标准号：SN/T 5136-2019 标准名称：上旋齿蜗牛检疫鉴定方法 英文名称：Detection and identification of Helicodonta obvoluta Muller 1774) 标准格式：PDF 发布时间：2019-09-03 实施时间：2020-03-01 标准大小：13696K 标准介绍：中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 本标准规定了上旋齿蜗牛 Helicodonta obroluta(Mulr,1774)的检疫鉴定方法 本标准适用于上旋齿蜗牛的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注文件的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 SN/T3067-2011软体动物常规检疫规范 3术语与定义 SN/T3067-2011规定的以及下列术语和定义适用于本文件， 壳口缘部，按其位置又可划分为内唇、外脣、上唇、下唇、基唇和轴唇。外唇在幼螺时一般很薄，至成螺时逐渐加厚，或有时具齿 毛刺 hairs 贝壳的附属延伸物，有些种类的蜗牛会在体螺层上分泌长出细长的毛状刺物。毛刺在成熟时多会脱落，留下毛刺痕。 矢囊是蜗牛雌性生殖系统中一个藏有1枚或多枚中空的钙质或壳质骨针的肌肉质的囊。一般用长径与短径之比来描述矢囊的相对长度 恋矢 love dart 恋矢就是矢囊中的骨针，为蜗牛交配时刺激器官，一般一个矢囊含有1枚恋矢，恋矢的质地和形状

ICS65.020.01
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T51362019
上旋齿蜗牛检疫鉴定方法
Detection and identification of Helicodonta obvoluta (Miller,1774行业标准信息服务平台
2019-09-03发布
中华人民共和国海关总署
2020-03-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。SN/T5136—2019
本标准起草单位：中华人民共和国福州海关、中国地博物馆、中华人民共和国宁波海关、中华人民共和国杭州海关、福建省农业科学研究院。本标准主要起草人：周卫川、杨海芳、王沛、林阳武、崔俊霞、董文勇、吴志毅、吴宇芬行业标准信息服务平台
1范围
上旋齿蜗牛检疫鉴定方法
SN/T5136—2019
本标准规定了上旋齿蜗牛Helicodontaobuoluta（Muller，1774）的检疫鉴定方法。本标准适用于上旋齿蜗牛的检疫鉴定。规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注文件的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T3067-2011软体动物常规检疫规范3术语与定义
SN/T3067一2011规定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1
口唇lip
壳口缘部，按其位置又可划分为内唇、外唇、上唇、下唇、基唇和轴唇。外唇在幼螺时一般很薄，至成螺时逐渐加厚，或有时具齿。
毛刺hairs
贝壳的附属延伸物，有些种类的蜗牛会在体螺层上分泌长出细长的毛状刺物。毛刺在成熟时多会标准
脱落，留下毛刺痕。
矢囊dartsack
矢囊是蜗牛雌性生殖系统中一个藏有1枚或多枚中空的钙质或壳质骨针的肌肉质的囊。一般用长息服
径与短径之比来描述矢囊的相对长度。3.4
恋矢lovedart
恋失就是失囊中的骨针，为蜗牛交配时刺激器官，一般一个矢囊含有1枚态无，态矢的质地和形状常用于分类。
受精囊bursacopulatrix
蜗牛的受精器官由受精囊和受精囊柄组成，其中受精囊柄的形态和有无分支常用于分类鉴定。3.6
边缘verge
阴茎与阴茎本体交界处的圆锥状突起，该特征种间差异稳定，常作为种间鉴定的重要特征。3.7
壁柱pilaster
阴茎内壁上的柱状突起纹路，其伸展的方向和疏密程度常用于分类。SN/T5136—2019
4基本信息
学名：Helicodontaobvoluta（Muller，l774）异名:Helir obvoluta Muller,l774;Helicodonta langhofferiWagner,l9l2;Helicodonta obvolutaalbanicaWagner.1914
英文名：Cheesesnail
中文名：上旋齿蜗牛
