SN∕T 4547-2017
基本信息
标准号： SN∕T 4547-2017
中文名称：商品化试剂盒检测方法 大肠菌群和大肠杆菌菌 方法一
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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出版信息
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标准简介
SN∕T 4547-2017 商品化试剂盒检测方法 大肠菌群和大肠杆菌菌 方法一
SN∕T4547-2017
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4547--2017
代梵SN/118952007
商品化试剂盒检测方法
大肠菌群和大肠杆菌
Commercial kit method-Coliforms and escherichia coli-Test methodI
2017-05-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-12-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。SN/T4547—2017
本标准代替SN/T1896—2007食品中大肠菌群和大肠杆菌快速计数法PetrifilmTM测试片法》。与SN/T1896—2007相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：修改了标准的中英文名称
修改了附录A，
增加了计算公式，
删除了第二法PetrifilmTM测试片MPN法本标准由国家认证认可监备管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫、中国检验检疫科学研究院、大连启元科技发展有限公司。
本标准起草人：刘淑艳、颜怀玉、王刚、丁健、尹琪、蒋丹、孙晓飞、万超、吴斌、林长军、卢行安、周振亚
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T1896—2007。
1范围
商品化试剂盒检测方法
大肠菌群和大肠杆菌方法一
SN/T 4547—2017
本标准规定「食品中大肠杆菌/大肠菌群检验测试片（Petrifiltm1MF.cnli/ColiformCountPlate)的检测方法。
本标准适用丁食品和原料中人肠葡群和大肠杆菌的计数。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注口期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求3生物安全措施
为了保护实验室人员的安全和防止污染，应由具备资格的工作人员检测。所有培养物和废弃物的处理应按照GB19489有关规定执行。4技术摄要
大肠杠菌/大肠菌群检验测试片法是用一种预先制备的含有指示剂及冷水可溶性凝胶的培养基系统进行微生物培养的方法。
大肠杆菌/大肠菌群测试片含有VRB(VioleRedBile)培养基和-角萄糖苗酸酶指示剂，大肠杆菌产生的β葡萄枕者酸酶与培养基中的指示剂反应，显示为蓝色年带有气泡的特征菌落：大肠菌群细菌发酵乳糖产酸产气，与PH指示剂反应显示为红色并带有气泡的特征菌落5设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外其他设备和材料如下：恒温培养箱：36℃十1℃。
5.2电子天平：感量0.1g。
均质器（旋刀式或拍击式）或等效的设备。5.3
5.4pH计或精密pH试纸，
测试片压板。
5.6放大镜或/和菌落计数器。
6培养基和试剂
无菌生理盐水：见附录 A的 A,1。SN/T 4547.—2017
6.2磷酸盐缓冲液：见附录A的A.2。6.31mol/LNaOH：见附录A的A.3。6.41mol/LHCl.见附录A的A.4。
6.5大肠杆菌/人肠菌群测试片。本标准使用的试剂盒由美国3M有限公可生产，参考SN/T2775—2011和SN/I3266·-2012，由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会组织评价。具体评价结果参见附录B测试片储存于2℃～8℃，有效期18个月。7检测程序
捡测程序见图1。
25 g(mL) 样品 + 225 mL稀释液10倍梯度极释
选取2 个~3 个适宜连续稀释度的样品勺液，客取 1 ml.分别加入大肠杆菌/大肠菌群测试片36
计数蓝色带气泡的菌落
拟告大脑杆菌数
24 h±2 h或48 h上2h
计激蓝色带气泡和红色
带气抱的菌荐
报告大肠菌茵群数
图1大肠菌群和大肠杆菌测试片计数法检测程序8操作步骤
样品制备
8.1.1固体和半固体样品：称取25样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯中，80001/i1in~10000r/min均质1min2min或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中.用拍击式均质器拍打1min～2min.制成1：10的样品勾液。8.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25ImL样品置盛有225InL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混勾，制成1：10的样品匀液。样品勾液的pH值应为6.5~~7.5.pH值过低或过高时可分别采用1mol/I.NaUH调节或1mol/LHCl予以调节。如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或2℃～5℃不超过18h解冻。8.1.3用1ml.无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注人9IL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均勾，制成2
