SN/T 2870-2011
基本信息
标准号： SN/T 2870-2011
中文名称：中肠腺坏死杆状病毒病检疫技术规范
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准简介
SN/T 2870-2011 中肠腺坏死杆状病毒病检疫技术规范
SN/T2870-2011
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2870—2011
中肠腺坏死杆状病毒病检疫技术规范Quarantine protocol for baculoviral midgut gland necrosis2011-05-31发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2011-12-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本标准主要起草人：刘渤、陈莉莉、宗卉、罗卫、江育林。KANYKAcaWww.bzxZ.net
SN/T2870—2011
1范围
中肠腺坏死杆状病毒病检疫技术规范SN/T2870-—2011
本标准规定中肠腺坏死杆状病毒病（baculoviralmidgutglandnecrosis，BMN）的检测方法，是用临床症状作为初步诊断，压片和组织病理切片作为确诊的检疫方法本标准适用于中肠腺坏死杆状病毒病的诊断和鉴定，适用于本病的流行病学调查、检疫和监测。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3设备、材料及试剂
本标准所用试剂除特殊规定外均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682要求3.1石蜡组织切片机。
组织脱水机（使用手工脱水的缸）。3.3
石蜡包埋机。
切片染色机（使用手工染色所需的缸）。展片所用水浴锅。
烘片机。
正置显微镜。
载玻片、盖玻片等常规组织切片用具。Davidsons固定液（见A.1)。
石蜡（熔点52℃～54℃或50℃～52℃）：切片级乙醇：包括无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、80%乙醇、75%乙醇、50%乙醇二甲苯。
盐酸。
氢氧化钠。
苏木素染色液（见A.2)。
伊红染色液（见A.3）。
黏片剂（见A.4）。
4诊断方法
4.1BMNV的初步诊断方法
对于监测和检测BMNV，最好取幼体和早期的仔虾临床症状：幼体和仔虾患病后，首先可以看到白浊的中肠腺。随着疾病的发展，白浊化越来越明显：TTKANYKAa
SN/T2870—2011
越来越容易辨认。参见图B.1
4.2BMNV的确诊方法
4.2.1压片法
用新鲜对虾的中肠腺压片或涂片染色后在暗视野下检查能快速诊断BMN病毒感染。将组织置于载玻片上，用解剖刀将样品切碎，盖上盖玻片，在暗视野下观察。4.2.2组织病理学技术
4.2.2.1组织固定
4.2.2.1.1用DavidsonsAFA固定液固定欲检查的虾，准备足够的固定液，固定液体积应是欲固定的组织块总体积的10倍～15倍。推荐用DavidsonsAFA固定液，该固定液可迅速固定并减轻对虾的自溶变化，而且其中含的酸性成分可以除去表皮的石灰质4.2.2.1.2对虾幼体或仔虾，用细网筛或者吸管把所选的幼体或仔虾直接放入固定液。固定12h~24h，然后转入50%70%的乙醇中保存。4.2.2.1.3稍大的仔虾和很小的稚虾：用针或尖头镊子切去体表虾壳.把虾直接浸泡在固定液中，固定12h～24h，然后转人50%～70%的乙醇中保存。4.2.2.1.4更大的仔虾、稚虾和成虾，用注射器往虾头处注入固定液（用量为样品体积的5%～10%针头大小根据虾的大小决定，例如对仔虾和小稚虾可用27号针头）。首先注射中肠腺，要注射2个或多个位点，注射的量要足以使中肠腺变白或橘黄色；然后取出中肠腺浸泡在固定液中，固定12h～24h，然后转入50%～70%的乙醇中保存。4.2.2.2组织学标本的修整取材