分类地位：软体动物门Mollusca，腹足纲Gastropoda，柄眼目Stylommatophora，上旋齿蜗牛科HelicodontidaeKobelt，1904，上旋齿蜗牛属HelicodontaFerussac.1821。上旋齿蜗牛的近似种主要有H.angigyra（Rossmassler，1834）和H.wilhelminaeMaassen，1991。该蜗牛的其它信息参见附录A。
5原理
上旋齿蜗牛昼伏夜出，常隐藏在人们难以发现的地方，易于传播。其传播特点是不需要特定的寄主，凡接触过地面的物品都可传播。传播方式和途径是确定现场检疫方式的依据。贝壳形态、软体解剖和分子特征是实验室鉴定的主要依据6器具和试剂
6.1仪器和用具
仪器：体视显微镜、微型离心机、恒温金属浴、PCR仪、凝胶照相系统。用具：放大镜、手电筒、塑料封袋、广口标本瓶、4mm孔径土筛、小铁铲、游标卡尺、白瓷盘、培养血、镊子、剪刀、显微镊子、显微首刀、微针、解剖腊盘、标签、移液枪、1.5mL离心管、0.2mLPCR反应管。
6.2试剂
除另有规定外，所有试剂均为分析纯。7现场检疫
对来自疫区（参见附录A）的运输工具和货物实施重点查验。仔细检查运输工具、废塑科木条箱、原木、苗木、水果、蔬菜、花卉、未经加工的植物性材料等是否有蜗牛附着其上，上旋齿蜗牛昼伏夜出：光其要注意阴暗蔽光处的检查，用手电筒简仔细寻找蜗牛的行迹。上旋齿蜗牛爬行过后，会留下银灰色的丝节状粘液痕迹，这是判定是否有蜗牛污染的重要依据。发现蜗牛标本，随时装人塑料自封袋或标本瓶带回实验室做进一步的鉴定。发现盆景等携带土壤或其它细碎衬垫材料时，需过筛检查是否有卵或幼螺污染。8实验室鉴定
8.1测量、观察和解剖
用游标卡尺测量蜗牛贝壳的壳高和壳宽、卵粒直径。用肉眼或放大镜或体视显微镜仔细观察卵和2
螺的形态特征。
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将闷杀处理（参见10.1）后的标本，参照SN/T30672011中8.3.1进行软体解剖，分离出生殖系统。
8.2上旋齿蜗牛属HelicodontaFerussac，1821鉴定特征贝壳扁平，皇褐色至咖啡色。壳顶轻微下陷。胚螺层光滑。体螺层圆形，壳面密布不规则的辐射状刻纹和长约1mm的毛刺，成熟时常脱落。壳口适度向下倾斜，外唇反折。脐孔开放，较为宽大。8.3上旋齿蜗牛Helicodontaobvoluta（Miller，1774）鉴定特征8.3.1卵
圆球形，白色，直径2.3mm~2.4mm。8.3.2贝壳
8.3.2.1成螺
贝壳深棕色，螺旋部扁平，有5个～6个略凸起的螺层，壳顶稍微凹陷，贝壳表面通常覆盖长约1mm长的毛刺，成螺标本毛刺常脱落仅留痕迹。壳口折叠呈圆三角形是其典型特征，口缘上下两侧均较平扁，外唇百色外折，中部增厚形成聘牙或肼眠，在外观上中唇被折叠分成三个弯，内唇贴覆于体螺层上形成很薄的无色透明的肼眠部。脐孔开放，宽大，可透视，呈同心圆。壳高5mm～7mm，壳宽11mm~15mm（参见附录B中图B.1)。阿尔巴尼亚和黑山共和国的地理种群，贝壳通常较小，壳顶更为凹陷，各螺层增长更为迅速，毛刺短，约为其它种群1/3。壳口更圆，内侧没有齿状突，外侧也没有相应的凹槽。8.3.2.2幼螺
其形态与成螺相似，壳质薄，螺层少贝壳表面通常覆盖着1mm长的毛刺。8.3.3螺体
腹足淡黄色，颈部颜色较深。头部至腹足爬行时长度可达23mm~32mm（参见附录B中图B.2）信息
8.3.4生殖系统
阴茎鞘薄而透明，包被在阴茎与阴茎本体的表面。阴茎内分布业很粗纵向排列的壁柱，其中一根又短又宽，形成一个纵向的槽。壁柱的前端垫状增厚，表面有大量的圆坑，吉状增厚的壁柱背面有一个马鞍状突起，表面密布圆锥形的刺。这些结构形成了二个明显的瓣膜能够区分明茎的前端和未端。在瓣膜的后面，具有一个短小的分裂成两瓣的边缘。阴茎牵引肌从螺轴肌长出，插人阴茎本体末端。阴道细长，内侧平滑或布满不明显的纵向折叠。矢囊系统很特殊：仅见粘液腺2支，无失囊和受精囊卵圆形，受精囊柄中等长度，无分支（参见附录B中图B.3）。9结果评定
以贝壳形态为基本鉴定依据，结合螺体和生殖系统解部形态特征，并注意与近似种鉴别（参见附录C），对于贝壳特征典型的个体符合8.3.2鉴定为上旋齿蜗牛Helicodontaobuoluta（Muller，1774），对于贝壳特征有变异的个体，需同时符合8.3.2、8.3.3和8.3.4才能鉴定为上旋齿蜗牛Helicodontaob-voluta（Muller，1774）。单独查获的卵粒或幼螺.用COI基因进行序列鉴定（参见附录D），当检测样品3
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的DNA序列与已知上旋齿蜗牛的DNA序列同源性≥95%时，确定为上旋齿蜗牛的疑似样品，需要通过孵化和饲养（见SN/T3067—2011中8.4饲养鉴定）为成螺后，再做进一步的形态鉴定。10标本处理和保存
10.1标本处理
