SN/T 1924-2011
基本信息
标准号： SN/T 1924-2011
中文名称：进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留量的测定 液相色谱-质谱∕质谱法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 进出口 动物 食品 伦特罗 多巴胺 丁胺 醇和 残留量 测定 色谱 质谱 质谱法
标准分类号
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标准简介
SN/T 1924-2011 进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留量的测定 液相色谱-质谱∕质谱法
SN/T1924-2011
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1924—2011
代替SN/T1924-2007
进出口动物源食品中克伦特罗莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of clenbuterol,ractopamine,salbutemol and terbutalinresidues in foodstuffs of animal origin for import and export-HPLC-MS/MSMethod
2011-02-25发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
数码防码
2011-07-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。言
SN/T 1924-—2011
本标准代替SN/T1924-2007《进出口动物源食品中克伦特罗、莱可多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法》。本标准与SN/T1924—2007相比，主要技术变化如下：适用范围增加了动物源食品牛骨汤精、牛奶及奶粉；样品前处理中增加了正已烷脱脂步骤；固相萃取柱由C18和阳离子交换柱修改为混合型阳离子交换柱；样液溶剂由乙睛+水（1+9）修改为0.1%甲酸；克伦特罗监控离子对由277.3/203.0、277.3/259.2修改为277.0/203.0、277.0/132.0、277.0/168.0;
经实验验证，克伦特罗测定低限由0.5pg/kg修改为0.05ug/kg。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：王凤美、牛增元、蔡发、邓晓军、汤志旭、张峰、张是、罗忻、陈世山、张鸿伟、庞士平。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T1924—2007。
1范围
进出口动物源食品中克伦特罗莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
SN/T 1924--2011
本标准规定了进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺，沙丁胺醇和特布他林残留量的液相色谱-质谱/质谱（HPLC-MS/MS）测定与确证方法。本标准适用于进出口动物源食品肌肉、内脏、牛骨汤精以及牛奶、奶粉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留量的测定及确证。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
试样中的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留采用β-葡萄糖醛酶/芳基硫酸酯酶酶解，乙酸铵缓冲溶液提取，正已烷脱脂：水相溶液经混合型阳离子交换固相萃取柱净化.HPLC-MS/MS测定，内标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1乙腊：色谱级。
甲醇：色谱级。
4.3正已烷：色谱级。
4.4乙酸乙酯：色谱级。
4.5中酸：色谱级。
乙酸铵：色谱级。
浓盐酸：含量为36%~38%。
氨水：含量为25%~28%。
4.9β-葡萄糖醛武酶/芳基硫酸酯酶溶液：含β葡萄糖醛拭酶111000U/mL;芳基硫酸酯酶1079U/mL。4.10乙酸铵缓冲溶液（2mol/L）：称取乙酸铵（4.6)77.0g：用水稀释并定容至500mL.混勾，并用乙酸调节pH为5.2。
4.110.1%甲酸溶液：移取1.0mL甲酸（4.5)，用水稀释并定容至1000mL，混匀。4.120.1mol/L盐酸溶液：取9mL浓盐酸（4.7),加水稀释至1000mL，混匀。SN/T1924—2011
