SN/T 3649-2013 饲料中氟喹诺酮类药物含量的检测方法 液相色谱-质谱质谱法 SN/T3649-2013 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3649—2013
饲料中氟喹诺酮类药物含量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法
Determination of fluoroquinolones in feedstuff-LC-MS/MSmethod
2013-08-30发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2014-03-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。SN/T3649—2013
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国产东出人境检验检疫局本标准主要起草人：昊映璇、林峰、林海丹、部琳智。1范围
饲料中氟喹诺酮类药物含量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法
SN/T3649—2013
本标准规定了饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、单诺沙星、麻保沙星、沙拉沙星、司帕沙星双氟沙星、奥比沙星、氟罗沙星洛美沙和依诺沙原的制样液相色谱-质谱/质谱方法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂顶混合饲料中恩诺砂量、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙
星、单诺沙星、麻保沙星、沙拉沙星、司帕沙星、双氟沙星、奥比沙星、氟罗沙星、洛美沙星和依诺沙星的检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规
格和验方法
GB/T14699.1、饲料采样
3样品制备
按GB/T14699.1规定，取有代表性的样品，四分法缩减至纳200g经粉碎，全部过1mm孔筛，混装人磨口瓶中备用。制样操作过程中应防止样品受到污
4方法提要
二甲基甲酰胺-0.
饲料中氟诺酮类药物用N,N-
mol/L盐酸溶液提取，提取液经OasisHLB固相萃取小柱净化，液相色谱-质谱/质谱法测定，外标法定量。5试剂和材料
除特别规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。5.1乙：HPLC级。
甲醇：HPLC级。
N,N-二甲基甲酰胺。
盐酸。
25%氨水。
甲酸：HPLC级（纯度≥98%）。
0.1mol/L盐酸溶液：移取8.3mL盐酸（5.4）至1000mL容量瓶中，加水至刻度，播勾备用。20%甲醇溶液：移取20mL甲醇（5.2）至100mL容量瓶中，加水至刻度，摇勺备用。氢水-甲醇溶液1十9）：吸取10mL25%氨水（5.5）与90mL甲醇（5.2）混合。1
SN/T3649--2013
5.105mmol/L甲酸溶液：准确移取96μL甲酸（5.6）至500mL容量瓶中，加水至刻度，播匀备用，5.11定容液：乙睛+甲醇+5mmol/L甲酸溶液（2+20+78）。量取2mL乙腈（5.1）.20mL甲醇(5.2）与78mL5mmol/L甲酸溶液（5.10）混合5.12标准物质：氟喹诺酮类药物的名称、分子式，CAS号、纯度参见附录A。5.13标准储备液：1000mg/L。分别准确称取适量氟喹诺酮类药物标准品，其中美沙星先用少量的水超声溶解，再用甲醇定容至100mL棕色容量瓶，其余的氟唑诺酮类药物先用少量的N，N-二甲基甲酰胺（5.3）超声溶解，再用甲醇定容至100mL棕色容量瓶，一18℃以下避光保存。5.14氟喹诺酮类药物混合标准储备液：50mg/L。分别吸取适量标准储备液（5.13）至50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。该标准储备液于0℃4℃冰箱中避光保存。5.15氟喹诺酮类药物混合标准中间储备液：1.0mg/L吸取1mL标准储备液（5.14）放入50mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度。该标准储备液手0℃～4C冰箱中避光保存5.16标准工作液：根据需要吸取一定量的1.0mg/L氟喹诺酮类药物混合标准中间储备液（5.15）用空白样品提取液稀释成适当浓度的标准工作液，使用前配制。5.17OasisHLB固相萃取柱：200mg，6mL，或性能相当者。用前依次以6mL甲醇（5.2）、6mL水活化，保持柱子湿润。
6仪器和设备
液相色谱-质谱/质谱联用仪，配有电喷雾（ESID)源。6.2
高速离心机：转速大于或等于12000r/min。孔筛：孔径1mm，
涡旋振荡器。