将蜗牛置于盛满水的瓶中，盖上瓶盖，进行闷杀，蜗牛在慢慢室息的死亡过程中，逐渐伸展身体；或逐渐加入少量硫酸镁，进行麻醉间杀。将闷杀后伸展的蜗牛标本置于无水乙醇中浸泡1d～2d，然后在75%的乙醇溶液中固定，每隔1d～2d换1次乙醇溶液，共换3次～4次，便可长期保存于75%的乙醇溶液中。10.2保存时间
经处理后的标本，至少妥善保存6个月，并注明时间、产地、寄主、采集人等信息。行业标准信息服务平台
A.1寄主
附录A
（资料性附录）
上旋齿蜗牛的寄主、地理分布及其他信息SN/T5136—2019
杂食性，以各种绿色植物为食。幼螺以腐植质、植物的幼苗和嫩芽为食；成螺取食各种绿色植物的茎、叶和果实，喜食蔬菜和花卉等园艺作物A.2地理分布
上旋齿蜗牛分布遍及欧洲的大部分国家，从西班牙西北部到塞尔维亚都有分布，包括法国、瑞士、列支敦斯登、比利时、卢森堡、荷兰、德国中南部、奥地利、捷克、斯洛伐克、波兰、匈牙利、斯洛文尼亚、克罗地亚、意天利、波斯尼亚和黑塞哥维那、塞尔维亚等国家和地区，英国东南部和德国北部分布着早期遗留下来的隔离种群。
A,3生物学与危害性
上旋齿蜗牛主要危害作物的幼苗和生长期的嫩芽，导致缺苗断垒，减低产量，污染产品，同时传播人畜共患寄生虫病，威胁人畜健康。该蜗牛适应性强，可以通过休眠方式度过恶劣环境，因此，防治上也较为困难。
上旋齿蜗牛喜欢生活在树林中的枯枝落叶层下和石缝中。在法国一年一代，5月～7月是该蜗牛交配产卵的高峰期，成螺交配后2天～3天产卵，一次药20粒，3周后孵化为幼螺，幼螺1.5个螺层，4个～6个月后成熟。在波兰二年一代，成螺二股产卵于4mm～6mm的腐木深处，5月～6月间一次可产卵15粒20粒，而9月一次仅产1粒卵，大约15大～30天后孵化为幼螺，幼螺仅为1个螺层，6个～信息服务平台
12个月后成熟。一般10月末分泌厚的膜魔封住壳口人冬眠期，至翌年4月又重新开始活动。5
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附录B
（资料性附录）
上旋齿蜗牛形态特征
上旋齿蜗牛成螺贝壳形态
（A：侧面观；B：背面观；C：腹面观）标准信息服务平
图B.2上旋齿蜗牛成螺形态（https：//inpn.mnhn.fr/）MG
图B.3上定齿生殖系统（Schileyko，2005）Pil
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MG：粘液腺；P：阴茎；PR：阴茎牵引肌，C：受精毫柄；BC：受精囊；VD：输精管：V：边缘信息服务平台
PS：阴茎鞘.壁
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鉴别特征
螺层数
壳高（mm）×
壳宽（mm）
鉴别图
附录C
（资料性附录）
上旋齿蜗牛与近似种的鉴别方法表C.1上旋齿蜗牛与近似种鉴别特征的比较Helicodonta angigyra
脐孔稍窄，不呈同心圆
淡黄褐色
壳口无折叠呈圆形，无肼抵部
4.0~55X9.0~11.0
分布窄，阿尔卑斯山脉
Helicodonta obvoluta
脐孔开放，较宽，可透视
深黄褐色
壳口折叠呈圆三角形，有薄的
肼胍部
5.0~7.0X11.015.0
分布广，欧洲广大地区
Helicodonta wilhelminae
脐孔开放，不呈同心圆
壳口无折叠呈圆形，有肼抵部
5.6~7.0×13.516.0
分布窄，希腊的克里特岛
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D.1DNA提取
附录D
（资料性附录）
上旋齿蜗牛COI基因辅助鉴定方法取适量腹足肌肉，用SDS方法或动物基因组DNA试剂盒方法提取DNA。D.2COI基因引物
LCO1490:5-GGTCAACAAATCATAAAGATATTG-3HCO2198:5-TAAAOTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3D.3反应体系
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反应体系为20μL：其中DNA模板2μLLCO1490（10μM）0.5μL，HCO2198（10μM）0.5μL2XMasterMix1oμL,ddH,07μL
D.4PCR扩增条件
94℃5min；94℃50s45℃30s，72℃50s，30~35个循环；72℃10min，4℃D.5测序免费标准bzxz.net
D.6比对鉴定
将双向测序获得的600bp～700bp长度的DNA序列片段，经软件拼和人工校对后，与Genbank登录号为KY940217已知上旋齿蜗牛COI基因的标准序列进行比对，相≥95的待鉴样品确定为安平
上旋齿蜗牛的疑似样品。
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