SN/T 5130-2019
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出版信息
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标准简介
标准号：SN/T 5130-2019
标准名称：疣粒稻鉴定方法
英文名称：Identification of Oryza granulata Nees et Arn. ex Hook. f.
标准格式：PDF
发布时间：2019-09-03
实施时间：2020-03-01
标准大小：6678K
标准介绍：范围
本标准规定了疣粒稻种质资源的检验鉴定方法。
本标准适用于疣粒稻和其遗传材料的检测鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本
文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T14072林木种质资源保存原则与方法
SN/T1193基因检验实验室技术要求
3术语、定义和缩略语
3.1术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
小穗 spikelet
小穗是一个穗状花序，含1至多数小花，花生于颖状苞片内，成熟后又称谷粒。小花花被退化为鳞
片状、刚毛状、鳞被状。小穗再排成櫶状、指状、总状或圆锥状花序。
又称谷壳，麸糠。小穗的一部分，由排列整齐、具有孔头状突起的表皮细胞，又分为：内稃，外稃
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标准内容
ICS62.020.01
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5130—2019Www.bzxZ.net
疣粒稻鉴定方法
Identification of Oryza granulata Nees et Arn. ex Hook.f.行业标准信息服务平台
2019-09-03发布
中华人民共和国海关总署
2020-03-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口，SN/T5130—2019
本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院，中华人民共和国合肥海关，中华人民共和国重庆海关本标准主要起草人：宋云、徐哈、宗凯、许瑾、孙涛、陈乃中。行业标准信息服务平台
1范围
疣粒稻鉴定方法
本标准规定了疣粒霜种质资源的检验鉴定方法。本标准适用于疣粒稻和其遗传材料的检测鉴定。规范性引用文件
SN/T5130—2019
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14072林木种质资源保存原则与方法SN/T1193基因检验实验室技术要求术语、定义和缩略语
3.1术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1.1
小穗spikelet
小穗是一个穗状花序，含至多数小花，花生于颖状苞片内，成熟后又称谷粒。小花花被退化为鳞片状、刚毛状、鳞被状。小穗再排成穗代、指状总状或圆锥状花序。3.1.2
又称谷壳，麸糠。小穗的一部分，由排列整齐、具有孔头状起的表皮细胞，又分为：内，外荐，3.1.3
叶舌ligule
叶片与叶鞘交界处内侧的膜状突起。禾本科植物水稻等具有叶舌。可使叶向外倾斜伸出，有利于接受阳光，同时由于它的生长部位，能防止昆虫、病菌、雨水等进人叶鞘筒内。舌是叶鞘的延长，其大小、形状和毛茸的有无，可作分类依据之一。禾本科的叶舌，常见的有撕裂状叶舌、二深裂叶舌、短叶舌、具睫毛叶舌和长叶舌等。3.1.4
磷酸丙糖异构酶TriosephosphateisomeraseTPI磷酸丙糖异构酶是糖酵解过程中催化二羟丙酮磷酸与3-磷酸甘油醛之间可逆反应的一种异构酶其催化功能高度保守：其基因分子结构在生物的长期进化中未发生大的改变，在水稻中是单拷贝、直系同源基因，可作为生物遗传分化和分子进化研究中的重要指标。3.2缩略语
下列缩略语适用于本文件。
SN/T5130—2019