4.1350%甲醇溶液：50mL甲醇（4.2）与50mL水混匀。4.14洗脱溶液：50mL乙酸乙酯（4.4）、45mL甲醇（4.2）与5ml氨水（4.8）混勺。4.15固相萃取（SPE）柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为莱磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，60mg，3mL，或相当者。使用前依次用3mL甲醇（4.2）3ml水和3mL盐酸溶液（4.12）对柱子进行活化。
4.16氮气：纯度≥99.999%。
4.17标准品：盐酸克伦特罗（Clenbuterolhydrochloride），CAS编号：21898-19-1，纯度≥98.5%；盐酸菜克多巴胺（Ractopaminehydrochloride），CAS编号：90274-24-1，纯度≥99.0%：硫酸沙丁胺醇（Salbu-tamolsulfate），CAS编号：51022-70-9，纯度≥99.0%：特布他林半硫酸盐（Terbutalinhemisulfatesalt)，CAS编号：23031-32-5，纯度≥4.18标准储备液（1000mg/L）：准确称取盐酸克伦特罗盐酸菜克多巴胺、硫酸沙丁胺醇、特布他林半硫酸盐标准品（折合成目标化合物10.0mg）分别用适量甲醇溶解，并用甲醇定容至10mL，混勾。-18℃以下避光保存，有效期为124.19标准中间液：用甲醇分别稀释克伦特罗、莱克多围胺沙
胺醇、特布他林标准储备液（4.18)至10mg/L，4℃以下避光保存，有效期为6个月4.20混合标准工作液：临用前用0.1%用酸配制多巴胺-D3、沙丁胺醇-D3均为2.5ng内标浓度分别为克伦特罗-D90.5ng/mL，莱克4.21同位素内标物：盐酸莱克多巴胺内标物（RactopamineD3HGl）纯度≥98.6%；克伦特罗内标溶九剂为内酮：沙丁胺醇内标溶液（Salbutamol-D3），浓度为液（Clenbuterol-D9），浓度为100mg100mg/L，溶剂为丙酮。
4.22莱克多巴胺内标储备液（100mg/L）：准确称取盐酸莱克多巴胺-D3标准品（折合成目标化合物18以下避光保存，有效期为12个月。10.0mg）用甲醇溶解并定容至100ml混匀。一1D9溶液（4.21）沙丁胺醇-D3溶液（4.21）以及菜4.23同位素内标中间液：用甲醇分别稀释克伦特罗C以下光保存，有效期为6个月。克多巴胺-D3储备液（4.22）至10项4.24同位素内标工作液：根据需要移取适量同素内标中间液（423），用0.1%甲酸稀释，配制克伦特罗-D9、莱克多巴胺-D3、沙丁胺醒1浓度分别为10g/L、50/L.50μg/L的同位素内标工作液，该溶液临用前配制。
5仪器与设备
5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪：配电喷露离于源（ESI)。5.2分析天平：感量为0.01g和0.1mg5.3旋涡混合器。
5.4冷冻离心机：转速≥8000r/min5.5固相萃取装置。
5.6组织捣碎机。
5.7均质器。
氮吹浓缩仪。
样品制备与保存
6.1制样要求
制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。2
6.2肌肉、内脏样品
SN/T1924—2011
从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于一18℃以下冷冻存放，6.3牛奶、奶粉、牛骨汤精样品
从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，充分混勾，均分成两份，分别装人洁净容器中，密封，并标明标记。牛奶样品于4℃以下避光保存：奶粉样品于常温下避光保存：牛骨汤精于-18℃以下冷冻存放。
7测定步骤
7.1提取
7.1. 1肌肉、内脏
称取5g（精确至0.01g）试样，置于50mL具螺旋盖的聚丙烯离心管中，添加50uL同位素内标工作液（4.24），加人20mL乙酸铵缓油睿液（4.10）均质提取1min，然后加人40μLβ-葡萄糖醛拭酶/芳基硫酸酯酶（4.9），充分振荡混匀，37酶解16h4条件下8000/min离心5min，收集上清液于具螺旋盖的聚丙烯离心管中，加入20ml.正已烷，振满混匀。4条件下12000/min离心5min，弃去正已烷层，水相溶液立即经滤纸过滤，并用2mL乙酸铵缓冲溶液（410）洗涤滤纸，收集全部滤液，待净化。
注：若只测克伦特罗，可省去酶解步骤但建议均质提取后充分拆荡，以利于基质分散。7.1.2牛奶、奶粉、牛骨汤精
50mL具媒旋盖的聚丙矫离心管中，添加50uL同位素内标工称取5g（精确至0.01g）试样
作液（4.24），加入20mL乙酸铵缓冲落液（4.19旋泻混合1m.然后加人40μLβ-葡萄糖醛试酶/芳基硫酸酯酶（4.9)，充分振荡混匀37℃酶解16h。4条件下层000/min离心5min，收集上清液于20ml正包烷振荡混匀4℃条件下12000t/min离心5min，弃具螺旋盖的聚丙烯离心管中，加入去正已烷层，水相溶液立即经滤纸过滤，并用2mL乙酸铵缓冲溶液（4.10)洗涤滤纸，收集全部滤液.待净化。
