SN/T 2534-2010 进出口水果和蔬菜制品中展青霉素含量检测方法 液相色谱-质谱 质谱法与高效液相色谱法 SN/T2534-2010 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2534—2010
进出口水果和蔬菜制品中展青霉素含量检测方法
液相色谱-质谱/质谱法
与高效液相色谱法
Determination of patulin in fruit and vegetable products for import and export-LC-MS/MS and HPLC method
2010-03-02发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2010-09-16实施
本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录，本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国河南出人境检验检疫局负责起草本标准主要起草人：杨冀州、祝伟霞、袁萍、刘亚风、郭俊峰、魏蔚。http：//foodmate.netSN/T2534—2010
1范围
进出口水果和蔬菜制品中展青霉素含量检测方法液相色谱-质谱/质谱法与高效液相色谱法
SN/T2534—2010
本标准规定了水果和蔬菜制品中展青每素的高效液相色谱检测方法和液相色谱-质谱/质谱检测和确证方法。
本标准适用于苹果清汁、苹果浊汁、番茄酱、山楂片中展青霉素的高效液相色谱检测方法和液相色谱-质谱/质谱检测和确证方法。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方面研究使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试样的制备与保存
3.1苹果清汁
从所取样品中取出有代表性样品约500g，摇匀后装入洁净容器，密封并标明标记，将试样置于0℃~4℃条件下避光保存。
3.2苹果浊汁、番茄酱
从所取样品中取出有代表性样品约500g，用玻璃棒搅拌均匀，装人洁净容器作为试样，密封标明标记，将试样置于0℃~4℃条件下避光保存。3.3山楂片
从所取样品中取出有代表性样品约500g，用粉碎机粉碎，混和均匀，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。将试样置于0℃～4℃条件下避光保存。在制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。第一法液相色谱-质谱/质谱法下载标准就来标准下载网
4方法提要
苹果清汁用乙睛稀释后直接固相萃取净化；苹果浊汁、番茄酱、山楂片样品先用果胶酶水解，再以乙酸乙酯提取，吹干浓缩后固相萃取净化，液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。5试剂和材料
除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，水为GBT6682规定的一级水。5.1乙睛：高效液相色谱级。
5.2冰乙酸：高效液相色谱级。
5.3乙酸乙酯。
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5.4果胶酶溶液（endogalacturonase）：活度为14ooU/g。5.5pH4.0水溶液：量取700mL~800mL水，用冰乙酸调节pH4.0，加水定容至1000mL。5.61%乙酸溶液：量取10mL冰乙酸与990mL水混合。5.7展青霉素标准品（patulin）：C,H.O4，CAS编号149-29-1，纯度大于等于99.5%。5.8标准储备溶液：准确称取展青霉素标准品10mg（5.7）.用乙酸乙酯溶解并定容至100mL，浓度相当于100μg/mL，储备液贮存于一18℃以下，稳定6个月。5.9标准中间溶液：准确量取1.0mL标准贮备溶液（5.8），用氮气吹干后溶于pH4.0水（5.5）中，定容至100mL，浓度相当于1.0μg/mL，储备液贮存于0℃～4℃，稳定3个月。5.10标准工作溶液：根据需要用空白基质溶液将标准中间溶液（5.9)稀释成适当浓度的标准工作溶液，标准工作溶液应在使用前配制。5.11MycoSep?228净化柱或相当者1。5.120.45μm微孔滤膜，水系。
6仪器和设备
6.1液相色谱串联四极杆质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。6.2分析天平：感量0.1mg，0.01g。6.3涡旋混匀器
6.4离心机：4000r/min。
6.5氮气吹干仪。
6.6pH计：测量精度士0.02。
6.7粉碎机。
7测定步骤
7.1样品提取
7.1.1清汁
准确称取2g试样（精确到0.01g）于一具塞试管中，加人6.0mL乙睛，涡旋混匀2min，于4000r/min离心5min，转移全部上清液于试管中待净化。7.1.2浊汁、番茄酱、山楂片
准确称取5g均勾试样（精确到0.01g）于一具塞试管中，加入20mL水与150μL果胶酶溶液（5.4）混匀，室温下避光放置过夜，酶解后的溶液加人20mL乙酸乙酯，涡旋提取3min，于4000r/min离心5min，转移上层乙酸乙酯提取液，再用20mL乙酸乙酯重复提取一次。合并两次乙酸乙酯提取液，混匀后量取16mL乙酸乙酯于40℃水浴中氮吹浓缩至干，用2.0mL1%乙酸（5.6）溶液溶解残渣：加人6.0mL乙睛混匀，转移溶液于试管中待净化7.2净化
将MycoSep228净化柱（5.11)放于试管正上方，用手缓慢向下推柱体到试管底部，使样液以1.0mL/min的速度通过柱体（具体操作可参见附录A）。准确量取4.0mL净化液于40℃水浴中氮吹浓缩至干，用1.0mLpH4.0水溶液（5.5）溶解残渣，经0.45μm滤膜过滤，供液相色谱-质谱/质谱测定。
7.3测定
7.3.1液相色谱条件
7.3.1.1色谱柱：AtlantisdCs.150mm×2.1mm（内径）3μm或相当者。是由Romerlabs公司提供的展青霉素多功能净化柱的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，1
并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。2