CTAB：cetyltrithylammoniumbromide，十六烷基三甲基漠化铵PcR：polymerasechainreaction，聚合酶链式反应。DNA：deoxyribonuleicacid，脱氧核糖核酸dNTP：deoxyribonucleosidetriphosphate，脱氧核苷酸三磷酸。Taq酶：栖热水生菌DNA聚合酶。4疣粒稻基本信息
学名：Oryza granulata Nees et Arn.exHook.f.分类地位：植物界（Plantae），被子植物门（Angiospermae），单子叶植物纲（Monocotyledoneae），禾本科（Gramineae），稻属（Oryza）。稻属内有20余种（参见附录A）。5方法原理
疣粒稽可能以植株、谷粒、核酸等形式出入境。对于植株、谷粒样品，可通过显微镜观察疑似物种的植株、小穗、外荐，根据形态特征（见附录A、附录B）进行初步鉴定；对手核酸等无形态特征的样品，根据疣粒稻的TPI基因序列特异位点设计引物开展PCR检测，进行准确鉴定。仪器设备和试剂
6.1仪器和设备
液氮罐、纯水机、电子天平、木浴锅、高压灭菌器、高温干燥箱、离心机、电泳仪、PCR仪、电泳槽、显微镜、扫描电镜、凝胶成像系统、高通量码磨机、涡旋震荡器、可调移液器（1000μL，200uL，100uL，20μL,10μ,2.5μL）、可调移液器检头离心管。你准
6.2试剂
倍息服务平台
PCR反应常用试剂、电泳试剂和核酸分子量标准等，均为分析纯或生化纯（另有规定的除外）,水按照GB/T6682规定的执行。
鉴定方法
7.1形态鉴定
7.1.1稻属植株形态特征
一年生或多年生草本。秆直立，丛生。7.1.1.1叶
叶鞘无毛；叶舌长膜质或具叶耳；叶片线形扁平，宽大。7.1.1.2花
顶生圆锥花序蔬松开展，常下垂。2
7.1.1.3小穗
SN/T5130—2019
小穗含一两性小花·其下附有2枚退化外，两侧甚压扁；颖退化，仅在小穗柄顶端呈二半月形之痕迹；孕性外秤硬纸质，具小疣点或细毛，有5脉，顶端有长芒或尖头；内荐与外同质，有3脉，侧脉接近边缘而为外之2边脉所紧握；鳞被2；雄蕊6枚：柱头2，吊刷状，自小穗两侧伸出。7.1.2疣粒形态特征（参见附录A和附录B）多年生草本。有时具短根状茎。秆高30一70厘米，压扁，具5一9节。7.1.2.1叶
叶鞘无毛，长5一8厘米，短于其节间；叶舌长1一2毫米，无毛，具明显叶耳；叶片线状披针形，长5一20厘米，宽6一20毫米，上面沿脉有锯齿状粗糙，下面平滑，干时内卷，顶端尖，基部圆形。7.1.2.2花
圆锥花序简单，直立，长3一12厘米，分枝2一5枚，上升，疏生小穗，棱粗糙7.1.2.3小穗
小穗长圆形，长约6毫米，约为宽的3倍，浅绿色或灰色；颖退化仅留痕迹；内、外表面具钩状乳突且周围具疣粒。
7.2分子生物学鉴定
7.2.1DNA提取
按CTAB法提取DNA（详见附录C)。业
7.2.2PCR检测
准信息
对样品提取的DNA进行PCR检测（详易附录D）。防污染措施应符合SN/T1193的规定。结果判定
晟服务平台
符合7.1.1和7.1.2内与样品物态对应的相关描述可初步判定为统粒程，样品经符合附录D描述的PCR检测为阳性，可判定为疣粒稽。9样品保存与复核
9.1样品保存
物种资源的样品保存方法见GB/T14072的规定。9.2结果记录与资料保存
完整的实验记录包括：样品的名称与编号、来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有经手人和实验人员的签字。检测需有最终的实验数据、电泳结果照片等。原始数据应归档，妥善保管，以备复验、谈判和仲裁。
SN/T5130—2019
9.3复核
由中华人民共和国海关总署指定的单位或人员负责。主要考察实验记录、照片等资料的完整性和真实性，必要时进行复核实验。行业标准信息服务平台
la.小穗短于2mm，茎节具毛
1b.小穗长长于2mm，茎节通常无毛附录A
（资料性附录）
稻属主要植物分种检索表
2a.外无芒，内、外表面具疣粒或钩状乳突2b.外释具芒或小尖头，无疣粒或钩状乳突3a.内、外表面具钩状乳突
3b.内、外表面具钩状乳突且周围具疣粒4a.不孕外程针状或刚毛状
4b.不孕外线形或线状披针形
5a.一年生，植株矮小.小穗窄于1.6mm5b.多年生，植株高大，小穗宽于1.8mm6a.小穗7.6一12.7mm长，不孕外是小穗长度的0.3一0.8倍6b.小穗7-8.2mm长，不孕外是小穗长度的0.8-1.3倍7a.小穗具弯型的小穗轴，小穗与枝梗连接处斜形，外与芒之间具关节SN/T 5130—2019