注：若只测克伦特罗，可省去酶解步骤；但建议满施混合提取后充分振荡，以利于基质分鼓。7.2净化
将7.1.1或7.1.2所得滤液以低于1.0mL/min的流速加载在固相萃取小柱（4.15）上，再依次用3mL盐酸溶液（4.12）.3mL水、3mL50%甲醇（4.13）和3mL正已烷（4.3）淋洗小柱，弃去淋洗液：真空抽干2min，用3ml洗脱液（4.14）进行洗脱，收集洗脱液。洗脱液在45℃下氮气流吹干，加人1mL0.1%甲酸溶液溶解残渣，样液过0.22μm滤膜后，供HPLC-MS/MS测定。7.3测定
7.3.1液相色谱条件
7.3.1.1色谱柱：C柱，150mm（柱长）×2.1mm（内径）.粒度5μm。7.3.1.2流动相：乙睛-0.1%甲酸溶液，梯度洗脱条件见表1SN/T1924—2011
7. 3. 1.3
流速：300μL/min。
柱温：35℃。
进样量：20μL。
质谱条件
7.3. 2. 1
表1液相色谱的梯度洗脱条件
μL/min
离子化模式：电喷雾电离（ESI)正离子模式。质谱扫描方式：多反应监测（MRM）。7.3.2.3分辨率：单位质量分辨率。7.3.2.4其他质谱条件参见附录A。7.3.3定性测定
0.1%甲酸溶液
按照液相色谱-串联质谱条件测定样液和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品一致，定性离子对的相对丰度，是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示，应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围：则可判断样品中存在对应的待分析物。
表2定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
7.3.4定量测定
>20至50
>10至20
在仪器最佳工作条件下，对样液及标准工作溶液（参考线性浓度范围克伦特罗为：0.1ng/mL~5.0ng/mL，莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林均为：1.0ng/mL50ng/mL）进样。内标法定量，样液中待分析物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。各日标化合物测定低限浓度的标准溶液多重反应监测（MRM）色谱图参见附录B。7.4空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。8结果计算与表述
按式(1)计算克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量。计算结果需扣除空白值。4
式中：
X-CXGXAXA.XV
CaXA,XAXm
样品中待分析物的残留量，单位为微克每千克（μg/kg)：SN/T 1924—2011
...........( 1)
标准工作溶液中待分析物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；样品中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)：样品中待分析物的峰面积；
标准工作溶液中内标物的峰面积；样品定容体积，单位为毫升（mL）：标准工作溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；样品溶液中内标物的峰面积：
标准工作溶液中待分析物的峰面积；样品称样量，单位为克（g）。
注：特布他林采用沙丁胺醇同位素内标定量。测定低限、回收率和精密度
测定低限
本方法对克伦特罗的测定低限为0.05ug/kg：对莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林的测定低限均为0.5μg/kg
9.2回收率和精密度
猪肉、猪肝、牛肉、牛骨汤精、牛奶及奶粉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林的回收率试验数据见表3
表3克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留的添加回收率试验数据添加浓度
物质种类
克伦特罗
莱克多巴胺
沙丁胺醇
特布他林
98.0~-106.0
98.7-~104.0
95.0~107.0
92.9-109.9
97.4~-103.6
99.5~104.0
99.2~107.2
94.0~116.0
98.7~104.0
95.0108.0
98.8~108.2
98.0104.8
99.6102.8
98.1~103.6
回收率范围
94.0114.0
96.0-104.0
98.0~114.0
92.7~101.2
98.4~103.2
