SN/T 0177-2011
基本信息
标准号： SN/T 0177-2011
中文名称：出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌计数方法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 出口 食品 中产 荚膜 梭状 芽孢 杆菌 计数 方法
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标准简介
SN/T 0177-2011 出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌计数方法
SN/T0177-2011
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 0177—2011
代替SN0177—1992
出口食品中产气荚膜梭状
芽孢杆菌计数方法
Method for enumeration of clostridium perfringens in food for export2011-09-09发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2012-04-01实施
本标准按照GB/T1：1一2009给出的规则起草。本标准代替SN0177一1992《出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌检验方法》。本标准与SN0177一1992相比，主要技术变化如下：一变更为推荐性标准；
SN/T0177—2011
一检测方法部分参考了ISO7937：2004《食品和动物饲料微生物产气英膜梭状芽孢杆菌计数菌落计数技术》内容，在标准中增加乳糖-亚硫酸盐试验作为确证试验，减除了含卵黄的TSC琼脂和PY培养基的使用；
一补充了商品化的全自动微生物鉴定仪本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：顾鸣、韩伟、谢小珏、王赢、陈立。1范围
出口食品中产气荚膜梭状
芽抱杆菌计数方法
SN/T0177—2011
本标准规定了出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌（Clostridiumperfringens）的计数检验方法。本标准适用于出口食品中产气膜梭状芽孢杆菌的检验。规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
产气英膜梭状芽孢杆菌clostridiumperfringens在特定的选择性培养基上，细菌菌落生长皇现黑色特点（亚硫酸盐降解为硫化物而形成黑色沉淀物，并使菌落呈现黑色），分解乳糖产酸产气，48h内能液化明胶的细菌。4设备和材料
4.1无菌吸管：1.0mL和10.0mL,分刻度分别为0.1mL和1.0mL。4.2无菌培养皿：直径90mm。
4.3均质器及均质袋（或均质杯）。4.4
恒温培养箱或厌氧培养箱：37℃士0.5℃。4.5恒温水浴锅：46℃士0.5℃。4.6厌氧发生装置。
放大镜和（或）菌落计数器。
4.8光学显微镜10×～100×。
4.9冰箱:2℃~8℃。
天平：感量0.1g。
全自动微生物鉴定系统VITEKcompact\。1）由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。1
SN/T0177—2011
培养基和试剂
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的分析实验室用水。5.1亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂（SC)：见A.1。5.2液体硫乙醇酸盐培养基：见A.25.3乳糖亚硫酸盐培养基（LS）)：见A.3。5.4
缓冲动力-硝酸盐培养基：见A.4。亚硝酸盐检测试剂：见A.5。
5.6锌粉。