短粒野稻O.schlechteri
新喀里多野稻O.neocaledonic
疣粒野稻O.granulata
短花药野稻O.brachyantha
马来野稻O.ridley
长颖野稻O.longiglumis
7b.小穗具直型的小穗轴，小穗与枝梗连接处平形，外程与芒之间不具关节.8a.基部叶的叶舌通常短于10mm，先端圆形或截平，花序很少具有二次分枝8b.基部叶的叶舌通常长于10mm，先端尖形或二裂，花序通常具有二次分枝9a.栽培种，小穗于成熟时宿存，通常无芒9b.野生种，小穗成熟时脱落，通常具长芒·10a.一年生或二年生，花药通常在于2.5mm10b.多年生，花药通常长于3rim11a.栽培种，小穗于成熟时宿存，通常不11b.野生种，小穗于成熟时脱落，通常具长芒12a.小穗细长，宽度通常小于2mm，芒的基部较粗12b.小穗较宽，宽度通常大于2mm，芒的基部不粗13a.植株明显具有根茎
13b.植株通常不具根茎：
非洲栽培稻O.glaberrim
短舌野稻O.barthi
亚洲栽培稻O.sativa
·南方野稻O.meridionalis
年生野稻O.nivara
长雄蕊野稻O.longistaminata
14a.植株基部的茎易脆断，小穗6.6-11mm长花药占据小花内2/3一3/空间展颖格O.imaepatula
14b.植株具高位分藥，小穗4.5一10.6mm长，花药占据小花内的全部空间.普通野稻o.ufibogon15a.具根茎，花序轴从基部至顶端具刚毛或粗糙15b.有时具根茎，花序轴平滑或具纤毛16a.植株高大，叶片通常宽于2cm16b.植株相对较小，叶片窄于2cm17a.不孕外儿乎等长于可孕花之内外17b.不孕外远远短于可孕花之内外18a.叶片窄于5cm，小穗短于7mm18b.叶片宽于5cm，小穗长于7mm19a.花序的基部通常具2或更多（3一5)长度相近的分枝澳洲野稻O.aust/rensis
大颖野稻O.grandiglumis
阔叶野稻O.latifolia
…高杆野稻O.alta
SN/T5130—2019
19b.花序的基部通常不具轮生的分枝，一般为1一2分枝20a.植株通常具短的根茎，芒短于2cm或无20b.植株丛生，芒通常长于2cm
21a.一年生，二倍体，植株较高，小穗相对较大21b.多年生，四倍体，植株较矮，小穗相对较小22a.植株具根茎，花序开展，小穗通常长于6mm22b.植株不具根茎，花序部分开展，小穗通常短于6mm23a.植株蔓生或散丛生，小穗通常短于5mm23b.植株丛生，小穗通常长于5mm24a.花序较大，小穗长圆形，表面毛较多.24b.花序较小，小穗扁圆形，表面毛较少22
药用野稻O.officinalis
斑点野稻O.punctata
非洲野稻O.schweinfurthiana
根茎野稻O.rhizomatis
小粒野稻O.minuta
紧穗野稻O.eichingeri
马蓝普野稻O.malampuzhaensis
行业标准信息服务平台
附录B
（资料性附录）
稻属主要种类的外乳突特征
SN/T5130—2019
A：疣粒稻O.granulata；B：短花药野稻O.brachyantha；C：马来野稻O.ridley；D：斑点野稻O.puntata；E：紧穗野稻O.eichingeri；F：小粒野稻O.minuta业标准信息服务平台
注：图片来自《稽属植物微形态特征的比较分析》第17页SN/T5130—2019
C.1试剂
C.1.1CTAB缓冲液
附录C
（规范性附录）
DNA提取方法
20mmol/L的EDTA，100mmol/L的Tris-HCl(pH8.0)，1.4mol/L的NaCl,0.1%β-筑基乙醇，2%CTAB。
C.1.2TE缓冲液（PH8.0)
10mmol/L的Tris-HCl(pH8.0),1mmol/L的EDTA。C.1.3
其他试剂
氯仿：异戊醇（24：1），异丙醇，70%乙醇。C.2提取步骤
C.2.1取0.1g粉样，加人300μLCTAB缓冲液，在高通量研磨机研磨至匀浆状，再加人300uLCTAB缓冲液，上下颠倒混匀转入1.5mL离心管中；65℃水浴1小时，置4℃冰箱中冷至15℃以下。C.2.2加入250μL氯仿：异戊醇（24：1），上下混勾5分钟，充分混匀，12000rpm室温离心10min，取上清300uL转至另一预先装有200μL异丙醇的离心管中，轻轻上下颠倒混匀，4℃放置30min，12000rpm，4℃离心10min，弃上清.标准信息服务平台