99.3~102.3
98.4-104.7
牛骨汤精
94.0--106.0
100,0~~102.7
93.0~118.0
97.0~111.9
95.8~~104.4
99.9~103.5
98.6--107.8
94.0~114.0
97.3-104.0
98.0~110.0
98.7~109.3
98.0~103.8
99.5~101.7
98.2105.7
96.0--106.0
98.7~-104.0
93.0~111.0
93.4-~106.8
98.4~104.2免费标准下载网bzxz
99.6101.6
98.7107.8
101.4-108.4
103.4~110.8100.4~114.2
103.2~-109.0
100.2~-103.8
101.2~-106.2
99.6-104.1
98.6~114.5
74.4~87.2
99.7~104.1
98.8~115.4
73.6~83.6
88.3~92.2
90.8-94.5
100.1~103.2
99.2113.7
85.5~-90.9
90.5~95.1
99.9~103.3
98.9--115.3
86.8--91.5
92.7~95.8
99.1~103.1
98.7~108.7
72.2~78.6
85.6~91.5
91.3~92.5
100.4~~102.3
99.6~108.4
72.4--77.6
86.3~92.1
90.7~93.6
SN/T1924—2011
毛细管电压：4500V。
A.2干燥气温度：350℃。
A.3干燥气流量：11L/min
雾化器压力：241325kPa35psi)。磁撞气：氧气
其他质谱参数见表A.1
附录A
（资料性附录）
参考质谱条件1
表A1主要参考质谱参数
化合物
克伦特罗
莱克多巴胺
沙丁胺醇
特布他林
克伦特罗-D9
莱克多巴胺-D3
沙丁胺醇-D3
母离子（m/2）
子离子（m/2
引图时间
裂解电压
注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质语参数优化到最佳。势定量离子。
碰撞能量
1）非商业性声明：附录A所列参考质谱条件是在Agilemt6410型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。6
附录B
（资料性附录）
标准品多重反应监测(MRM)色谱图243.3>151
226.0>152.1
SN/T1924—2011
图B.1沙丁胺醇（0.5μg/kg）、特布他林（0.5μg/kg）、莱克多巴胺（0.5μg/kg）和克伦特罗（0.05g/kg）的MRM色谱图uu
（）园
227.0>168.1
277.0>203.0
SN/T1924—2011
保留时间：沙丁胺醇2.44min：特布他林2.47min；莱克多巴胶5.85min；克伦特罗6.22min图B.1（续）
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代替SN/T1924-2007
进出口动物源食品中克伦特罗莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of clenbuterol,ractopamine,salbutemol and terbutalinresidues in foodstuffs of animal origin for import and export-HPLC-MS/MSMethod
2011-02-25发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
数码防码
2011-07-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。言
SN/T 1924-—2011
本标准代替SN/T1924-2007《进出口动物源食品中克伦特罗、莱可多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法》。本标准与SN/T1924—2007相比，主要技术变化如下：适用范围增加了动物源食品牛骨汤精、牛奶及奶粉；样品前处理中增加了正已烷脱脂步骤；固相萃取柱由C18和阳离子交换柱修改为混合型阳离子交换柱；样液溶剂由乙睛+水（1+9）修改为0.1%甲酸；克伦特罗监控离子对由277.3/203.0、277.3/259.2修改为277.0/203.0、277.0/132.0、277.0/168.0;
经实验验证，克伦特罗测定低限由0.5pg/kg修改为0.05ug/kg。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：王凤美、牛增元、蔡发、邓晓军、汤志旭、张峰、张是、罗忻、陈世山、张鸿伟、庞士平。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T1924—2007。
1范围
