SN/T 4521-2016 出口番茄酱中链霉素和双氢链霉素的测定 液相色谱-质谱质谱法 SN/T4521-2016 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4521—2016
出口番茄酱中链霉素和双氢链霉素的测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of streptomycin and dihydrostreptomycin residues intomato paste for exportLC-MS/MS method2016-06-28发布
中华人民共和国
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国家质量监督检验检疫总局
2017-02-01实施
本标准按照GB/T1.1-—2009给出的规则起草。SN/T4521—2016
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国新疆出人境检验检疫局、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：巩志国、季新诚、苏敏、李世雨、谢文、王静静、齐冬琴、叶青。1范围
出口番茄酱中链霉素和双氢链霉素的测定液相色谱-质谱/质谱法
本标准规定厂番茄酱中链霉系和双氢链霉系的测定一一液相色谱-质谱/质谱法本标准适用于番茄酱中链霉素和双氢链霉素残留量的测定。2规范性引用文件
SN/T 4521—2016
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采用磷酸盐缓冲溶液提取链霉素和双氢链霉素，经硅藻土吸附和串联双柱固相萃取净化相结合的处理方法净化，用液相色谱-质谱/质谱仪进行测定和确证，外标法定量。4试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水4.1
甲醇和乙腈：色谱级。
甲酸：纯度98%，色谱级，
磷酸：优级纯。
乙二胺四乙酸二钠。
盐酸：优级纯。
磷酸二氢钾。
磷酸盐缓冲溶液（pH=4.8）：称取1.36g的磷酸二氢钾（KH,PO,）溶解到950mL水中，用1mol/L的盐酸（HCI)调节pH为4.8，然后加人0.15g的乙二胺四乙酸二钠，允分溶解，最后用水去定容到1000mL，
4.83%的中酸甲醇溶液：取3.0ml.的甲酸，用甲醇定容至100mL。4.91mol/L的盐酸：取8.5ml.的盐酸.用水定容至100mL，0乙睛-水（50+50，体积比，含0.1%甲酸）：量取50mL水和50ml乙腈混勾，并加人0.1mL4.10
甲酸。
4.110.15%的甲酸溶液：量取1.5mL甲酸，用水定容至1L。250%甲醇水溶液：量取50mL水和50mL甲醇混勾。4.12
4.13标准品：链霉素（Streptomycin）（CAS号57-92-1）和双氢链霉素（Dihydrostreptomycin）（CAS号128-46-1)；纯度：>98%，
4标准储备液：称取适量4.13标准品（精确至0.1mg），用0.3%的甲酸水配制成500mg/L的储备4.14
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液，于0℃~4℃冰箱中避光保存
5标准工作液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成：0.05mg/L，0.10mg/L，0.20mg/L，0.40mg/L0.80mg/L的标准系列工作溶液。现用现配，6固相萃取柱：反相固相萃取柱1:Sirala-X(500mg/6mL）或HLB(200mg/6ml）和弱阳离子交4.16
换固相萃取2.Strata-X-CW(2c0mg/6mL）或WCX(150mg/6ml.)。4.17
再生纤维素微孔滤膜：0.2um
硅藻土（40μm~60μm）。
仪器和设备
5.1液相色谱-质谱/质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI)。5.2pH计。
5.3固相萃取装置（SPE)。
5.4分析天平：感量为0.1mg和0.0lg。5.5振荡器。
5.6超声仪。
5.7离心机。
5.8涡旋仪。
5.9氮吹仪。
6试样制备和保存
从所取全部样品中取出有代表性样品约500g混合均勾，均分成两份，分别装人洁净容器作为试18℃冷冻保存。
样，密封，并标明标记。将试样于在抽样和制样的操作中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。7
测定步骤
7.1样品处理
7.1.1提取
称取5.00g样品，加入提取液磷酸盐缓冲溶液（4.7）于样品中，定容至20mL。涡旋仪上涡旋1min，超声30min，以8000r/min离心10min，离心后的上清液待后续净化。7.1.2初净化
取10.0mL7.1.1中离心后的上清液于15mL的离心管中，同时往离心管中加人1.0g的硅藻土，充分涡旋1min，超声5min，以6000r/min离心10min，离心后的上清液待再净化。7.1.3串联双柱再净化