C.2.3沉淀用70%乙醇洗涤后，再次离心，倒乙醇，干燥DNA，加人100μLTE缓冲液溶解DNA，37℃水浴30min或室温1h。
引物合成
附录D
（规范性附录）
PCR检测方法
Primer15'-TCAGCCCACCTTATGTGTTC-3°Primer25'-TGTGCAGCAACAACATCCAT-3Primer35'-CAGTGGTGGAGCCAGAAATT-3Primer 45'-GCTTAATCAGGGGCAGAGGC-3SN/T5130—2019
以基因组DNA为模板，Primerl/Primer2为引物进行第一轮进行扩增，扩增产物稀释30倍后作为模板，以Primer3/Primer4为引物进行第二轮扩增.PCR产物大小为163bp，为疣粒野生稻特异性扩增引物。
PCR反应
本方法中，PCR反应的总体积为25uL，反应体系见表D.1。表D.1
超纯水
10XPCRbuffer
正向引物
反向引物
Taq酶
原浓度
5nmol/L
10pμmL
25ng/μL
25μL反应体系加样体积（μL）17.4
Primer1/Primer2反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃恶k30.72℃延伸1min，30个循环.72℃终延伸10min，4℃保存。Primer3/Primer4反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性30s，60℃退火30s，72延伸30s，24个循环，72℃延伸10min。2%琼脂糖凝胶电泳检查结果。以疣粒稻叶片DNA为阳性对照，假稻叶片DNA为阴性对照，灭菌双蒸水为空白对照，D.3琼脂糖电泳
将TAE和电泳级琼脂糖按2%配好，加入SYBRGREEN核酸染料终浓度为0.5ug/mL，混匀，制胶。用适量的6×加样缓冲液分别与10uL样品混合，然后将其和适合的DNA分子量标准物分别加入到样品孔中，电泳。结束时将整个胶置于凝胶成像仪上观察。9
SN/T5130—2019
D.4结果观察
通过成像观察，若在163bp处有相应大小的产物带出现，即可判定为阳性（检测样品为疣粒稻）；若无任何扩增带出现，判定为阴性。检测时应做平行实验，两份平行测试样品的结果应该保持一致。如果一个测试样品的结果为阳性而另一个为阴性时，应重新进行检测。可通过增加PCR反应中DNA的模板量，使两份平行测试样品的结果一致。所检测目标片段出现扩增，且PCR产物经过确证，所有对照结果正常结果判定为阳性；所检测目标片段未出现扩增，所有对照结果正常，结果判定为阴性。行业标准信息服务平台
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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5130—2019Www.bzxZ.net
疣粒稻鉴定方法
Identification of Oryza granulata Nees et Arn. ex Hook.f.行业标准信息服务平台
2019-09-03发布
中华人民共和国海关总署
2020-03-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口，SN/T5130—2019
本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院，中华人民共和国合肥海关，中华人民共和国重庆海关本标准主要起草人：宋云、徐哈、宗凯、许瑾、孙涛、陈乃中。行业标准信息服务平台
1范围
疣粒稻鉴定方法
本标准规定了疣粒霜种质资源的检验鉴定方法。本标准适用于疣粒稻和其遗传材料的检测鉴定。规范性引用文件
SN/T5130—2019
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14072林木种质资源保存原则与方法SN/T1193基因检验实验室技术要求术语、定义和缩略语
3.1术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1.1