进出口动物源食品中克伦特罗莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
SN/T 1924--2011
本标准规定了进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺，沙丁胺醇和特布他林残留量的液相色谱-质谱/质谱（HPLC-MS/MS）测定与确证方法。本标准适用于进出口动物源食品肌肉、内脏、牛骨汤精以及牛奶、奶粉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留量的测定及确证。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
试样中的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留采用β-葡萄糖醛酶/芳基硫酸酯酶酶解，乙酸铵缓冲溶液提取，正已烷脱脂：水相溶液经混合型阳离子交换固相萃取柱净化.HPLC-MS/MS测定，内标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1乙腊：色谱级。
甲醇：色谱级。
4.3正已烷：色谱级。
4.4乙酸乙酯：色谱级。
4.5中酸：色谱级。
乙酸铵：色谱级。
浓盐酸：含量为36%~38%。
氨水：含量为25%~28%。
4.9β-葡萄糖醛武酶/芳基硫酸酯酶溶液：含β葡萄糖醛拭酶111000U/mL;芳基硫酸酯酶1079U/mL。4.10乙酸铵缓冲溶液（2mol/L）：称取乙酸铵（4.6)77.0g：用水稀释并定容至500mL.混勾，并用乙酸调节pH为5.2。
4.110.1%甲酸溶液：移取1.0mL甲酸（4.5)，用水稀释并定容至1000mL，混匀。4.120.1mol/L盐酸溶液：取9mL浓盐酸（4.7),加水稀释至1000mL，混匀。SN/T1924—2011
4.1350%甲醇溶液：50mL甲醇（4.2）与50mL水混匀。4.14洗脱溶液：50mL乙酸乙酯（4.4）、45mL甲醇（4.2）与5ml氨水（4.8）混勺。4.15固相萃取（SPE）柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为莱磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，60mg，3mL，或相当者。使用前依次用3mL甲醇（4.2）3ml水和3mL盐酸溶液（4.12）对柱子进行活化。
4.16氮气：纯度≥99.999%。
4.17标准品：盐酸克伦特罗（Clenbuterolhydrochloride），CAS编号：21898-19-1，纯度≥98.5%；盐酸菜克多巴胺（Ractopaminehydrochloride），CAS编号：90274-24-1，纯度≥99.0%：硫酸沙丁胺醇（Salbu-tamolsulfate），CAS编号：51022-70-9，纯度≥99.0%：特布他林半硫酸盐（Terbutalinhemisulfatesalt)，CAS编号：23031-32-5，纯度≥4.18标准储备液（1000mg/L）：准确称取盐酸克伦特罗盐酸菜克多巴胺、硫酸沙丁胺醇、特布他林半硫酸盐标准品（折合成目标化合物10.0mg）分别用适量甲醇溶解，并用甲醇定容至10mL，混勾。-18℃以下避光保存，有效期为124.19标准中间液：用甲醇分别稀释克伦特罗、莱克多围胺沙
胺醇、特布他林标准储备液（4.18)至10mg/L，4℃以下避光保存，有效期为6个月4.20混合标准工作液：临用前用0.1%用酸配制多巴胺-D3、沙丁胺醇-D3均为2.5ng内标浓度分别为克伦特罗-D90.5ng/mL，莱克4.21同位素内标物：盐酸莱克多巴胺内标物（RactopamineD3HGl）纯度≥98.6%；克伦特罗内标溶九剂为内酮：沙丁胺醇内标溶液（Salbutamol-D3），浓度为液（Clenbuterol-D9），浓度为100mg100mg/L，溶剂为丙酮。
4.22莱克多巴胺内标储备液（100mg/L）：准确称取盐酸莱克多巴胺-D3标准品（折合成目标化合物18以下避光保存，有效期为12个月。10.0mg）用甲醇溶解并定容至100ml混匀。一1D9溶液（4.21）沙丁胺醇-D3溶液（4.21）以及菜4.23同位素内标中间液：用甲醇分别稀释克伦特罗C以下光保存，有效期为6个月。克多巴胺-D3储备液（4.22）至10项4.24同位素内标工作液：根据需要移取适量同素内标中间液（423），用0.1%甲酸稀释，配制克伦特罗-D9、莱克多巴胺-D3、沙丁胺醒1浓度分别为10g/L、50/L.50μg/L的同位素内标工作液，该溶液临用前配制。
5仪器与设备
5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪：配电喷露离于源（ESI)。5.2分析天平：感量为0.01g和0.1mg5.3旋涡混合器。
5.4冷冻离心机：转速≥8000r/min5.5固相萃取装置。