依次用6.0ml.甲醇，6.0ml水分别活化反相固相萃取柱和弱阳离子交换固相萃取柱，待甲醇和水活化溶液全部流出后，用固相举取柱转接头串接好反相柱（在上部：柱1）和弱阳离子交换柱（在下部：柱2），取7.1.2中离心后待净化的上清液4.0mL加人柱1中，控制流速约为1.0mL/min通过两中接的2
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固相萃取柱。待净化液全部流出后，再加人6.0mL（每次加3.0mL，加2次）的提取液磷酸盐缓冲溶液（4.7）于柱1中，等待柱1中淋洗液全部流出后，从上部去除柱1，在柱2中依次加入6.0mL（每次加3.0mL，加2次）的水和3.0mL的50%甲醇水淋洗柱2，柱2中淋洗液全部流出后，抽干1.0min，用12.0mL（每次加4.0mL，加3次）的甲醇（含3%的甲酸）溶液洗脱柱2中的待测物，用15mL.试管接收洗脱液，洗脱液丁50℃水浴下氮气吹下，用1.0mL的50：50（乙睛：水，含0.1%甲酸）溶解残渣，充分涡旋1min，超声1min，过0.2μm的再生纤维素滤膜，滤液供ILC-MS/MS测定。7.2测定
7.2.1液相色谱和质谱条件
参见附录B的表B.1和表B.2
7.2.2液相色谱-质谱/质谱测定
根据样品中链素和双氢链霉素的含量情况，选定响应值适宜的标准工作液进行色谱分析，标准工作液应有5个浓度水平待测样液中链霉素和双氢链得素的响应值均应在仪器检测的工作曲线范围内。在7.2.1的色谱条件下，链霉素和双氢链霉素的参考保留时问约为7.3min，标准溶液的选择离子流图参见附录A中图A.I和图A.2
7.2.3液相色谱-质谱/质谱确证
按照7.2.1条件测定样品和标准工作液，如果检测的质量色谱峰保留时间马标准工作液一致，允许偏差小于2.5%：定性离子对的相对丰度与浓度相当标准工作液的相对丰度一致，相对半度允许偏差不超过表1中规定，则可判断样品中存在相应的被测物，表1
相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
7.3空自实验
定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差50
除不加试样外，均按7.1～7.2测定步骤进行8结果计算和表述
>20~50
-10~20
按式（1)分别计算试样中链霉素和双氢链霉素的残留量，计算结果需扣除空白值：cxVx1000
mx1000
式中：
试样中被测化合物残留量，单位为微克每千克（ug/kg）；从标准工作曲线上得到化合物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；样品的最终定容体积，单位为毫升（mL)；最终溶液代表的试样质量，单位为克（g）。10
...(1)
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定量限（LOQ)与回收率
测定低限
本方法番茄酱中链需素和双氢链霉素的定量限均为c.10mg/kg。9.2
回收率
番茄酱中添加不同浓度水平的回收率范围参见附录C中的表C.1。4
链霉素
双氢链霉素
TTTTTT
附录A
（资料性附录）
液相色谱-质谱/质谱图
时间/min
时间/min
空白番茄酱样品基质配制标准点的总离子流色谱图SN/T4521—2016
SN/T4521—2016
TTTTTT
时间/min
时间/mn
TTTTTTTT
时间/min
时间/min
582.1>263
3.37×10*
582.1>246
1.81×104
584.1>263
8.59×104
584.1>246
2.57×104
空白番茄酱样品基质配制标准点的提取离子流色谱图B.1
液相色谱条件
液相色谱条件如下：
附录B
（资料性附录）
LC-MS/MS系统参考条件
色谱柱：SpursilC18柱（150mm×4.6mm.3.0μm）：或相当者：柱温：30℃；
进样体积：5.0L；
流动相：A是水溶液（含0.15%甲酸），B是乙腈溶液梯度洗脱条件见表B.1;
流速：0.4ml/min。
液相色谱梯度洗脱条件
时间/min
B.2质谱条件
质谱条件如下：
流速/（mL/min）
离子源：电喷雾离了源（ESI)；扫描方式：正离子扫描（十）；检测方式：多反应监测（MRM)；毛细管电压：3.0kV；
离子源温度：115℃；
锥孔电压：55V；
去溶剂气流量：680L/h；
去溶剂气温度：380℃。
流动相A（水溶液，含0.15%甲酸）/%30免费标准bzxz.net
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流动相B(乙睛）/%
SN/T4521—2016
分析物
链霉素
双氢链霉素
定量离了
链霉素和双氢链霉素的质谱参数母离子
子离子
碰撞气能量
注：不同品牌的仪器，仪器参数可能存在差异，上述仪器条件供参考，测定时可根据实际仪器优化参数8
附录C
（资料性附录）
番茄酱中添加不同浓度水平的回收率番茄酱中添加不同浓度水平的回收率见表C.1。表c.1
待测物名称
链霉素
双氢链霉素
番茄酱中添加不同浓度水平的回收率添加浓度水平/（mg/kg）
SN/T4521—2016
回收率范围/%
70.8~82.7
75.1~85.2
74.8~-95.5
76.1~93.8
81.1--90.3
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