小穗spikelet
小穗是一个穗状花序，含至多数小花，花生于颖状苞片内，成熟后又称谷粒。小花花被退化为鳞片状、刚毛状、鳞被状。小穗再排成穗代、指状总状或圆锥状花序。3.1.2
又称谷壳，麸糠。小穗的一部分，由排列整齐、具有孔头状起的表皮细胞，又分为：内，外荐，3.1.3
叶舌ligule
叶片与叶鞘交界处内侧的膜状突起。禾本科植物水稻等具有叶舌。可使叶向外倾斜伸出，有利于接受阳光，同时由于它的生长部位，能防止昆虫、病菌、雨水等进人叶鞘筒内。舌是叶鞘的延长，其大小、形状和毛茸的有无，可作分类依据之一。禾本科的叶舌，常见的有撕裂状叶舌、二深裂叶舌、短叶舌、具睫毛叶舌和长叶舌等。3.1.4
磷酸丙糖异构酶TriosephosphateisomeraseTPI磷酸丙糖异构酶是糖酵解过程中催化二羟丙酮磷酸与3-磷酸甘油醛之间可逆反应的一种异构酶其催化功能高度保守：其基因分子结构在生物的长期进化中未发生大的改变，在水稻中是单拷贝、直系同源基因，可作为生物遗传分化和分子进化研究中的重要指标。3.2缩略语
下列缩略语适用于本文件。
SN/T5130—2019
CTAB：cetyltrithylammoniumbromide，十六烷基三甲基漠化铵PcR：polymerasechainreaction，聚合酶链式反应。DNA：deoxyribonuleicacid，脱氧核糖核酸dNTP：deoxyribonucleosidetriphosphate，脱氧核苷酸三磷酸。Taq酶：栖热水生菌DNA聚合酶。4疣粒稻基本信息
学名：Oryza granulata Nees et Arn.exHook.f.分类地位：植物界（Plantae），被子植物门（Angiospermae），单子叶植物纲（Monocotyledoneae），禾本科（Gramineae），稻属（Oryza）。稻属内有20余种（参见附录A）。5方法原理
疣粒稽可能以植株、谷粒、核酸等形式出入境。对于植株、谷粒样品，可通过显微镜观察疑似物种的植株、小穗、外荐，根据形态特征（见附录A、附录B）进行初步鉴定；对手核酸等无形态特征的样品，根据疣粒稻的TPI基因序列特异位点设计引物开展PCR检测，进行准确鉴定。仪器设备和试剂
6.1仪器和设备
液氮罐、纯水机、电子天平、木浴锅、高压灭菌器、高温干燥箱、离心机、电泳仪、PCR仪、电泳槽、显微镜、扫描电镜、凝胶成像系统、高通量码磨机、涡旋震荡器、可调移液器（1000μL，200uL，100uL，20μL,10μ,2.5μL）、可调移液器检头离心管。你准
6.2试剂
倍息服务平台
PCR反应常用试剂、电泳试剂和核酸分子量标准等，均为分析纯或生化纯（另有规定的除外）,水按照GB/T6682规定的执行。
鉴定方法
7.1形态鉴定
7.1.1稻属植株形态特征
一年生或多年生草本。秆直立，丛生。7.1.1.1叶
叶鞘无毛；叶舌长膜质或具叶耳；叶片线形扁平，宽大。7.1.1.2花
顶生圆锥花序蔬松开展，常下垂。2
7.1.1.3小穗
SN/T5130—2019
小穗含一两性小花·其下附有2枚退化外，两侧甚压扁；颖退化，仅在小穗柄顶端呈二半月形之痕迹；孕性外秤硬纸质，具小疣点或细毛，有5脉，顶端有长芒或尖头；内荐与外同质，有3脉，侧脉接近边缘而为外之2边脉所紧握；鳞被2；雄蕊6枚：柱头2，吊刷状，自小穗两侧伸出。7.1.2疣粒形态特征（参见附录A和附录B）多年生草本。有时具短根状茎。秆高30一70厘米，压扁，具5一9节。7.1.2.1叶
叶鞘无毛，长5一8厘米，短于其节间；叶舌长1一2毫米，无毛，具明显叶耳；叶片线状披针形，长5一20厘米，宽6一20毫米，上面沿脉有锯齿状粗糙，下面平滑，干时内卷，顶端尖，基部圆形。7.1.2.2花
圆锥花序简单，直立，长3一12厘米，分枝2一5枚，上升，疏生小穗，棱粗糙7.1.2.3小穗
小穗长圆形，长约6毫米，约为宽的3倍，浅绿色或灰色；颖退化仅留痕迹；内、外表面具钩状乳突且周围具疣粒。
7.2分子生物学鉴定
7.2.1DNA提取
按CTAB法提取DNA（详见附录C)。业
7.2.2PCR检测
准信息
对样品提取的DNA进行PCR检测（详易附录D）。防污染措施应符合SN/T1193的规定。结果判定
晟服务平台
符合7.1.1和7.1.2内与样品物态对应的相关描述可初步判定为统粒程，样品经符合附录D描述的PCR检测为阳性，可判定为疣粒稽。9样品保存与复核