1：100的样品勾液。
SN/T4547—2017
8.1.4按8.1.3操作程序，依次制成10倍递增系列稀释样品勾液。每递增稀释1次，换用1支1ml.无菌吸管或吸头。从制备样品勾液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。8.2样品匀液的接种和培养
根据对样品的污染状况的估计及相关限量要求，选取2个~3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选摔原液），每个稀释度接种2张测试片，同时，分别吸取1ml.磷酸盐缓冲被或生理盐水加人两张测试片内作为空白对照。8.3接种
将大肠杆菌/大肠菌群测试片置丁平坦实验台面，揭开上层膜，用吸管吸取1ml.样品勾液垂直滴加在测试片的巾央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡生和上层膜直接落下，把压板（平面底朝下）放置在I层膜中央，轻轻地压下，使样液均勾覆盖于圆形的培养面积上。拿起压板，静置至少1min以使培养基凝固。
8.4培养
将测试片的透明面朝上，水平置于培养箱内，堆叠片数不超过20片，培养温度为36℃土1“，大肠菌群检测时培养时间为24h土2h，大肠杆菌检测时，如果是肉、家禽或水产品培养时间为24l士2h，如果是其他产品，培养时间为48h=2h。9结果计算与报告
9.1判读
9.1.1可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的大肠菌群或大肠杆菌菌落数量：菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU)表示。9.1.2在大脑杆菌，大肠菌群测试片上，蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌。蓝色有气泡和红色有气泡的菌落数之和为大肠菌群数。测试片圆形面积边缘上及边缘以外的菌落不做计数。出现人量气泡形成，不明的小菌落，培养区呈蓝色或暗红时：进一步稀释样品可获得准确的读数。9.2菌落计数与报告
9.2.1选取菌落数在15CFC～150CFU之间的测试片计数大畅菌群或大肠杆菌菌落总数，低于15CFU的测试片记录具体菌落数，大于150CFU的记录为多不计。每个稀释度的大肠菌群或大肠杆菌菌落数应采用两个测试片的平均数。9.2.2茗只有一个稀释度的测试片的菌落数在适宜计数范围内，计算两个测试片大肠菌群或大肠杆菌菌落数的平均值，再将平哟值乘以相应稀释倍数，作为每克（或每毫升样品中人肠菌群或大肠杆菌菌落总数结果。
9.2.3若有两个连续稀释度的测试片菌落数在适宜计数范围内，按式（1)计算。Zu
(ni+0.In:)d
式中．
样品中大肠菌群/大肠杆菌总数：+..
测试片（含适宜范围菌落数的测试片）大肠菌群或大肠杆菌菌落数之和：第·--稀释度（抵低稀释悟数）测试片个数：.(1)
SN/T4547--2017
第二稀释度（高稀释倍数)测试片个数；稀释因子(第一稀释度）。
9.2.4若所有稀释度测试片上的菌落数都小丁15CFU，则应按稀释度最低的测试片上的半均菌落数乘以稀释倍数计算。
9.2.5若所有稀释度（包括液体样品原液）的测试片上均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
9.2.6若所有稀释度的测试片菌落数均不在15CFU～150CFU之间，其中一部分小于15CFU或大于15UCFU时，则以最接近15CFU或150CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。计数菌落数大于150CFU的测试片时，可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后乘以20即为测试片上估算的菌落数（圆形生长面和为20cm9.3报告
9.3.1大肠杆菌/大肠菌群总数小手100FU时按四舍五人”原则修约，以整数报告。9.3.2大肠杆菌/大肠菌群总数人丁或等丁100CFU时.第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数：也可用10的指数形式来表示，鞍“四舍五人”原则修约后，采用两位有效数宁。
9.3.3若空口对照上有菌落生长，则此次检测结果无效9.3.4称重取样以CFU/g为单位报告体积取样以CFU/mL为单位报告S
A.1无菌生现盐水
A.1.1成分
氯化钠
蒸馏水
A.1.2制法
1000ml
附录A
（规范性录）
培养基和试剂
称取8.5g氟化钠溶于1000mL蒸增水中，121℃高压灭菌15min。磷酸盐缓冲液
A.2.1成分
磷酸一氢钾(KH,PO,)
蒸馏水
A.2.2制法
SN/T 4547—2017
贮存液：称取34.0名的磷酸二氧钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH,用蒸馏水稀释至1000
存于冰箱中
稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸增水稀释至100ml，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15nin。无蘭1mol/LNaoH
A.3.1成分
蒸馏水
1 000.0mL
称聆40g氢氧化钠溶于1000ml.蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。无菌1mol/LHCI
A.4.1成分
蒸馏水
SN/T45472017
A.4.2制法
移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释全10c0ml121高压灭菌15min附录B
（资料性附录）
SN/T4547—2017
大肠杆菌/大肠菌群检验测试片（3MPetrifiimTMAerobicCauntPlate)评价结果1）B.1
线性和准确度
表B,1给出了测试片方法和参考方法的线性关系。测试片方法和参考方法的线性关系表 B.1
食品种类
肉制品
家离类
角与海产制品
乳制品
食品基质
猪肉馆
牛肉馅
多春鱼
墨斗鱼
酪乳粉
小米面
检测项H
大肠菌驿
大肠菌
大豚菌群
大肠杆菌
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
人肠杆菌
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
大肠籽茵
大肠菌群
大肠杆菌
大肠蘭群
太肠杠幽
天旸菌群
大肠杠菌
大肠畔
大肠杆菌
log价范围
参考方法
1.00-2.04
1.00~1.38
1.58~2.82
1.00--1.34
2.72~3.11
2.46~2.70
1.00~3.46
1.00~1.40
2.63~3.65
3.13~3.52
测试片法
1.00--2.23
2.08~-2.89
2.26--2.62
1.00~3.32
1.[h)-~1.13
2.00~/5.61
1.00~-2.28
3.38~-3.74
T检验值
结果致
绪果一致
结果一致
结果一致
结果一致
结果一致
结果-致
结果致
结果一致
大肠菌群参考方法为GB4789.3—201C的第法，大肠杆菌参考方法为GB4789.38—2012的第二法，表R.2给出了5种食品线性方程和相关系数。1）本评价结果仅适川于3M公可生产的3MPelrifilm=大肠杆菌/大肠菌群检验测试片（3MPetrifilmAerobicCount Plate).
SN/T 4547—2017
食品种类（代表基体）
杂品(麦片）
乳制品（奶粉）
角类和海产品（多吞鱼）
家禽类（鸡肉）
肉制品（火腿）
所有食品
表.25种食品线性方程和相关系数类别
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
大肠杆菌
大肠蘭群
大肠杆菌
大陽菌群
大肠杆荫
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
大肠杆菌
测试片法菌落数的对数值：
参考法菌落数的对数值。
耐变性
log值范围
1.30-3.77
1.00-~3.34
1.00-3.71
1.00~-3.32
1.30~-3.73
1.00~3.72
1.00--3.34
L:00~3:77
线性方程
50.9121.+0.2978
y-0.787 3+0.298 3
-0.9871-00368
3=0.871 5r 10.74
y=0.867 5x+0.101 9
ym1.0073z
3=0.9959x
.952r+0.3401
y=0.9692 + 0.070 5
柑关系数（R\）
选用两个污染水平的大肠埃希氏菌（ATCC-25922）肺炎克冒伯氏菌肺炎亚种（CGMCC1.1736）和阪崎肠杆菌（ATCC29511），分别进行培养温度和培养时间两个变量的耐变性实验，经验证培养温度选4h条件下对检测结果的标准偏差与在重复性条件下得到的标择35℃和37℃，培养时间选择18h和2准偏差没有明显差别，表明说明书中对培养温度36%±1℃和培养时间24h士2h：统计分析结果见表B.3。
表B.3耐变性统计分析结果
测试结果
实验条件
37℃.18h
菌株添加
高浓度
低浓度
高浓度
低浓度
商浓度
低浓度
高浓度
低浓度
肺炎苑舌伯氏菌
肺炎亚种
大肠杆函
阪崎肠杆菌
平均值
标准偏萃
B.3批间差异
SN/T4547-2017
取3个不同批号的测试片对两个污染浓度的奶粉样品进行批间差异实验，3个不同批号测试片测试结果的标准偏差与在重复性条件下得到的标准偏差没有明显差别，说明不同批号产品无明显差异，结果见表B.4。
表B.4批间差异试验结果
高浓度
低涨度bzxz.net
大肠杆菌
大肠菌群
太肠杆菌
大肠蘭群
大肠扦菌
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
测定结巢(o值）
\/\，表示检测结果为10CFU/g，即低依度瘀加样品未棒出。2.74
平均假
标准偏差
SN/T4547-2017
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
商品化试剂直检测方法
大肠菌群和大肠杆菌
SN/T 4547—2017
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街申2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010）68533533
网址 spc.net.cn