5.6组织捣碎机。
5.7均质器。
氮吹浓缩仪。
样品制备与保存
6.1制样要求
制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。2
6.2肌肉、内脏样品
SN/T1924—2011
从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于一18℃以下冷冻存放，6.3牛奶、奶粉、牛骨汤精样品
从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，充分混勾，均分成两份，分别装人洁净容器中，密封，并标明标记。牛奶样品于4℃以下避光保存：奶粉样品于常温下避光保存：牛骨汤精于-18℃以下冷冻存放。
7测定步骤
7.1提取
7.1. 1肌肉、内脏
称取5g（精确至0.01g）试样，置于50mL具螺旋盖的聚丙烯离心管中，添加50uL同位素内标工作液（4.24），加人20mL乙酸铵缓油睿液（4.10）均质提取1min，然后加人40μLβ-葡萄糖醛拭酶/芳基硫酸酯酶（4.9），充分振荡混匀，37酶解16h4条件下8000/min离心5min，收集上清液于具螺旋盖的聚丙烯离心管中，加入20ml.正已烷，振满混匀。4条件下12000/min离心5min，弃去正已烷层，水相溶液立即经滤纸过滤，并用2mL乙酸铵缓冲溶液（410）洗涤滤纸，收集全部滤液，待净化。
注：若只测克伦特罗，可省去酶解步骤但建议均质提取后充分拆荡，以利于基质分散。7.1.2牛奶、奶粉、牛骨汤精
50mL具媒旋盖的聚丙矫离心管中，添加50uL同位素内标工称取5g（精确至0.01g）试样
作液（4.24），加入20mL乙酸铵缓冲落液（4.19旋泻混合1m.然后加人40μLβ-葡萄糖醛试酶/芳基硫酸酯酶（4.9)，充分振荡混匀37℃酶解16h。4条件下层000/min离心5min，收集上清液于20ml正包烷振荡混匀4℃条件下12000t/min离心5min，弃具螺旋盖的聚丙烯离心管中，加入去正已烷层，水相溶液立即经滤纸过滤，并用2mL乙酸铵缓冲溶液（4.10)洗涤滤纸，收集全部滤液.待净化。
注：若只测克伦特罗，可省去酶解步骤；但建议满施混合提取后充分振荡，以利于基质分鼓。7.2净化
将7.1.1或7.1.2所得滤液以低于1.0mL/min的流速加载在固相萃取小柱（4.15）上，再依次用3mL盐酸溶液（4.12）.3mL水、3mL50%甲醇（4.13）和3mL正已烷（4.3）淋洗小柱，弃去淋洗液：真空抽干2min，用3ml洗脱液（4.14）进行洗脱，收集洗脱液。洗脱液在45℃下氮气流吹干，加人1mL0.1%甲酸溶液溶解残渣，样液过0.22μm滤膜后，供HPLC-MS/MS测定。7.3测定
7.3.1液相色谱条件
7.3.1.1色谱柱：C柱，150mm（柱长）×2.1mm（内径）.粒度5μm。7.3.1.2流动相：乙睛-0.1%甲酸溶液，梯度洗脱条件见表1SN/T1924—2011
7. 3. 1.3
流速：300μL/min。
柱温：35℃。
进样量：20μL。
质谱条件
7.3. 2. 1
表1液相色谱的梯度洗脱条件
μL/min
离子化模式：电喷雾电离（ESI)正离子模式。质谱扫描方式：多反应监测（MRM）。7.3.2.3分辨率：单位质量分辨率。7.3.2.4其他质谱条件参见附录A。7.3.3定性测定
0.1%甲酸溶液
按照液相色谱-串联质谱条件测定样液和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品一致，定性离子对的相对丰度，是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示，应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围：则可判断样品中存在对应的待分析物。
表2定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
7.3.4定量测定
>20至50
>10至20
在仪器最佳工作条件下，对样液及标准工作溶液（参考线性浓度范围克伦特罗为：0.1ng/mL~5.0ng/mL，莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林均为：1.0ng/mL50ng/mL）进样。内标法定量，样液中待分析物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。各日标化合物测定低限浓度的标准溶液多重反应监测（MRM）色谱图参见附录B。7.4空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。8结果计算与表述
按式(1)计算克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量。计算结果需扣除空白值。4
式中：
X-CXGXAXA.XV
CaXA,XAXm