9.1样品保存
物种资源的样品保存方法见GB/T14072的规定。9.2结果记录与资料保存
完整的实验记录包括：样品的名称与编号、来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有经手人和实验人员的签字。检测需有最终的实验数据、电泳结果照片等。原始数据应归档，妥善保管，以备复验、谈判和仲裁。
SN/T5130—2019
9.3复核
由中华人民共和国海关总署指定的单位或人员负责。主要考察实验记录、照片等资料的完整性和真实性，必要时进行复核实验。行业标准信息服务平台
la.小穗短于2mm，茎节具毛
1b.小穗长长于2mm，茎节通常无毛附录A
（资料性附录）
稻属主要植物分种检索表
2a.外无芒，内、外表面具疣粒或钩状乳突2b.外释具芒或小尖头，无疣粒或钩状乳突3a.内、外表面具钩状乳突
3b.内、外表面具钩状乳突且周围具疣粒4a.不孕外程针状或刚毛状
4b.不孕外线形或线状披针形
5a.一年生，植株矮小.小穗窄于1.6mm5b.多年生，植株高大，小穗宽于1.8mm6a.小穗7.6一12.7mm长，不孕外是小穗长度的0.3一0.8倍6b.小穗7-8.2mm长，不孕外是小穗长度的0.8-1.3倍7a.小穗具弯型的小穗轴，小穗与枝梗连接处斜形，外与芒之间具关节SN/T 5130—2019
短粒野稻O.schlechteri
新喀里多野稻O.neocaledonic
疣粒野稻O.granulata
短花药野稻O.brachyantha
马来野稻O.ridley
长颖野稻O.longiglumis
7b.小穗具直型的小穗轴，小穗与枝梗连接处平形，外程与芒之间不具关节.8a.基部叶的叶舌通常短于10mm，先端圆形或截平，花序很少具有二次分枝8b.基部叶的叶舌通常长于10mm，先端尖形或二裂，花序通常具有二次分枝9a.栽培种，小穗于成熟时宿存，通常无芒9b.野生种，小穗成熟时脱落，通常具长芒·10a.一年生或二年生，花药通常在于2.5mm10b.多年生，花药通常长于3rim11a.栽培种，小穗于成熟时宿存，通常不11b.野生种，小穗于成熟时脱落，通常具长芒12a.小穗细长，宽度通常小于2mm，芒的基部较粗12b.小穗较宽，宽度通常大于2mm，芒的基部不粗13a.植株明显具有根茎
13b.植株通常不具根茎：
非洲栽培稻O.glaberrim
短舌野稻O.barthi
亚洲栽培稻O.sativa
·南方野稻O.meridionalis
年生野稻O.nivara
长雄蕊野稻O.longistaminata
14a.植株基部的茎易脆断，小穗6.6-11mm长花药占据小花内2/3一3/空间展颖格O.imaepatula
14b.植株具高位分藥，小穗4.5一10.6mm长，花药占据小花内的全部空间.普通野稻o.ufibogon15a.具根茎，花序轴从基部至顶端具刚毛或粗糙15b.有时具根茎，花序轴平滑或具纤毛16a.植株高大，叶片通常宽于2cm16b.植株相对较小，叶片窄于2cm17a.不孕外儿乎等长于可孕花之内外17b.不孕外远远短于可孕花之内外18a.叶片窄于5cm，小穗短于7mm18b.叶片宽于5cm，小穗长于7mm19a.花序的基部通常具2或更多（3一5)长度相近的分枝澳洲野稻O.aust/rensis
大颖野稻O.grandiglumis
阔叶野稻O.latifolia
…高杆野稻O.alta
SN/T5130—2019
19b.花序的基部通常不具轮生的分枝，一般为1一2分枝20a.植株通常具短的根茎，芒短于2cm或无20b.植株丛生，芒通常长于2cm
21a.一年生，二倍体，植株较高，小穗相对较大21b.多年生，四倍体，植株较矮，小穗相对较小22a.植株具根茎，花序开展，小穗通常长于6mm22b.植株不具根茎，花序部分开展，小穗通常短于6mm23a.植株蔓生或散丛生，小穗通常短于5mm23b.植株丛生，小穗通常长于5mm24a.花序较大，小穗长圆形，表面毛较多.24b.花序较小，小穗扁圆形，表面毛较少22
药用野稻O.officinalis
斑点野稻O.punctata
非洲野稻O.schweinfurthiana
根茎野稻O.rhizomatis
小粒野稻O.minuta
紧穗野稻O.eichingeri
马蓝普野稻O.malampuzhaensis