乳糖-明胶培养基：见A.6。
蛋白陈水：见A.7。此内容来自标准下载网
VITEK2ANI生化鉴定卡2
检验程序
产气荚膜梭状芽孢杆菌检验程序见图1。检样
25！（或25ml.）样品-225ml.矫释液.均质10倍系列稀释
选择2个到;个适连续稀释的样品勾液，取1ml.孩种5C惊计数黑色菌落
「.S培养芳
动力硝酸盐试验
乳明胺试验
计算产气英膜校状芽孢朴菌数
图1产气英膜梭状芽孢杆菌的检验程序VIlEkcompact
由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。2
7操作步骤
7.1样品的稀释
SN/T 0177—2011
7.1.1无菌操作称取检样25g（mL）放人无菌均质器或均质袋中，加入225mL蛋白陈水，均质，制成1：10样品匀液
7.1.2吸取1：10样品匀液1mL，加入到9mL蛋白陈水中，混合均匀，制成1：100样品匀液。必要时，按此法将样品作进一步的10倍递增稀释。7.2接种与培养
7.2.1选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），每个稀释度分别吸取1mL样品匀液加人到两个无菌平皿内。7.2.2将10mL～15mL维持在44℃～47℃的SC琼脂倾注平皿，转动平皿使其混合均匀。待培养基凝固后，再覆盖上10mSC琼脂，待其完全固7.2.3翻转平板，放入厌氧罐或其他适宜容器中，厌氧环境下37℃士0.5℃下培养20h土2h。培养时间过长可能会导致平板颜色过黑。7.3平板计数
7.3.1选取菌落数<150CFU的平板，计数每个平板上的黑色菌落数，记录稀释倍数。7.3.2每个平板挑取5个典型或可疑菌落（小于5个时应全部挑选）进行确证。7.4乳糖-亚硫酸盐试验确证
7.4.1接种
将SC琼脂上的典型或可疑菌落接种到液体硫乙醇酸盐培养基中，厌氧环境下37℃土0.5℃下培养18h～24h。以无菌吸管移取硫乙醇酸盐培养物5滴加人到乳糖-亚硫酸盐（LS）培养基中。46℃水浴中需氧条件下培养18h~24h。
7.4.2观察
观察倒管内有否气泡产生及试管底部是否变黑（亚硫酸铁沉淀），若倒管中四分之一以上充满气体并且有黑色沉淀物则可判定为阳性。当倒管中产生的气体不足四分之一时，立即以无菌吸管从先前的LS培养基中吸取5滴加到另一LS培养基试管中.46℃水浴培养18h～24h，再次观察结果。7.4.3判读
在SC培养基中形成黑色菌落，同时LS培养基中反应阳性的细菌，可确认为产气英膜梭状芽孢杆菌，除此之外应视为阴性。
7.5动力-硝酸盐试验和乳糖-明胶液化试验确证7.5.1纯化
将SC琼脂上的典型或可疑菌落接种到液体硫乙醇酸盐培养基中，庆厌氧条件下37℃土0.5℃培养18h～24h，划线接种SC琼脂平板，再覆盖上10mLSC琼脂。待其完全凝固后，厌氧条件下37℃±0.5℃培养18h～24h，获得纯培养菌落。如有必要，可重复上述步骤，以获得完全分离的，典型的黑色菌落。
SN/T0177—2011
7.5.2接种
将挑取的纯菌落分别穿刺接种缓冲动力-硝酸盐培养基和乳糖-明胶培养基，厌氧条件下37℃土0.5℃培养24h。
7.5.3动力-硝酸盐试验观察
在透射光下检查缓冲动力-硝酸盐培养基试管中细菌沿穿刺线生长情况，有动力的菌株沿着穿刺线呈扩散生长；没有动力的菌株，仅沿穿刺线生长。分别加0.5mL试剂甲与0.2mL试剂乙于缓冲动力硝酸盐培养基中以检查亚硝酸盐的存在。出现橙红色者，表明有菌株将硝酸盐还原成了亚硝酸盐。若15min内未出现颜色变化，则添加少许金属锌粉，放置10min。如果加锌粉后出现橙红色，表明菌株不能还原硝酸盐。若出现微弱的亚硝酸盐反应（如：浅粉色）则应排除，因为产气荚膜梭状芽孢杆菌的反应比较剧烈而且迅猛。
7.5.4乳糖-明胶试验观察
发现产气和培养基变黄色，表明乳糖发酵并产酸。将试管置5℃冷却1h，检查明胶液化情况。若培养基仍为固态，则需37℃士0.5℃再培养24h，再次检查明胶是否液化。7.5.5判读
在SC琼脂上形成黑色菌落，无动力的，通常会将硝酸盐还原为亚硝酸盐，分解乳糖产酸产气，48h内能液化明胶的细菌，确认为产气荚膜梭状芽孢杆菌。7.6自动微生物鉴定系统确证