样品中待分析物的残留量，单位为微克每千克（μg/kg)：SN/T 1924—2011
...........( 1)
标准工作溶液中待分析物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；样品中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)：样品中待分析物的峰面积；
标准工作溶液中内标物的峰面积；样品定容体积，单位为毫升（mL）：标准工作溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；样品溶液中内标物的峰面积：
标准工作溶液中待分析物的峰面积；样品称样量，单位为克（g）。
注：特布他林采用沙丁胺醇同位素内标定量。测定低限、回收率和精密度
测定低限
本方法对克伦特罗的测定低限为0.05ug/kg：对莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林的测定低限均为0.5μg/kg
9.2回收率和精密度
猪肉、猪肝、牛肉、牛骨汤精、牛奶及奶粉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林的回收率试验数据见表3
表3克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留的添加回收率试验数据添加浓度
物质种类
克伦特罗
莱克多巴胺
沙丁胺醇
特布他林
98.0~-106.0
98.7-~104.0
95.0~107.0
92.9-109.9
97.4~-103.6
99.5~104.0
99.2~107.2
94.0~116.0
98.7~104.0
95.0108.0
98.8~108.2
98.0104.8
99.6102.8
98.1~103.6
回收率范围
94.0114.0
96.0-104.0
98.0~114.0
92.7~101.2
98.4~103.2
99.3~102.3
98.4-104.7
牛骨汤精
94.0--106.0
100,0~~102.7
93.0~118.0
97.0~111.9
95.8~~104.4
99.9~103.5
98.6--107.8
94.0~114.0
97.3-104.0
98.0~110.0
98.7~109.3
98.0~103.8
99.5~101.7
98.2105.7
96.0--106.0
98.7~-104.0
93.0~111.0
93.4-~106.8
98.4~104.2免费标准下载网bzxz
99.6101.6
98.7107.8
101.4-108.4
103.4~110.8100.4~114.2
103.2~-109.0
100.2~-103.8
101.2~-106.2
99.6-104.1
98.6~114.5
74.4~87.2
99.7~104.1
98.8~115.4
73.6~83.6
88.3~92.2
90.8-94.5
100.1~103.2
99.2113.7
85.5~-90.9
90.5~95.1
99.9~103.3
98.9--115.3
86.8--91.5
92.7~95.8
99.1~103.1
98.7~108.7
72.2~78.6
85.6~91.5
91.3~92.5
100.4~~102.3
99.6~108.4
72.4--77.6
86.3~92.1
90.7~93.6
SN/T1924—2011
毛细管电压：4500V。
A.2干燥气温度：350℃。
A.3干燥气流量：11L/min
雾化器压力：241325kPa35psi)。磁撞气：氧气
其他质谱参数见表A.1
附录A
（资料性附录）
参考质谱条件1
表A1主要参考质谱参数
化合物
克伦特罗
莱克多巴胺
沙丁胺醇
特布他林
克伦特罗-D9
莱克多巴胺-D3
沙丁胺醇-D3
母离子（m/2）
子离子（m/2
引图时间
裂解电压
注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质语参数优化到最佳。势定量离子。
碰撞能量
1）非商业性声明：附录A所列参考质谱条件是在Agilemt6410型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。6
附录B
（资料性附录）
标准品多重反应监测(MRM)色谱图243.3>151
226.0>152.1
SN/T1924—2011
图B.1沙丁胺醇（0.5μg/kg）、特布他林（0.5μg/kg）、莱克多巴胺（0.5μg/kg）和克伦特罗（0.05g/kg）的MRM色谱图uu
（）园
227.0>168.1
277.0>203.0
SN/T1924—2011
保留时间：沙丁胺醇2.44min：特布他林2.47min；莱克多巴胶5.85min；克伦特罗6.22min图B.1（续）
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