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16
印张1
字数20千字
2018年5月第一版 2018年5月第一次印刷印数1—500
书号：155066：2-32955
5定价18.00元
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代梵SN/118952007
商品化试剂盒检测方法
大肠菌群和大肠杆菌
Commercial kit method-Coliforms and escherichia coli-Test methodI
2017-05-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-12-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。SN/T4547—2017
本标准代替SN/T1896—2007食品中大肠菌群和大肠杆菌快速计数法PetrifilmTM测试片法》。与SN/T1896—2007相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：修改了标准的中英文名称
修改了附录A，
增加了计算公式，
删除了第二法PetrifilmTM测试片MPN法本标准由国家认证认可监备管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫、中国检验检疫科学研究院、大连启元科技发展有限公司。
本标准起草人：刘淑艳、颜怀玉、王刚、丁健、尹琪、蒋丹、孙晓飞、万超、吴斌、林长军、卢行安、周振亚
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T1896—2007。
1范围
商品化试剂盒检测方法
大肠菌群和大肠杆菌方法一
SN/T 4547—2017
本标准规定「食品中大肠杆菌/大肠菌群检验测试片（Petrifiltm1MF.cnli/ColiformCountPlate)的检测方法。
本标准适用丁食品和原料中人肠葡群和大肠杆菌的计数。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注口期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求3生物安全措施
为了保护实验室人员的安全和防止污染，应由具备资格的工作人员检测。所有培养物和废弃物的处理应按照GB19489有关规定执行。4技术摄要
大肠杠菌/大肠菌群检验测试片法是用一种预先制备的含有指示剂及冷水可溶性凝胶的培养基系统进行微生物培养的方法。
大肠杆菌/大肠菌群测试片含有VRB(VioleRedBile)培养基和-角萄糖苗酸酶指示剂，大肠杆菌产生的β葡萄枕者酸酶与培养基中的指示剂反应，显示为蓝色年带有气泡的特征菌落：大肠菌群细菌发酵乳糖产酸产气，与PH指示剂反应显示为红色并带有气泡的特征菌落5设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外其他设备和材料如下：恒温培养箱：36℃十1℃。
5.2电子天平：感量0.1g。
均质器（旋刀式或拍击式）或等效的设备。5.3
5.4pH计或精密pH试纸，
测试片压板。
5.6放大镜或/和菌落计数器。
6培养基和试剂
无菌生理盐水：见附录 A的 A,1。SN/T 4547.—2017
6.2磷酸盐缓冲液：见附录A的A.2。6.31mol/LNaOH：见附录A的A.3。6.41mol/LHCl.见附录A的A.4。
6.5大肠杆菌/人肠菌群测试片。本标准使用的试剂盒由美国3M有限公可生产，参考SN/T2775—2011和SN/I3266·-2012，由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会组织评价。具体评价结果参见附录B测试片储存于2℃～8℃，有效期18个月。7检测程序
捡测程序见图1。
25 g(mL) 样品 + 225 mL稀释液10倍梯度极释
选取2 个~3 个适宜连续稀释度的样品勺液，客取 1 ml.分别加入大肠杆菌/大肠菌群测试片36
计数蓝色带气泡的菌落
拟告大脑杆菌数
24 h±2 h或48 h上2h
计激蓝色带气泡和红色
带气抱的菌荐
报告大肠菌茵群数
图1大肠菌群和大肠杆菌测试片计数法检测程序8操作步骤
样品制备
8.1.1固体和半固体样品：称取25样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯中，80001/i1in~10000r/min均质1min2min或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中.用拍击式均质器拍打1min～2min.制成1：10的样品勾液。8.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25ImL样品置盛有225InL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混勾，制成1：10的样品匀液。样品勾液的pH值应为6.5~~7.5.pH值过低或过高时可分别采用1mol/I.NaUH调节或1mol/LHCl予以调节。如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或2℃～5℃不超过18h解冻。8.1.3用1ml.无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注人9IL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均勾，制成2