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7.3.1.2流动相：乙睛十水（10十90，体积比）。7.3.1.3流速：0.2mL/min。
7.3.1.4柱温：30℃。
7.3.1.5进样量：10μL。
7.3.2质谱条件
7.3.2.1离子化模式：电喷雾电离负离子模式（ESI-）。7.3.2.2质谱扫描方式：多反应监测（MRM）7.3.2.3其他质谱参考条件参见附录B.1。7.3.3液相色谱-质谱/质谱测定
7.3.3.1定量测定
SN/T2534—2010
根据样液中展青霉素浓度大小，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中展青霉素响应值均应在仪器的检测线性范围内，对标准工作溶液和样液等体积参差进样测定。在上述仪器条件下，展青霉素参考保留时间约为6，63min。标准溶液的液相色谱-质谱/质谱多反应监测（MRM）色谱图参见附录C中图C.1。
7.3.3.2定性测定
按照上述仪器条件测定样品和标准工作溶液，如果样品的质量色谱峰相对保留时间与标准溶液在士2.5%范围内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的混合基质标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表1的规定，则可判断样品中存在相应的被测物表1定性测定时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。9结果计算和表述
>20～50
>10~20
用数据处理软件中的外标法，或按照式（1)计算样品中展青霉素残留量。AXCXV
式中：
试样中展青霉素的残留量，单位为纳克每克（ng/g）；样液中展青霉素的色谱峰面积；标准工作液中展青霉素的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)：样液最终定容体积，单位为毫升（mL）：标准工作液中展青霉素的色谱峰面积；最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。注：计算结果须扣除空白值。
10测定低限、回收率
10.1测定低限
本方法测定低限为5μg/kg。
10.2回收率
回收率见表2。
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添加水平/（μg/kg）
11方法提要
2液相色谱-质谱/质谱方法回收率表2
回收率/%
苹果清汁
70.8~99.8
71.9~96.2
76.0~97.0
第二法
苹果浊汁
76.2~101.3
83.9~102.2
83.5101.0
高效液相色谱法
番茄酱
63.2~101.4
78.9~98.9
77.0102.1
山楂片
71,4100,5
79.9~105.1
81.0~101.0
苹果清汁用乙睛稀释后直接固相萃取净化；苹果浊汁、番茄酱、山楂片样品先用果胶酶水解，再以乙酸乙酯提取试样中展青霉素，吹干浓缩后固相萃取净化，用配有紫外或二极管阵列检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。
12试剂和材料
除特殊注明外，所用试剂和材料均同5.1～5.9，5.11～5.12。12.1甲醇：高效液相色谱级
12.2标准工作溶液：根据需要用pH4.0水溶液将标准中间溶液（5.9）稀释成适当浓度的标准工作溶液，标准工作溶液应在使用前配制。13
仪器和设备
除特殊注明外所用设备均同6.2～6.7。高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。14测定步骤
14.1样品提取
同7.1。
14.2净化
同7.2。
14.3测定
14.3.1液相色谱条件
14.3. 1. 1
色谱柱：PhenomenexLUNACis.250mmX4.6mm（内径）5μm或相当者14.3.1.2
流动相：甲醇+十水（10十90，体积比）。14.3.1.3流速：1.0mL/min。
15.3.1.4柱温：30℃。
14.3.1.5进样量：20μL。
5检测波长：276nm。
14.3.2液相色谱测定
根据样液中展青霉系浓度大小，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中展青霉素响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参差进样测定，在上述色谱条件下，展青霉素参考保留时间约为11.3min。标准溶液的色谱图参见附录C中图C.2。4
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空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行结果计算和表述
同第9章。
测定低限、回收率
测定低限
本方法测定低限为5ug/kg。
17.2回收率
回收率见表3。
3液相色谱方法回收率
添加水平/（μg/kg）
苹果清汁
69.0~102.4
74.7~106.2
81.0~98.0
苹果浊汁
77.0~99.8
83.2~101.0
回收率/%
番茄酱
65.6~98.4
80.0~97.0
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山楂片
65.8~97.6
81.0~102.1
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布化校
附录A
（资料性附录）
固相萃取净化示意图
图A.1固相萃取净化过程
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参考质谱条件
附录B
（资料性附录）
参考质谱条件1
雾化气GS1（NEB)：344.75kPa(50psi)（氮气）；气帘气（CUR）：172.38kPa（25psi）（氮气）；喷雾电压（IS)：—4500V；
去簇电压（DP)：一45V：
碰撞室出口电压（CXP)：—8V；去溶剂温度（TEM）：500℃；
去溶剂气流GS2:275.8kPa（40psi)（氮气）；碰撞气（CAD）：68.95kPa(10psi)（氮气）；其他质谱参数见表B.1。
化合物
展青霉素
母离子(m/z)
展青霉素的主要参考质谱参数
子离子(m/z)
驻留时间/ms