如选择VITEKcompact，可从SC平板上挑选可疑菌落，用生理盐水制成浊度适当的菌悬液，使用VITEKcompact全自动微生物鉴定系统进行鉴定7.7判定
任何符合7.4.3或者7.5.5的判读确证或者经7.6的鉴定为产气荚膜梭状芽孢杆菌的菌落，确认为产气荚膜梭状芽孢杆菌。
8结果报告
样品中产气荚膜梭状芽孢杆菌的计数·基于被证实为产气英膜梭状芽孢杆菌菌落的百分数。例如：10一*稀释的平板中，平均有85个菌落，由2个平板上选取的10个菌落中，有8个被证实为产气荚膜梭菌，那么每克食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌数，即为85X（8/10）×10000=680000CFU。根据计算结果报告检样中产气荚膜梭状芽抱杆菌数/g（mL）。4
亚硫酸盐-环丝氨酸(SC)琼脂
A.1.1基础培养基
胰蛋白
酵母膏
大豆陈
焦亚硫酸钠（NaSO，）
柠檬酸铁铵
A.1.2D-环丝氨酸溶液
附录A
（规范性附录）
培养基和试剂3》
9.0g~18.0g
SN/T0177—2011
溶解4gD-环丝氨酸于100mL水中，过滤除菌。存放于3℃士2℃，4周内用完。A.1.3制备
将基础培养基各成分加热溶解在1000mL水中，调节pH使灭菌后室温下pH7.6士0.2.分装到适宜容量的烧瓶中，121℃高压灭菌15min。倒平皿前将100mL基础培养基冷却到44℃～47℃.加过滤除菌的D-环丝氨酸溶液1mL。
当SC琼脂培养基平板被用来作纯化菌落时（动力-硝酸盐试验和乳糖-明胶试验）时，可直接取15mL冷却到44℃～47℃的基础培养基倾注平板。存放于5℃士3℃，可保存2星期。A.2硫乙醇酸盐液体培养基
胰酪陈
L-胱氨酸
D-葡萄糖
酵母膏
氯化钠
硫乙醇酸钠（或硫乙醇酸）
刃天青
0. 5g~2.0 g
将各成分加热溶解在1000mL水中，调节pH使灭菌后室温下pH7.1士0.2，将培养基分装适宜的试管内，每管10mL.121℃高压灭菌15min。在使用前，此培养基中应加热煮沸1min减氧。3）为保证培养基的质量.应按SN/T1538.1、SN/T1538.2的规定进行培养基的制备与性能测试。5
SN/T 0177—2011
A.3乳糖亚硫酸盐培养基（LS）
A.3.1基础培养基
胰酪陈
酵母膏
氯化钠
L-半胱氨酸盐酸盐
A.3.2焦亚硫酸钠溶液
将1.2g无水焦亚硫酸钠（NazS,O）溶解在100mL水中，过滤除菌，当天使用。A.3.3柠檬酸铁铵溶液
将1.0g柠檬酸铁铵溶解在100mL水中，过滤除菌，当天使用。A.3.4制备
将基础培养基各成分溶解在1000mL水中（如有必要可加热），调节pH使灭菌后室温下pH7.1士0.2.分装至装有倒置小导管的试管中，每管8mL.121℃高压灭菌15min。若非配制当天使用，则在临甩前需加热煮沸1min减氧。存放于3℃土2℃，4周内用完。临用时每管添加0.5mL焦亚硫酸钠溶液和0.5mL柠檬酸铁铵溶液，当天使用。缓冲动力-硝酸盐培养基
胰酪陈
牛肉膏
半乳糖
硝酸钾（KNO）
磷酸氢二钠（Na2HPO）
1.5g~5.0g
将各成分加热溶解在1000mL水中，调节pH使灭菌后室温下pH7.3土0.2，分装到适宜的试管内，每管10mL，121℃高压灭菌15min。若非配制当天使用，存放于5℃土3℃。临用前，沸水浴或者蒸汽加热15min，迅速冷却至培养温度。配制后4周内用完A.5
亚硝酸盐试剂
A.5.1试剂甲
在1000mL5mol/L乙酸中溶解对氨基苯磺酸8g；通过滤纸过滤；存放在密封性良好的有塞棕色瓶（最好备有滴头），温度保持在5℃土3℃。A.5.2试剂乙
在1000mL5mol/L乙酸中溶解α-苯酚5g。通过滤纸过滤；存放在密封性良好的有塞棕色瓶（最6
好备有滴头），温度保持在5℃士3℃。A.6
乳糖-明胶培养基
胰酪陈
酵母膏
磷酸氢二钠（Na,HPOt）
SN/T 0177—2011