4.2.2.2.1从50%或70%的乙醇保存液中取出固定好的标本，置于木头或塑料垫板上，根据标本的大小进行修整，确保目标组织能被有效切片。4.2.2.2.2幼体和仔虾：用擦镜纸将个体包好，放于脱水盒中进行脱水，包埋时去除擦镜纸，用热镊子调整标本在包埋器血中的位置进行包理。4.2.2.2.3小于3cm的幼虾：用单面刀片或解剖刀沿幼虾的中线右侧将标本纵剖两半。取包含中线的左侧进行脱水，包理时纵切面向下包理。4.2.2.2.4大于3cm的幼虾或亚成年虾：用单面刀片或解剖刀从对虾的头胸和腹节连接处切断.再将头胸沿中线右侧纵剖两半。取包含中线的左侧，切去步足80%的长度，剔除胃内容物；如果头胸长度大于1cm，切取包含胃部和肝胰腺部分的1cm以下的部分；如果厚度大于0.5cm，削去高出0.5cm的部分，再从不含中线的右侧头胸部斜切下鳃区，将切取的含中线左侧头胸部和切下的鳃区放入同一个脱水盒中进行脱水，包埋时将含中线左侧头胸部的纵切面向下，鳃区的纵切面向上，前后对错放人同一个包埋器血中包埋。
4.2.2.2.5大于8cm的虾，参照大于3cm的虾进行修整，按照长宽不超过1cm×1cm、厚度不超过0.5cm的要求，针对目标组织进行修整。4.2.2.3组织脱水
用梯度乙醇逐步脱水。流程如下：70%乙醇（2h）→80%乙醇（2h）→90%乙醇（90min）-→95%乙醇（45min）→95%乙醇（45min）→100%乙醇（30min）-→100%乙醇（30min）。2
TKANYKAa
4.2.2.4组织透明
1/2二甲苯十1/2乙醇混合液（30min）→二甲苯（30min）→二甲苯（30min）。4.2.2.5浸蜡与包埋
SN/T2870—2011
将透明好的材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1h～2h，再先后移人2个熔化的石蜡液中浸渍3h左右，浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行，以利石蜡浸入组织内。浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中，待蜡液表层凝固即迅速放人冷水中冷却，即做成含有组织块的蜡块。容器可用光亮且厚的纸折叠成纸盒或金属包埋框盒。通常石蜡采用熔点为52℃～54℃或50℃~52℃.可根据季节及操作环境温度来选用。4.2.2.6切片
包埋好的蜡块用片修成规整的方形或长方形，以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。切成4μm～6um厚的切片，对每个石蜡包埋块至少切取两块不连续的切片。4.2.2.7展片
在40℃的水浴锅中展片，用涂有黏片剂的载玻片捞出，置于平板烘片机上于45℃烘片2h4.2.2.8切片脱蜡及H-E染色
室温低于25℃时，应将贴有切片的载玻片置于30℃～40℃的干燥箱内加温后，再尽快转入二甲苯中脱蜡；或者将二甲苯稍加温而脱蜡·两法均可使切片脱蜡彻底。脱蜡后，人无水乙醇洗去二甲苯成分，为防止脱片，再按以下步骤进行梯度乙醇至水：二甲苯→二甲苯→1/2二甲苯十1/2乙醇混合液→100%乙醇-95%乙醇-→85%乙醇-→70%乙醇→50%乙醇→30%乙醇→苏木素染色液→0.01%盐酸→0.01%氢氧化钠→蒸馏水→30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→85%乙醇→伊红染液→95%乙醇100%乙醇→100%乙醇→1/2二甲苯十1/2乙醇混合液→二甲苯→二甲苯。4.2.2.9封片
滴加2滴中性树胶封片。
4.2.2.10镜检
明视野显微镜下观察。
5结果判定
5.1压片法：暗视野显微观察患病仔虾的中肠腺上皮细胞中的核，由于核中有大量病毒颗粒增加了折射和衍射特性，所以通过暗视野显微镜观察患病虾的中肠腺上皮细胞，可见到直径10um～30um、白色、轮廓清晰的圆形或长椭圆形的细胞核。用10%福尔马林固定组织块也能看到相似的结果，参见图B.2。
5.2H-E染色后，在普通显微镜（明视野）下观察。感染了BMNV的虾的中肠腺上皮细胞核呈明显肥大，比正常的要大2倍～5倍。并伴随进行性坏死。在不正常细胞核里可看到染色质向四周迁移、甚至核破裂。但是看不到任何包涵体（参见图B.3、图B.4）。而BP和MBV感染后会产生大量明显的三角形和圆形的包涵体。