超声波水浴。
固相萃取装置。
旋转蒸发仪。
0.2μm滤膜，有机系。
测定步骤
7.1提取
称取1g样品（准确至0.01g）至50mL比色管中，加人10mLN，N-二甲基甲酰胺（5.3），涡旋振荡2min，用0.1mol/L盐酸溶液（5.7)定容至刻度，振摇2min，水浴超声10min。静置后取上清液1.0mL至带寒离心管中，12000r/min高速离心10min。吸取0.5ml澄清液，加人已加有3mL水的试管中，涡旋振荡30s，待净化。
7.2净化
将7.1的待净化溶液过OasisHLB固相萃取柱（5.17），控制流速约1mL/min～2mL/min，依次用6mL水、6mL20%甲醇（5.8）淋洗，抽干，用6mL氨水-甲醇溶液（5.9）洗脱，收集洗脱液于25mL浓缩瓶，50℃旋转蒸发至干，用定容液（5.11）溶解残渣，并定容至适量的体积（配合饲料、浓缩饲料2.00mL，添加剂预混合饲料1.00mL）涡旋振荡1min，水浴超声5min（水温控制在25℃以下），过0.2μm滤膜（6.8），供液相色谱-质谱/质谱测定。当样品中的氟唾诺酮类药物超过线性范围时，可适当加大样品的稀释倍数。
7.3测定
液相色谱条件
液相色谱条件如下：
色谱柱：C柱，3um，150mm×2.1mm（内径）或性能相当者；柱温：40℃；
流动相：梯度洗脱条件见表1：
流速：0.25mL/min；
进样量：10μL。
梯度洗脱条件
质谱条件
质谱条件如下：
mL/min
离子源：电喷雾离子源；免费标准bzxz.net
扫描方式：正离子扫措；
检测方式：多反应监测模式（MRM)：乙腈
SN/T3649—2013
5mmol/L甲酸溶液
雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体：使用前应调节各气体流量d
以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、等电压值应优化至最佳灵敏度，参考质谱参数见附录C;
监测离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能参见附录B。e
液相色谱-质谱/质谱测定
定性测定
被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内；且样品谱图中被测组分监测离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的监测离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的最大偏差
SN/T3649—2013
7.3.3.2定量测定
根据试样中被测物的含量情况，选取响应值相近的标准工作液一起进行色谱分析。标准工作液和待测液中13种氟喹诺酮类药物的响应值应在仪器线性响应范围内。对标准工作液和样液等体积参插进行测定。在上述色谱条件下13种氟喹诺酮类药物的参考保留时间见附录B。13种窥喹诺酮类药物的标准溶液的多反应监测（MRM)色谱图参见图D.1。7.3.4空白试验
除不加试样外，均按上述步骤进行。7.3.5
空自样品提取
称取阴性样品1g（精确至0.01g），接7.1和7.2操件8结果计算
结果按式（1）计算，计算结果需扣除式中：
试样中13种氟喹诺葡美药
克（mg/kg）：
从标准工作曲线得到的13种氟喹诺酮类药物液浓度，单位为微克每升（ug/L)；样品溶液最终定容体积，单位为毫升（回）：样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）9测定低限、回收率
测定低限
本方法的测定低限为0.5mg/kg
9.2回收率
饲料中13种氟喹诺酮类药物的添加浓度及其回收率的实验数据见表3。表313种氟喹诺酮类药物的添加浓度及其回收率回收率/%
恩诺沙星
环丙沙量
诺氟沙星
氧氟沙星
单诺沙屋
麻保沙扇
75.4~103.5
83.2~100.0
73.8~107.6
84.4~102.6
75.7~107.9
添加水平
74.6~103.7
74.0~102.7
91.5~102.4
84.7~109.2
95.1~108.1
50mg/kg
75.7-96.9
71.3~93.9
84.6~104.9
75.8-104.4
85.1109.5
回收率/%
沙拉沙星
司帕沙量
双氟沙星
奥比沙星
罗沙星
洛美沙星
依诺钞星
78.4~91.3
78.0~98.7
83.4~101.4
71.8~111.4
69.2~105.6
表3（续）
添加水平
75.0~96.3
73.8~94.7
90.3~97.5
76.4~103.4
90.4~1193
86.0-105:5
82.6--89.9
SN/T3649—2013
50mg/kg
68.0~88.6
81.5106.1
77.0103.3
80.8~109.0
85.2~102.9
78.9~111.7
74.3~90.1
SN/T3649-2013
中文名称