将各成分加热溶解在1000mL水中，调节pH使灭菌后室温下pH7.5士0.2，加入乳糖和酚红。分装到适宜的试管内，每管10mL。121℃高压灭菌15min。若非配制当天使用，存放于5℃士3℃。临用前，沸水浴或者蒸汽加热15min，迅速冷却培养温度。配制后3周内用完。A.7
蛋白陈水
在1000mL水中溶解蛋白陈1.0g，调节pH使灭菌后室温下pH7.0士0.1。分装。121℃高压灭菌15min。
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代替SN0177—1992
出口食品中产气荚膜梭状
芽孢杆菌计数方法
Method for enumeration of clostridium perfringens in food for export2011-09-09发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2012-04-01实施
本标准按照GB/T1：1一2009给出的规则起草。本标准代替SN0177一1992《出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌检验方法》。本标准与SN0177一1992相比，主要技术变化如下：一变更为推荐性标准；
SN/T0177—2011
一检测方法部分参考了ISO7937：2004《食品和动物饲料微生物产气英膜梭状芽孢杆菌计数菌落计数技术》内容，在标准中增加乳糖-亚硫酸盐试验作为确证试验，减除了含卵黄的TSC琼脂和PY培养基的使用；
一补充了商品化的全自动微生物鉴定仪本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：顾鸣、韩伟、谢小珏、王赢、陈立。1范围
出口食品中产气荚膜梭状
芽抱杆菌计数方法
SN/T0177—2011
本标准规定了出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌（Clostridiumperfringens）的计数检验方法。本标准适用于出口食品中产气膜梭状芽孢杆菌的检验。规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
产气英膜梭状芽孢杆菌clostridiumperfringens在特定的选择性培养基上，细菌菌落生长皇现黑色特点（亚硫酸盐降解为硫化物而形成黑色沉淀物，并使菌落呈现黑色），分解乳糖产酸产气，48h内能液化明胶的细菌。4设备和材料
4.1无菌吸管：1.0mL和10.0mL,分刻度分别为0.1mL和1.0mL。4.2无菌培养皿：直径90mm。
4.3均质器及均质袋（或均质杯）。4.4
恒温培养箱或厌氧培养箱：37℃士0.5℃。4.5恒温水浴锅：46℃士0.5℃。4.6厌氧发生装置。
放大镜和（或）菌落计数器。
4.8光学显微镜10×～100×。
4.9冰箱:2℃~8℃。
天平：感量0.1g。
全自动微生物鉴定系统VITEKcompact\。1）由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。1
SN/T0177—2011
培养基和试剂
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的分析实验室用水。5.1亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂（SC)：见A.1。5.2液体硫乙醇酸盐培养基：见A.25.3乳糖亚硫酸盐培养基（LS）)：见A.3。5.4
缓冲动力-硝酸盐培养基：见A.4。亚硝酸盐检测试剂：见A.5。
5.6锌粉。
乳糖-明胶培养基：见A.6。
蛋白陈水：见A.7。此内容来自标准下载网
VITEK2ANI生化鉴定卡2
检验程序
产气荚膜梭状芽孢杆菌检验程序见图1。检样
25！（或25ml.）样品-225ml.矫释液.均质10倍系列稀释
选择2个到;个适连续稀释的样品勾液，取1ml.孩种5C惊计数黑色菌落
「.S培养芳
动力硝酸盐试验
乳明胺试验
计算产气英膜校状芽孢朴菌数
图1产气英膜梭状芽孢杆菌的检验程序VIlEkcompact