TTKANYKACa
SN/T2870—2011
DavidsonsAFA固定液
95%乙醇
福尔马林
冰醋酸
蒸馏水(海水）
苏木素染色液（H&E染色用）
铵明矾
蒸馏水
碘酸钠
伊红染色液（H&E染色用）
80%乙醇
A.4黏片剂
寸录A
（规范性附录）
试剂配制
溶解后加人苯酚、甘油混匀，在棕色瓶中室温储存。TYKANYKAa
附录B
（资料性附录）
中肠腺坏死杆状病毒病
SN/T 2870—2011
B.1中肠腺坏死杆状病毒（baculovirusmidgutglandnecrosisvirus,BMNV)是一种有囊膜的杆状病毒，大小约为310nm×72nm。在分类上属C型杆状病毒，即不产生包涵体的核型杆状病毒。而对虾杆状病毒（BP)和斑节对虾杆状病毒（MBV)则是能在细胞核里分别产生三角形和圆形核型包涵体的A型杆状病毒。虽然这三种病毒的靶器官均是肝胰腺和中肠腺。但由于虾感染BMNV后肝胰腺变白浊而不透明，且肥大的核里没有包涵体，因此从组织病理上很容易把它们区分开。BMNV可引起健康的日本对虾幼体大量死亡。人工感染可使斑节对虾、中国对虾和短沟对虾生病。该病主要危害幼体（尤其是糠虾幼体）、仔虾（主要是p2到p12)和稚虾，有时也感染成虾。感染病毒的幼体8d～9d的累计死亡率为70%～100%。生病时水温一般是19℃~29℃。带病毒的亲虾是该病的主要传染源，病毒可随中肠腺上皮细胞的坏死而被排出体外，释放于水中而成为新的传染源。健康虾摄食病虾后即被感染B.2该病主要流行于亚洲。1971年在日本首次报道了BMN的流行，目前该病被认为是日本对虾苗种场的主要疾病。日本和韩国养殖及野生的日本对虾中都已发现有中肠腺坏死杆状病毒，菲律宾、澳大利亚和印度尼西业曾报道在斑节对虾体内也发现了BMNVB.3从1995年到2000年的世界动物卫生组织（OIE)公布的水生动物疾病名录中，均将该病列为重要的甲壳动物病害，但由于该病的流行范围等原因自2003年起OIE已将该病从水生动物的疾病名录中删除。蛋然该病流行范围小，但主要集中在亚洲·感染该病能引起多种对虾幼体大规模的死亡，并且近几年东南亚地区仍有该病发生。近年来中国水产品贸易不断加大，其中甲壳动物的贸易量也在迅猛增加，使该病传播和流行的机率也大大增加。因此，建立该病的检疫规程对于保护我国对虾养殖业并确保贸易安全仍然显得十分重要。在2005年农业部发布的第53号令中还将该病列为三类疫病。B.4根据E的诊断手册所推荐的检测方法，根据临床症状，即可以看到白浊不透明的肝胰腺和中肠腺。并且随着疾病的发展，白浊化越来越明显来进行初步诊断。而确诊可以用印片法在暗视野下观察，或者用组织病理学方法制备石蜡切片并染色后在光镜下观察虾的肝胰腺上皮细胞，能看到有肥大且没有包涵体的核（比正常的核要大2倍～5倍）来完成。B.5对用消毒剂杀BMNV效果的研究显示，该病毒可被5×10-的氯，25×10-的碘、氯化苯甲烃胺（芋烷胺）、氯化芋甲乙氧胺和0.5%的福尔马林灭活。但上述浓度的溶液对于对虾幼体有毒性，因此没有一种消毒剂能实际用于虾卵孵化中清除BMNV感染。用清洁海水清洗无节幼体或受精卵以清除粪便是生产无BMNV虾苗的较好方法。图B.1为患BMN的日本对虾苗在暗视野的光镜下观察，箭头是呈白浊的坏死肝胰腺。图B.2为感染了BMNV的对虾苗中肠腺压片的暗视野照片，可见白色、轮廓清晰的圆形或长椭圆形的肥大的上皮细胞核。
图B.3为被BMNV感染的虾苗肝胰腺切片。坏死的上皮细胞的细胞核肿大。几乎占据了整个细胞。
图B.4为高倍放大的切片。在细胞核里看不到细胞核。TTKANYKAa
SN/T 2870—2011
TTIKANYKAa
SN/T 2870-2011
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
中肠腺坏死杆状病毒病检疫技术规范SN/T28702011
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
网址spc.net.cn
电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*
开本880×12301/16