注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。离子为定量离子。
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碰撞能量/eV
1）非商业性声明：附录B所列参考质谱条件是在API4000型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。http：//foodmate.netSN/T2534—2010
附录C
（资料性附录）
多重反应监测（MRM）色谱图和液相色谱图2
153.0/108.9
163. 0/135.0
展青霉素标准溶液（10ug/kg）的重构离子色谱图图C.1
YWD1A, Wavelength=276 nin(C:ACIEM32VATA NPAt.1TINT1022)PAJT.TTINI022 2007-09-21 22-03-11↓ST1PPM,T))2
展青霉素标准溶液（10μg/kg）的液相色谱图htt
14/inin
Foreword
Annex A,Annex B and Annex C of this standard are informative annexesSN/T2534—2010
This standard was proposed by and is under the charge of Certification and Accreditation Administra-tionofthePeople'sRepublicofChinaThe standard was drafted by Henan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People'sRepublic of China.
Themaindraftersof thisstandardareYangJizhou,ZhuWeixia,YuanPing,LiuYafeng,Guo JunfengWeiWei.
This standard is a professional standard for entry-exit inspection and quarantine promulgated for thefirsttime.
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SN/T 2534—2010
Determination of patulin in fruit and vegetable products forimport and exportLC-MS/MS methodandHPLC method1Scope
This standard specifies the methods of sample preparation and determination of patulin in fruit andvegetableproducts by liquid chromatography-mass spectrometry and high performance liquid chro-matography.
This standard is applicableto the determination and qualificationof patulin in clearapple juice,cloudyapple juice,redeye,hawthornby liquid chromatography-mass spectrometryandhighperformance liq-uidchromatography.
2Normativereferences
Thefollowing normative documents contain provisions which,through reference inthis text,consti-tute provisions of this national standard. For dated references,subsequent amendments to,or revi-sions of,any of these publications do not apply.However,parties to agreements based in this nation-al standard are encouraged to investigate the possibility of applying the most recent editions of thenormative documents indicated below.For undated references,the latest edition of the normativedocumentreferredtoapplies.
GB/T6682waterforanalytical laboratoryuse-Specificationandtestmethods3Thepreparationandstoringof thesampleClearapplejuices
About5o0g representativesamples shouldbetakenfromall samples,then blended to produce ho-mogenous samples,put ina suitable clean container.Afterbeing sealed and labeledthe samplesshould be stored at o ℃ ~4 ℃ in refrigeratory and protected from light.3.2Cloudyapplejuices,redeye
About 5o0 g representative samples should be taken from all samples,blended by a glass stick,put ina suitable clean container.Afterbeing sealed and labeled,the samples shouldbe stored at o C ~4℃in refrigeratory and protected from light.10
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