思诸沙星
环丙沙属
诺氟沙星
氧氟沙星
甲磺酸单诺沙星
麻保沙屋
盐酸沙拉沙星
司帕沙星
盐酸双氟沙星
奥比沙星
氟罗沙星
盐酸洛美沙量
依诺沙量
附录A
（资料性附录）
相关信息
氟喹诺酮类药物的名称、分子式、CAS号英文名称
Enrofloxacin
Ciprofloxacin
Norfloxacin
Ofloxacin
Danofloxacin Mesylate
Marbofloxacin
Sarafloxscin Hydrochloride
Sparfloxaein
Difloxacin Hydrochloride
Orbifloxacin
Fleroxacin
Lomefloxacin Hydrochloride
Enoxacin
分子式
CuHFN,O
CarHiFNO
CHFN,O
CaHaFNO
CaoHaFN, OS
CHFN,O
CHrF,N,O,
CHaF,N,O
C.HF,N,O,XHCI
CuH,N,o,
ChHuFNgO
CHFN,O,XHCI
CasHFN,O
CAS号
93106-60-6
93107-08-5
70458-96-7
82419-36-1
19478-5-6
115550-35-1
98105-99-8
110871-86-8
91296-86-5
113617-63-3
79660-72-3
98079-52-8
74011-58-8
纯度/%
药物名称
恩诺沙星
环丙沙星
诺氟沙星
氧氟沙星
单诺沙星
麻保沙星
沙拉沙星
司帕沙星
双氟沙星
奥比沙星
氯罗沙星
洛美沙
依诺沙星
附录B
(资料性附录）
离子对、保留时间、去簇电压和碰撞能列表SN/T3649—2013
氟喹诺酮类药物的监测离子对、定量离子对、保留时间、去簇电压和碰撞能定性离子对
360/316
360/245
332/288
332/245
320/276
320/233
362/318
362/261
358/314
358/283
363/320
363/277
386/342
386/299
393/349
393/292
400/356
400/299
396/352
396/295
370/326
370/269
352/308
352/265
321/303
321/234
定量离子对
360/316
332/245
320/276
362/318
358/314
262/320
386/342
393/349
400/356
396/352
370/326
352/308
321/303
保留时间
去簇电压
碰撞气能量
SN/T3649—2013
质谱参数
雾化气/kPa
气帘气/kPa
辅助加热气/kPa
CAD硼摄气
辅助加热气温度/C
喷雾电压/V
附录C
（资料性附录）
质谱参数
参考质谱参数
参数值
Medium
非商业性声明：表C.1所列参数是用4000QTRAP质谱仪完成的，此处列函试验用仪器型号仅是为了提供参1
考，并不涉及商业日的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器，8
4-000-
：000
aayisa
说明：
附录D
（资料性附录）
色谱图
13种氟喹诺酮类药物标准溶液的多反应监测（MRM)色谱图200
家8条
恩诺沙星：
环丙沙星：
诺氟沙尾：
咨：000
氧氟沙星：
单诺沙星：
麻保沙星：
沙拉沙星；
H—司帕沙星：
双氟沙星：
1 1024
e：00.00
商#的
sdapkin
奥比沙星：
氟罗沙星，
洛美沙星；
SN/T36492013
依诺沙星。
13种氟喹诺酮类药物标准溶液的液相色谱-质谱/质谱重构离子色谱图（定量离子）9
SN/T3649-2013
Foreword
Thisstandard isdraftedaccordingtoGB/T1.1—2009Please note that some of the elements af this document may involve patents.The release agency ofthis documents does not assume responsibility for identifying these patentsThis standard was proposed by and was under the charged of National Regulatory Commission forCertificationandAccreditationThis standardwas drafted byGuangdong Entry-Exit Inspectionof thePeople's Republic of ChinaThis standard wasmainlydraftedbyWuyingxuan,Linfeng,Linhaidanand Shao linzhi.10
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