印张0.75
字数13千字
2011年11月第一版
2011年11月第一次印刷
印数1—1600
书号：155066·2-22673定价16.00元TIKANYKACA
1102082 /
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中肠腺坏死杆状病毒病检疫技术规范Quarantine protocol for baculoviral midgut gland necrosis2011-05-31发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2011-12-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本标准主要起草人：刘渤、陈莉莉、宗卉、罗卫、江育林。KANYKAcaWww.bzxZ.net
SN/T2870—2011
1范围
中肠腺坏死杆状病毒病检疫技术规范SN/T2870-—2011
本标准规定中肠腺坏死杆状病毒病（baculoviralmidgutglandnecrosis，BMN）的检测方法，是用临床症状作为初步诊断，压片和组织病理切片作为确诊的检疫方法本标准适用于中肠腺坏死杆状病毒病的诊断和鉴定，适用于本病的流行病学调查、检疫和监测。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3设备、材料及试剂
本标准所用试剂除特殊规定外均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682要求3.1石蜡组织切片机。
组织脱水机（使用手工脱水的缸）。3.3
石蜡包埋机。
切片染色机（使用手工染色所需的缸）。展片所用水浴锅。
烘片机。
正置显微镜。
载玻片、盖玻片等常规组织切片用具。Davidsons固定液（见A.1)。
石蜡（熔点52℃～54℃或50℃～52℃）：切片级乙醇：包括无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、80%乙醇、75%乙醇、50%乙醇二甲苯。
盐酸。
氢氧化钠。
苏木素染色液（见A.2)。
伊红染色液（见A.3）。
黏片剂（见A.4）。
4诊断方法
4.1BMNV的初步诊断方法
对于监测和检测BMNV，最好取幼体和早期的仔虾临床症状：幼体和仔虾患病后，首先可以看到白浊的中肠腺。随着疾病的发展，白浊化越来越明显：TTKANYKAa
SN/T2870—2011
越来越容易辨认。参见图B.1
4.2BMNV的确诊方法
4.2.1压片法
用新鲜对虾的中肠腺压片或涂片染色后在暗视野下检查能快速诊断BMN病毒感染。将组织置于载玻片上，用解剖刀将样品切碎，盖上盖玻片，在暗视野下观察。4.2.2组织病理学技术
4.2.2.1组织固定
4.2.2.1.1用DavidsonsAFA固定液固定欲检查的虾，准备足够的固定液，固定液体积应是欲固定的组织块总体积的10倍～15倍。推荐用DavidsonsAFA固定液，该固定液可迅速固定并减轻对虾的自溶变化，而且其中含的酸性成分可以除去表皮的石灰质4.2.2.1.2对虾幼体或仔虾，用细网筛或者吸管把所选的幼体或仔虾直接放入固定液。固定12h~24h，然后转入50%70%的乙醇中保存。4.2.2.1.3稍大的仔虾和很小的稚虾：用针或尖头镊子切去体表虾壳.把虾直接浸泡在固定液中，固定12h～24h，然后转人50%～70%的乙醇中保存。4.2.2.1.4更大的仔虾、稚虾和成虾，用注射器往虾头处注入固定液（用量为样品体积的5%～10%针头大小根据虾的大小决定，例如对仔虾和小稚虾可用27号针头）。首先注射中肠腺，要注射2个或多个位点，注射的量要足以使中肠腺变白或橘黄色；然后取出中肠腺浸泡在固定液中，固定12h～24h，然后转入50%～70%的乙醇中保存。4.2.2.2组织学标本的修整取材