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附录B
（资料性附录）
稻属主要种类的外乳突特征
SN/T5130—2019
A：疣粒稻O.granulata；B：短花药野稻O.brachyantha；C：马来野稻O.ridley；D：斑点野稻O.puntata；E：紧穗野稻O.eichingeri；F：小粒野稻O.minuta业标准信息服务平台
注：图片来自《稽属植物微形态特征的比较分析》第17页SN/T5130—2019
C.1试剂
C.1.1CTAB缓冲液
附录C
（规范性附录）
DNA提取方法
20mmol/L的EDTA，100mmol/L的Tris-HCl(pH8.0)，1.4mol/L的NaCl,0.1%β-筑基乙醇，2%CTAB。
C.1.2TE缓冲液（PH8.0)
10mmol/L的Tris-HCl(pH8.0),1mmol/L的EDTA。C.1.3
其他试剂
氯仿：异戊醇（24：1），异丙醇，70%乙醇。C.2提取步骤
C.2.1取0.1g粉样，加人300μLCTAB缓冲液，在高通量研磨机研磨至匀浆状，再加人300uLCTAB缓冲液，上下颠倒混匀转入1.5mL离心管中；65℃水浴1小时，置4℃冰箱中冷至15℃以下。C.2.2加入250μL氯仿：异戊醇（24：1），上下混勾5分钟，充分混匀，12000rpm室温离心10min，取上清300uL转至另一预先装有200μL异丙醇的离心管中，轻轻上下颠倒混匀，4℃放置30min，12000rpm，4℃离心10min，弃上清.标准信息服务平台
C.2.3沉淀用70%乙醇洗涤后，再次离心，倒乙醇，干燥DNA，加人100μLTE缓冲液溶解DNA，37℃水浴30min或室温1h。
引物合成
附录D
（规范性附录）
PCR检测方法
Primer15'-TCAGCCCACCTTATGTGTTC-3°Primer25'-TGTGCAGCAACAACATCCAT-3Primer35'-CAGTGGTGGAGCCAGAAATT-3Primer 45'-GCTTAATCAGGGGCAGAGGC-3SN/T5130—2019
以基因组DNA为模板，Primerl/Primer2为引物进行第一轮进行扩增，扩增产物稀释30倍后作为模板，以Primer3/Primer4为引物进行第二轮扩增.PCR产物大小为163bp，为疣粒野生稻特异性扩增引物。
PCR反应
本方法中，PCR反应的总体积为25uL，反应体系见表D.1。表D.1
超纯水
10XPCRbuffer
正向引物
反向引物
Taq酶
原浓度
5nmol/L
10pμmL
25ng/μL
25μL反应体系加样体积（μL）17.4
Primer1/Primer2反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃恶k30.72℃延伸1min，30个循环.72℃终延伸10min，4℃保存。Primer3/Primer4反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性30s，60℃退火30s，72延伸30s，24个循环，72℃延伸10min。2%琼脂糖凝胶电泳检查结果。以疣粒稻叶片DNA为阳性对照，假稻叶片DNA为阴性对照，灭菌双蒸水为空白对照，D.3琼脂糖电泳
将TAE和电泳级琼脂糖按2%配好，加入SYBRGREEN核酸染料终浓度为0.5ug/mL，混匀，制胶。用适量的6×加样缓冲液分别与10uL样品混合，然后将其和适合的DNA分子量标准物分别加入到样品孔中，电泳。结束时将整个胶置于凝胶成像仪上观察。9
SN/T5130—2019
D.4结果观察
通过成像观察，若在163bp处有相应大小的产物带出现，即可判定为阳性（检测样品为疣粒稻）；若无任何扩增带出现，判定为阴性。检测时应做平行实验，两份平行测试样品的结果应该保持一致。如果一个测试样品的结果为阳性而另一个为阴性时，应重新进行检测。可通过增加PCR反应中DNA的模板量，使两份平行测试样品的结果一致。所检测目标片段出现扩增，且PCR产物经过确证，所有对照结果正常结果判定为阳性；所检测目标片段未出现扩增，所有对照结果正常，结果判定为阴性。行业标准信息服务平台
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