由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。2
7操作步骤
7.1样品的稀释
SN/T 0177—2011
7.1.1无菌操作称取检样25g（mL）放人无菌均质器或均质袋中，加入225mL蛋白陈水，均质，制成1：10样品匀液
7.1.2吸取1：10样品匀液1mL，加入到9mL蛋白陈水中，混合均匀，制成1：100样品匀液。必要时，按此法将样品作进一步的10倍递增稀释。7.2接种与培养
7.2.1选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），每个稀释度分别吸取1mL样品匀液加人到两个无菌平皿内。7.2.2将10mL～15mL维持在44℃～47℃的SC琼脂倾注平皿，转动平皿使其混合均匀。待培养基凝固后，再覆盖上10mSC琼脂，待其完全固7.2.3翻转平板，放入厌氧罐或其他适宜容器中，厌氧环境下37℃士0.5℃下培养20h土2h。培养时间过长可能会导致平板颜色过黑。7.3平板计数
7.3.1选取菌落数<150CFU的平板，计数每个平板上的黑色菌落数，记录稀释倍数。7.3.2每个平板挑取5个典型或可疑菌落（小于5个时应全部挑选）进行确证。7.4乳糖-亚硫酸盐试验确证
7.4.1接种
将SC琼脂上的典型或可疑菌落接种到液体硫乙醇酸盐培养基中，厌氧环境下37℃土0.5℃下培养18h～24h。以无菌吸管移取硫乙醇酸盐培养物5滴加人到乳糖-亚硫酸盐（LS）培养基中。46℃水浴中需氧条件下培养18h~24h。
7.4.2观察
观察倒管内有否气泡产生及试管底部是否变黑（亚硫酸铁沉淀），若倒管中四分之一以上充满气体并且有黑色沉淀物则可判定为阳性。当倒管中产生的气体不足四分之一时，立即以无菌吸管从先前的LS培养基中吸取5滴加到另一LS培养基试管中.46℃水浴培养18h～24h，再次观察结果。7.4.3判读
在SC培养基中形成黑色菌落，同时LS培养基中反应阳性的细菌，可确认为产气英膜梭状芽孢杆菌，除此之外应视为阴性。
7.5动力-硝酸盐试验和乳糖-明胶液化试验确证7.5.1纯化
将SC琼脂上的典型或可疑菌落接种到液体硫乙醇酸盐培养基中，庆厌氧条件下37℃土0.5℃培养18h～24h，划线接种SC琼脂平板，再覆盖上10mLSC琼脂。待其完全凝固后，厌氧条件下37℃±0.5℃培养18h～24h，获得纯培养菌落。如有必要，可重复上述步骤，以获得完全分离的，典型的黑色菌落。
SN/T0177—2011
7.5.2接种
将挑取的纯菌落分别穿刺接种缓冲动力-硝酸盐培养基和乳糖-明胶培养基，厌氧条件下37℃土0.5℃培养24h。
7.5.3动力-硝酸盐试验观察
在透射光下检查缓冲动力-硝酸盐培养基试管中细菌沿穿刺线生长情况，有动力的菌株沿着穿刺线呈扩散生长；没有动力的菌株，仅沿穿刺线生长。分别加0.5mL试剂甲与0.2mL试剂乙于缓冲动力硝酸盐培养基中以检查亚硝酸盐的存在。出现橙红色者，表明有菌株将硝酸盐还原成了亚硝酸盐。若15min内未出现颜色变化，则添加少许金属锌粉，放置10min。如果加锌粉后出现橙红色，表明菌株不能还原硝酸盐。若出现微弱的亚硝酸盐反应（如：浅粉色）则应排除，因为产气荚膜梭状芽孢杆菌的反应比较剧烈而且迅猛。
7.5.4乳糖-明胶试验观察
发现产气和培养基变黄色，表明乳糖发酵并产酸。将试管置5℃冷却1h，检查明胶液化情况。若培养基仍为固态，则需37℃士0.5℃再培养24h，再次检查明胶是否液化。7.5.5判读
在SC琼脂上形成黑色菌落，无动力的，通常会将硝酸盐还原为亚硝酸盐，分解乳糖产酸产气，48h内能液化明胶的细菌，确认为产气荚膜梭状芽孢杆菌。7.6自动微生物鉴定系统确证
如选择VITEKcompact，可从SC平板上挑选可疑菌落，用生理盐水制成浊度适当的菌悬液，使用VITEKcompact全自动微生物鉴定系统进行鉴定7.7判定
任何符合7.4.3或者7.5.5的判读确证或者经7.6的鉴定为产气荚膜梭状芽孢杆菌的菌落，确认为产气荚膜梭状芽孢杆菌。
8结果报告