4.2.2.2.1从50%或70%的乙醇保存液中取出固定好的标本，置于木头或塑料垫板上，根据标本的大小进行修整，确保目标组织能被有效切片。4.2.2.2.2幼体和仔虾：用擦镜纸将个体包好，放于脱水盒中进行脱水，包埋时去除擦镜纸，用热镊子调整标本在包埋器血中的位置进行包理。4.2.2.2.3小于3cm的幼虾：用单面刀片或解剖刀沿幼虾的中线右侧将标本纵剖两半。取包含中线的左侧进行脱水，包理时纵切面向下包理。4.2.2.2.4大于3cm的幼虾或亚成年虾：用单面刀片或解剖刀从对虾的头胸和腹节连接处切断.再将头胸沿中线右侧纵剖两半。取包含中线的左侧，切去步足80%的长度，剔除胃内容物；如果头胸长度大于1cm，切取包含胃部和肝胰腺部分的1cm以下的部分；如果厚度大于0.5cm，削去高出0.5cm的部分，再从不含中线的右侧头胸部斜切下鳃区，将切取的含中线左侧头胸部和切下的鳃区放入同一个脱水盒中进行脱水，包埋时将含中线左侧头胸部的纵切面向下，鳃区的纵切面向上，前后对错放人同一个包埋器血中包埋。
4.2.2.2.5大于8cm的虾，参照大于3cm的虾进行修整，按照长宽不超过1cm×1cm、厚度不超过0.5cm的要求，针对目标组织进行修整。4.2.2.3组织脱水
用梯度乙醇逐步脱水。流程如下：70%乙醇（2h）→80%乙醇（2h）→90%乙醇（90min）-→95%乙醇（45min）→95%乙醇（45min）→100%乙醇（30min）-→100%乙醇（30min）。2
TKANYKAa
4.2.2.4组织透明
1/2二甲苯十1/2乙醇混合液（30min）→二甲苯（30min）→二甲苯（30min）。4.2.2.5浸蜡与包埋
SN/T2870—2011
将透明好的材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1h～2h，再先后移人2个熔化的石蜡液中浸渍3h左右，浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行，以利石蜡浸入组织内。浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中，待蜡液表层凝固即迅速放人冷水中冷却，即做成含有组织块的蜡块。容器可用光亮且厚的纸折叠成纸盒或金属包埋框盒。通常石蜡采用熔点为52℃～54℃或50℃~52℃.可根据季节及操作环境温度来选用。4.2.2.6切片
包埋好的蜡块用片修成规整的方形或长方形，以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。切成4μm～6um厚的切片，对每个石蜡包埋块至少切取两块不连续的切片。4.2.2.7展片
在40℃的水浴锅中展片，用涂有黏片剂的载玻片捞出，置于平板烘片机上于45℃烘片2h4.2.2.8切片脱蜡及H-E染色
室温低于25℃时，应将贴有切片的载玻片置于30℃～40℃的干燥箱内加温后，再尽快转入二甲苯中脱蜡；或者将二甲苯稍加温而脱蜡·两法均可使切片脱蜡彻底。脱蜡后，人无水乙醇洗去二甲苯成分，为防止脱片，再按以下步骤进行梯度乙醇至水：二甲苯→二甲苯→1/2二甲苯十1/2乙醇混合液→100%乙醇-95%乙醇-→85%乙醇-→70%乙醇→50%乙醇→30%乙醇→苏木素染色液→0.01%盐酸→0.01%氢氧化钠→蒸馏水→30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→85%乙醇→伊红染液→95%乙醇100%乙醇→100%乙醇→1/2二甲苯十1/2乙醇混合液→二甲苯→二甲苯。4.2.2.9封片
滴加2滴中性树胶封片。
4.2.2.10镜检
明视野显微镜下观察。
5结果判定
5.1压片法：暗视野显微观察患病仔虾的中肠腺上皮细胞中的核，由于核中有大量病毒颗粒增加了折射和衍射特性，所以通过暗视野显微镜观察患病虾的中肠腺上皮细胞，可见到直径10um～30um、白色、轮廓清晰的圆形或长椭圆形的细胞核。用10%福尔马林固定组织块也能看到相似的结果，参见图B.2。
5.2H-E染色后，在普通显微镜（明视野）下观察。感染了BMNV的虾的中肠腺上皮细胞核呈明显肥大，比正常的要大2倍～5倍。并伴随进行性坏死。在不正常细胞核里可看到染色质向四周迁移、甚至核破裂。但是看不到任何包涵体（参见图B.3、图B.4）。而BP和MBV感染后会产生大量明显的三角形和圆形的包涵体。
TTKANYKACa
SN/T2870—2011
DavidsonsAFA固定液
95%乙醇
福尔马林
冰醋酸
