 92
1. 43-3 78
3- 63 ~ - 76
2. 3. ~ -5. 24
3. 26 ~-3. 95
2.29~-7.75
J.87--3.49
1. 39 ~-5. 20
1. 12 ~3.25
1. 76~ -5.87
J.42 - J.32
3. 19---4.74
1. 134. 9
2.16---7.7-
3.Y1 ~0.7G
1. 15~-4. J3
1. 8_ 3. 23
t. $3~ 7. 33
1. 00--3. 98
1. 24 ~ 3. 1h
c. 8rali. Ba
2. 15 -7.02
2.#1-~4. 12
2. 11 -- 8. 44
1.2~F, 35
削量：—2-15
剂量：4.64
剂量-13.0
剂量、=21.5
可信随
R. 86~18. 5
5. B4-10. 8
5. TO--15.f
4 801~-12. 5
d. dt-!6. 5
4. 30~7. 94
4. 67--13.5
4. nn--11. 6
3. G0--9. 5c
3. 44~- 7. 3C
3. 43--9. 95
3. 05~-B. 14
5. GE--14. 6
9.58~11.3
4. 97-7. 97
3.D4~·16.7
-- 93 --14. 0
3. -7--11. 2
3, 37 -- 9. .
3. 35 ~-14. 8
3. 95 ·-12. 5
2. 55 ~-1G. 2
8.23~1c.8
.06--·16.6
3. 74 --12. 4
3. 13~ ·3.89
3. 39.--19. 9
2. 86 ~-16. 2
2.16--12. 9
2. 66 ~ 17. 4
5. 46 ~15. 1
:.qu~. t:*
4. E4--1R.2
4.14--13.F
各量实动物死亡效
剂量,=0. 404
剂量2—:.0
别量。—2. 15
SN/T 1040—2002
表A1 (完)
剂量,=1.00
剂量+=4. 64
可信风
0.930~4.12
0.797--3.20
0. 585--1. 77
0. 075~2. G3
0. 501 ~-2. 02
0. 363--7. 71
1. 02~-2. 11
0. 757~-4. 75
0. 552-- 3. 39
3. 581 ~2, 22
,706~·5.09
2. 452~~7. K5
3. 423--2. 05
3. 562~4. 78
2. 5K3~7. F2
3.5#--E.55
2. 3274. 4B
2. 213--7. 72
3. 265--E. E2
E, :2. ~ 3. 20
5.777~-4. 63
3. BC5--3.67
3. hY-~5. 3D
5.515--3.E0
0 -2--2. 15
5: 573~3. 76
0. 503--2. F7
0. 956--2. t9
3. SF1-F. ER
5. 451 --8. 25
2. 453~6,11
3.315·J.74
3 2*3--5. 26
剂量:=2. 1F
别量 4. 54
剂量，—10. 6
可倍限
1. 01 -~ 4. 33
2. 50~·B. B8
1. 72 --7.
J. i4~5. 36
1. 48--3. 9c
1. 46--5. B7
1. 25 ~-4. 36
2. D9--7. 95
2. 20 ~4. 51
1. 63~-10. 2
1. 41 -7. 16
1. 21 ~1. YS
1.52~21.n
1.21~6. 34
0. 977f13
0.012~·6.57
1, 43--_0. 3
1. 2F.--5. 42
0. 280~-15. n
n.r05--s.65
0. 84~~15. 5
0. 573~-11- 2
2. 12--6. 86
1. 8F ~- 9. 97
1.74-·5.76
1.33~7. 53
1.30-- 4. 62
1. 24 ~8. 10
1. 58~-5. 54
1. 5E - 7. 96
1. 4 ~-1. 2
0. 072~ 7.c1
0, 840 --17 5
n. 46x--13. 2
0. 602--13
剂量=2. 15
剂置:—4.64
剂量,-1%h 0
剂量、—2).5
可做账
4. 11--9. 33
4. 81~-15.1
3. 70-15. 2
7.*9~8. :9
3. 24--:2. 2
2. 74~ 9. 99
4. 50 ~--7. 2
1- 74--9-78
3.51~-2x.0
3. c3--5. 3
2. 70·10. 3
3. 28 --28. 6
2.62--:7.7
2.11--5. 8
1. 97--* 4. 2
3. 07 --22. 2
2. E~tl. ?
2. :1~-3. 2
:. 52--20. 8
.-.yu3.8
-. 2A~ R5. A
5. 22--14. 8
3. 60 ~21.4
3.15 --24. 6
7. RF-16. 7
2. 7: -- 9.
2. 66-~1r. 1
2. 33~-:1.
3. 98 -:7. 1
2. 2-- 3u. :
1-81--37.6
1.41--21.11
1.39--24. 4
81方法摄要
8N/T1040—2002
提示的附录）
毛细管电录法监别东亚带姆毒
尽司的动物毒索中吉有不同的蛋白质，象亚钳帜毒的主要成分为而游性蛋白质，其组出是其有特征性的，经过细昏电脉，蜗币中的可溶准蛋白质，依其不问的分了量，形成具有特征性的自冰图谐。据此：可树步监别东亚盛毒。
12器和试剂
B2.1BECKMANP/ACE>10,配二极普库划检测器2-2磷酸盐较冲液：25mnul/.膦酸尘奔液pH6.0B2.3标准蛋白质碎夜：本五肽胰岛茶·分子量5000：细胞色素心，分子量二3000分别用酸盐缓冲(2.2)配刷求11g/mL标准诺微。2.4传试样液：确取东业钳蜗谁冻二粉2mp，范解于酵致整螺冲液（2.2)中，配制成1ms/ml待试试样液，
进拌前，标准落报及试样源均经孔经045日唤过B3区带电泳象件
B3.1毛细臀样：75mX57cm米涂源右英佳，有欲栏恢55cm。H3.2进详方试：压力进样，进样时间5≤。B3.3工作电压：2kV。
3.4住温，20。
B3.5检派长，274nut。
B4结果分析
制测定，乐要针蝎毒的手细增电民谱上只有特行巨的（实验结果见图1)，周性中出现6个上要益户质哗，其可落烂白质的分字量在100心~-3000之间。观测试样得的毛细势电浓图说的特征性井与同一条件下测将的标理蛋白质图谱对照，测出求详可落性蛋质分子是的分在的用老试样的半继电球图谱与医1相似，其可率性蛋户质的分子量的分布按近于4-8的范，测可划步认为所创试样属东业钳毒，
B5靖果表逆
在相而测定条件下，所谢试样的需绍管电泳所谱与东亚钳竭涉的降诺州似，其可密性蛋所的分于量的分布接式十：000--8000的范国，或在相同测定条件下所测试栏的无率营热图增与求亚钳整率的图谱不相似技寄性蛋白质的分子分个不在4U0(--8930的范图0.0150
D,0300
6. rn s. vo
SN/T 140—2002
图1乐壶书海细营电综医证
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