样品中产气荚膜梭状芽孢杆菌的计数·基于被证实为产气英膜梭状芽孢杆菌菌落的百分数。例如：10一*稀释的平板中，平均有85个菌落，由2个平板上选取的10个菌落中，有8个被证实为产气荚膜梭菌，那么每克食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌数，即为85X（8/10）×10000=680000CFU。根据计算结果报告检样中产气荚膜梭状芽抱杆菌数/g（mL）。4
亚硫酸盐-环丝氨酸(SC)琼脂
A.1.1基础培养基
胰蛋白
酵母膏
大豆陈
焦亚硫酸钠（NaSO，）
柠檬酸铁铵
A.1.2D-环丝氨酸溶液
附录A
（规范性附录）
培养基和试剂3》
9.0g~18.0g
SN/T0177—2011
溶解4gD-环丝氨酸于100mL水中，过滤除菌。存放于3℃士2℃，4周内用完。A.1.3制备
将基础培养基各成分加热溶解在1000mL水中，调节pH使灭菌后室温下pH7.6士0.2.分装到适宜容量的烧瓶中，121℃高压灭菌15min。倒平皿前将100mL基础培养基冷却到44℃～47℃.加过滤除菌的D-环丝氨酸溶液1mL。
当SC琼脂培养基平板被用来作纯化菌落时（动力-硝酸盐试验和乳糖-明胶试验）时，可直接取15mL冷却到44℃～47℃的基础培养基倾注平板。存放于5℃士3℃，可保存2星期。A.2硫乙醇酸盐液体培养基
胰酪陈
L-胱氨酸
D-葡萄糖
酵母膏
氯化钠
硫乙醇酸钠（或硫乙醇酸）
刃天青
0. 5g~2.0 g
将各成分加热溶解在1000mL水中，调节pH使灭菌后室温下pH7.1士0.2，将培养基分装适宜的试管内，每管10mL.121℃高压灭菌15min。在使用前，此培养基中应加热煮沸1min减氧。3）为保证培养基的质量.应按SN/T1538.1、SN/T1538.2的规定进行培养基的制备与性能测试。5
SN/T 0177—2011
A.3乳糖亚硫酸盐培养基（LS）
A.3.1基础培养基
胰酪陈
酵母膏
氯化钠
L-半胱氨酸盐酸盐
A.3.2焦亚硫酸钠溶液
将1.2g无水焦亚硫酸钠（NazS,O）溶解在100mL水中，过滤除菌，当天使用。A.3.3柠檬酸铁铵溶液
将1.0g柠檬酸铁铵溶解在100mL水中，过滤除菌，当天使用。A.3.4制备
将基础培养基各成分溶解在1000mL水中（如有必要可加热），调节pH使灭菌后室温下pH7.1士0.2.分装至装有倒置小导管的试管中，每管8mL.121℃高压灭菌15min。若非配制当天使用，则在临甩前需加热煮沸1min减氧。存放于3℃土2℃，4周内用完。临用时每管添加0.5mL焦亚硫酸钠溶液和0.5mL柠檬酸铁铵溶液，当天使用。缓冲动力-硝酸盐培养基
胰酪陈
牛肉膏
半乳糖
硝酸钾（KNO）
磷酸氢二钠（Na2HPO）
1.5g~5.0g
将各成分加热溶解在1000mL水中，调节pH使灭菌后室温下pH7.3土0.2，分装到适宜的试管内，每管10mL，121℃高压灭菌15min。若非配制当天使用，存放于5℃土3℃。临用前，沸水浴或者蒸汽加热15min，迅速冷却至培养温度。配制后4周内用完A.5
亚硝酸盐试剂
A.5.1试剂甲
在1000mL5mol/L乙酸中溶解对氨基苯磺酸8g；通过滤纸过滤；存放在密封性良好的有塞棕色瓶（最好备有滴头），温度保持在5℃土3℃。A.5.2试剂乙
在1000mL5mol/L乙酸中溶解α-苯酚5g。通过滤纸过滤；存放在密封性良好的有塞棕色瓶（最6
好备有滴头），温度保持在5℃士3℃。A.6
乳糖-明胶培养基
胰酪陈
酵母膏
磷酸氢二钠（Na,HPOt）
SN/T 0177—2011
将各成分加热溶解在1000mL水中，调节pH使灭菌后室温下pH7.5士0.2，加入乳糖和酚红。分装到适宜的试管内，每管10mL。121℃高压灭菌15min。若非配制当天使用，存放于5℃士3℃。临用前，沸水浴或者蒸汽加热15min，迅速冷却培养温度。配制后3周内用完。A.7
蛋白陈水
在1000mL水中溶解蛋白陈1.0g，调节pH使灭菌后室温下pH7.0士0.1。分装。121℃高压灭菌15min。
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