蒸馏水(海水）
苏木素染色液（H&E染色用）
铵明矾
蒸馏水
碘酸钠
伊红染色液（H&E染色用）
80%乙醇
A.4黏片剂
寸录A
（规范性附录）
试剂配制
溶解后加人苯酚、甘油混匀，在棕色瓶中室温储存。TYKANYKAa
附录B
（资料性附录）
中肠腺坏死杆状病毒病
SN/T 2870—2011
B.1中肠腺坏死杆状病毒（baculovirusmidgutglandnecrosisvirus,BMNV)是一种有囊膜的杆状病毒，大小约为310nm×72nm。在分类上属C型杆状病毒，即不产生包涵体的核型杆状病毒。而对虾杆状病毒（BP)和斑节对虾杆状病毒（MBV)则是能在细胞核里分别产生三角形和圆形核型包涵体的A型杆状病毒。虽然这三种病毒的靶器官均是肝胰腺和中肠腺。但由于虾感染BMNV后肝胰腺变白浊而不透明，且肥大的核里没有包涵体，因此从组织病理上很容易把它们区分开。BMNV可引起健康的日本对虾幼体大量死亡。人工感染可使斑节对虾、中国对虾和短沟对虾生病。该病主要危害幼体（尤其是糠虾幼体）、仔虾（主要是p2到p12)和稚虾，有时也感染成虾。感染病毒的幼体8d～9d的累计死亡率为70%～100%。生病时水温一般是19℃~29℃。带病毒的亲虾是该病的主要传染源，病毒可随中肠腺上皮细胞的坏死而被排出体外，释放于水中而成为新的传染源。健康虾摄食病虾后即被感染B.2该病主要流行于亚洲。1971年在日本首次报道了BMN的流行，目前该病被认为是日本对虾苗种场的主要疾病。日本和韩国养殖及野生的日本对虾中都已发现有中肠腺坏死杆状病毒，菲律宾、澳大利亚和印度尼西业曾报道在斑节对虾体内也发现了BMNVB.3从1995年到2000年的世界动物卫生组织（OIE)公布的水生动物疾病名录中，均将该病列为重要的甲壳动物病害，但由于该病的流行范围等原因自2003年起OIE已将该病从水生动物的疾病名录中删除。蛋然该病流行范围小，但主要集中在亚洲·感染该病能引起多种对虾幼体大规模的死亡，并且近几年东南亚地区仍有该病发生。近年来中国水产品贸易不断加大，其中甲壳动物的贸易量也在迅猛增加，使该病传播和流行的机率也大大增加。因此，建立该病的检疫规程对于保护我国对虾养殖业并确保贸易安全仍然显得十分重要。在2005年农业部发布的第53号令中还将该病列为三类疫病。B.4根据E的诊断手册所推荐的检测方法，根据临床症状，即可以看到白浊不透明的肝胰腺和中肠腺。并且随着疾病的发展，白浊化越来越明显来进行初步诊断。而确诊可以用印片法在暗视野下观察，或者用组织病理学方法制备石蜡切片并染色后在光镜下观察虾的肝胰腺上皮细胞，能看到有肥大且没有包涵体的核（比正常的核要大2倍～5倍）来完成。B.5对用消毒剂杀BMNV效果的研究显示，该病毒可被5×10-的氯，25×10-的碘、氯化苯甲烃胺（芋烷胺）、氯化芋甲乙氧胺和0.5%的福尔马林灭活。但上述浓度的溶液对于对虾幼体有毒性，因此没有一种消毒剂能实际用于虾卵孵化中清除BMNV感染。用清洁海水清洗无节幼体或受精卵以清除粪便是生产无BMNV虾苗的较好方法。图B.1为患BMN的日本对虾苗在暗视野的光镜下观察，箭头是呈白浊的坏死肝胰腺。图B.2为感染了BMNV的对虾苗中肠腺压片的暗视野照片，可见白色、轮廓清晰的圆形或长椭圆形的肥大的上皮细胞核。
图B.3为被BMNV感染的虾苗肝胰腺切片。坏死的上皮细胞的细胞核肿大。几乎占据了整个细胞。
图B.4为高倍放大的切片。在细胞核里看不到细胞核。TTKANYKAa
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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
中肠腺坏死杆状病毒病检疫技术规范SN/T28702011
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开本880×12301/16
印张0.75
字数13千字
2011年11月第一版
2011年11月第一次印刷
印数1—1600
书号：155066·2-22673定价16.00元TIKANYKACA
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