1：100的样品勾液。
SN/T4547—2017
8.1.4按8.1.3操作程序，依次制成10倍递增系列稀释样品勾液。每递增稀释1次，换用1支1ml.无菌吸管或吸头。从制备样品勾液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。8.2样品匀液的接种和培养
根据对样品的污染状况的估计及相关限量要求，选取2个~3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选摔原液），每个稀释度接种2张测试片，同时，分别吸取1ml.磷酸盐缓冲被或生理盐水加人两张测试片内作为空白对照。8.3接种
将大肠杆菌/大肠菌群测试片置丁平坦实验台面，揭开上层膜，用吸管吸取1ml.样品勾液垂直滴加在测试片的巾央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡生和上层膜直接落下，把压板（平面底朝下）放置在I层膜中央，轻轻地压下，使样液均勾覆盖于圆形的培养面积上。拿起压板，静置至少1min以使培养基凝固。
8.4培养
将测试片的透明面朝上，水平置于培养箱内，堆叠片数不超过20片，培养温度为36℃土1“，大肠菌群检测时培养时间为24h土2h，大肠杆菌检测时，如果是肉、家禽或水产品培养时间为24l士2h，如果是其他产品，培养时间为48h=2h。9结果计算与报告
9.1判读
9.1.1可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的大肠菌群或大肠杆菌菌落数量：菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU)表示。9.1.2在大脑杆菌，大肠菌群测试片上，蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌。蓝色有气泡和红色有气泡的菌落数之和为大肠菌群数。测试片圆形面积边缘上及边缘以外的菌落不做计数。出现人量气泡形成，不明的小菌落，培养区呈蓝色或暗红时：进一步稀释样品可获得准确的读数。9.2菌落计数与报告
9.2.1选取菌落数在15CFC～150CFU之间的测试片计数大畅菌群或大肠杆菌菌落总数，低于15CFU的测试片记录具体菌落数，大于150CFU的记录为多不计。每个稀释度的大肠菌群或大肠杆菌菌落数应采用两个测试片的平均数。9.2.2茗只有一个稀释度的测试片的菌落数在适宜计数范围内，计算两个测试片大肠菌群或大肠杆菌菌落数的平均值，再将平哟值乘以相应稀释倍数，作为每克（或每毫升样品中人肠菌群或大肠杆菌菌落总数结果。
9.2.3若有两个连续稀释度的测试片菌落数在适宜计数范围内，按式（1)计算。Zu
(ni+0.In:)d
式中．
样品中大肠菌群/大肠杆菌总数：+..
测试片（含适宜范围菌落数的测试片）大肠菌群或大肠杆菌菌落数之和：第·--稀释度（抵低稀释悟数）测试片个数：.(1)
SN/T4547--2017
第二稀释度（高稀释倍数)测试片个数；稀释因子(第一稀释度）。
9.2.4若所有稀释度测试片上的菌落数都小丁15CFU，则应按稀释度最低的测试片上的半均菌落数乘以稀释倍数计算。
9.2.5若所有稀释度（包括液体样品原液）的测试片上均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
9.2.6若所有稀释度的测试片菌落数均不在15CFU～150CFU之间，其中一部分小于15CFU或大于15UCFU时，则以最接近15CFU或150CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。计数菌落数大于150CFU的测试片时，可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后乘以20即为测试片上估算的菌落数（圆形生长面和为20cm9.3报告
9.3.1大肠杆菌/大肠菌群总数小手100FU时按四舍五人”原则修约，以整数报告。9.3.2大肠杆菌/大肠菌群总数人丁或等丁100CFU时.第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数：也可用10的指数形式来表示，鞍“四舍五人”原则修约后，采用两位有效数宁。
9.3.3若空口对照上有菌落生长，则此次检测结果无效9.3.4称重取样以CFU/g为单位报告体积取样以CFU/mL为单位报告S
A.1无菌生现盐水
A.1.1成分
氯化钠
蒸馏水
A.1.2制法
1000ml
附录A
（规范性录）
培养基和试剂
称取8.5g氟化钠溶于1000mL蒸增水中，121℃高压灭菌15min。磷酸盐缓冲液
A.2.1成分
磷酸一氢钾(KH,PO,)
蒸馏水
A.2.2制法
SN/T 4547—2017
贮存液：称取34.0名的磷酸二氧钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH,用蒸馏水稀释至1000
存于冰箱中
稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸增水稀释至100ml，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15nin。无蘭1mol/LNaoH
A.3.1成分
蒸馏水
1 000.0mL
称聆40g氢氧化钠溶于1000ml.蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。无菌1mol/LHCI
A.4.1成分
蒸馏水
SN/T45472017
A.4.2制法
移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释全10c0ml121高压灭菌15min附录B
（资料性附录）
SN/T4547—2017
大肠杆菌/大肠菌群检验测试片（3MPetrifiimTMAerobicCauntPlate)评价结果1）B.1
线性和准确度
表B,1给出了测试片方法和参考方法的线性关系。测试片方法和参考方法的线性关系表 B.1
食品种类
肉制品
家离类
角与海产制品
乳制品
食品基质
猪肉馆
牛肉馅
多春鱼
墨斗鱼
酪乳粉
小米面
检测项H
大肠菌驿
大肠菌
大豚菌群
大肠杆菌
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
人肠杆菌
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
大肠籽茵
大肠菌群
大肠杆菌
大肠蘭群
太肠杠幽
天旸菌群
大肠杠菌
大肠畔
大肠杆菌
log价范围
参考方法
1.00-2.04
1.00~1.38
1.58~2.82
1.00--1.34
2.72~3.11
2.46~2.70
1.00~3.46
1.00~1.40
2.63~3.65
3.13~3.52
测试片法
1.00--2.23
2.08~-2.89
2.26--2.62
1.00~3.32
1.[h)-~1.13
2.00~/5.61
1.00~-2.28
3.38~-3.74
T检验值
结果致
绪果一致
结果一致
结果一致
结果一致
结果一致
结果-致
结果致
结果一致
大肠菌群参考方法为GB4789.3—201C的第法，大肠杆菌参考方法为GB4789.38—2012的第二法，表R.2给出了5种食品线性方程和相关系数。1）本评价结果仅适川于3M公可生产的3MPelrifilm=大肠杆菌/大肠菌群检验测试片（3MPetrifilmAerobicCount Plate).
SN/T 4547—2017
食品种类（代表基体）
杂品(麦片）
乳制品（奶粉）
角类和海产品（多吞鱼）
家禽类（鸡肉）
肉制品（火腿）
所有食品
表.25种食品线性方程和相关系数类别
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
大肠杆菌
大肠蘭群
大肠杆菌
大陽菌群
大肠杆荫
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
大肠杆菌
测试片法菌落数的对数值：
参考法菌落数的对数值。
耐变性
log值范围
1.30-3.77
1.00-~3.34
1.00-3.71
1.00~-3.32
1.30~-3.73
1.00~3.72
1.00--3.34
L:00~3:77
线性方程
50.9121.+0.2978
y-0.787 3+0.298 3
-0.9871-00368
3=0.871 5r 10.74
y=0.867 5x+0.101 9
ym1.0073z
3=0.9959x
.952r+0.3401
y=0.9692 + 0.070 5
柑关系数（R\）
选用两个污染水平的大肠埃希氏菌（ATCC-25922）肺炎克冒伯氏菌肺炎亚种（CGMCC1.1736）和阪崎肠杆菌（ATCC29511），分别进行培养温度和培养时间两个变量的耐变性实验，经验证培养温度选4h条件下对检测结果的标准偏差与在重复性条件下得到的标择35℃和37℃，培养时间选择18h和2准偏差没有明显差别，表明说明书中对培养温度36%±1℃和培养时间24h士2h：统计分析结果见表B.3。
表B.3耐变性统计分析结果
测试结果
实验条件
37℃.18h
菌株添加
高浓度
低浓度
高浓度
低浓度
商浓度
低浓度
高浓度
低浓度
肺炎苑舌伯氏菌
肺炎亚种
大肠杆函
阪崎肠杆菌
平均值
标准偏萃
B.3批间差异
SN/T4547-2017
取3个不同批号的测试片对两个污染浓度的奶粉样品进行批间差异实验，3个不同批号测试片测试结果的标准偏差与在重复性条件下得到的标准偏差没有明显差别，说明不同批号产品无明显差异，结果见表B.4。
表B.4批间差异试验结果
高浓度
低涨度bzxz.net
大肠杆菌
大肠菌群
太肠杆菌
大肠蘭群
大肠扦菌
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
大肠杆菌
大肠菌群
测定结巢(o值）
\/\，表示检测结果为10CFU/g，即低依度瘀加样品未棒出。2.74
平均假
标准偏差
SN/T4547-2017
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
商品化试剂直检测方法
大肠菌群和大肠杆菌
SN/T 4547—2017
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街申2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010）68533533
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中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16
印张1
字数20千字
2018年5月第一版 2018年5月第一次印刷印数1—500
书号：155066：2-32955
5定价18.00元
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