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SN/T 5115-2019

基本信息

标准号: SN/T 5115-2019

中文名称:进出口食用动物、饲料中卡巴氧测定 液相色谱-质谱∕质谱法

标准类别:商检行业标准(SN)

标准状态:现行

出版语种:简体中文

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相关标签: 进出口 食用动物 饲料 测定 色谱 质谱 质谱法

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出版信息

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标准简介

标准号:SN/T 5115-2019
标准名称:进出口食用动物、饲料中卡巴氧测定 液相色谱-质谱∕质谱法
英文名称:Determination of carbadox in edible animal and feeds for
import and export-LC-MS/MS method
标准格式:PDF
发布时间:2019-09-03
实施时间:2020-01-01
标准大小:5589K
标准介绍:本标准规定了进出口食用动物、饲料中卡巴氧及其代谢物唑嗯啉-2-羧酸残留量的液相色谱-串联质谱测定方法
本标准适用于进出口猪、鸡、鱼等饲料中卡巴氧,食用动物猪、牛、羊,鸡、鸭等血液中卡巴氧代谢物喹嘧晽-2-羧酸残留量的液相色-串联质谱测定方法的测定和确证
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本
文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
B/T6682分析实验室用水规格和试验方法
动物血液样品通过加人蛋白酶水解,盐酸酸化,离心过滤后,分别用乙酸乙酯和磷酸缓冲溶液提取
过 Oasis max固相萃取柱净化。用2%甲酸乙酸乙酯溶液洗脱,氮吹尽干,用0.1%甲酸-乙腈溶液溶
解残渣,样液供液相色谱串联质谱仪测定,内标法定量
饲料样品经0.1%甲酸乙腈溶液提取、离心,加人固相萃取填料净化,取上滷液氮吹尽干,定容、过
膜,供液相色谱质谱测定,外标法定量

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标准内容

ICS67.050
B45/B46
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5115—2019
进出口食用动物、饲料中卡巴氧测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of carbadox in edible animal and feeds forimport and export-LC-MS/MS method行业标准信息服务平台
2019-09-03发布
中华人民共和国海关总署
2020-03-01实施
本标准依据GB/T1.12009起草。
本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口本标准起草单位:中华人民共和国深圳海关、深圳市检验检疫科学研究院。SN/T5115—2019
本标准主要起草人:刘建利、林黎、罗耀、史卫军、牛娜、孙洁、廖立珊、曹琛福、张彩虹、杨俊兴、沈金灿、张毅、吕建强、花群义、秦智锋。行业标准信息服务平台
1范围
进出口食用动物、饲料中卡巴氧测定液相色谱-质谱/质谱法
SN/T5115—2019
本标准规定了进出口食用动物、饲料中卡巴氧及其代谢物喹嗯嘛-2-羧酸残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于进出口猪、鸡、鱼等伺料中卡巴氧,食用动物猪、牛、羊、鸡、鸭等血液中卡巴氧代谢物喹嗯啉-2-羧酸残留量的液相色谱-串联质谱测定方法的测定和确证。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
动物血液样品通过加入蛋白酶水解,盐酸酸化,离心过滤后·分别用乙酸乙酯和磷酸缓冲溶液提取标准信息股募平台
过OasisMAX固相萃取柱净化用2%甲酸-乙酸乙酯溶液洗脱,氮吹尽干,用0.1%甲酸-乙睛溶液溶解残渣,样液供液相色谱-串联质谱仪测定内标法定量。饲料样品经0.1%甲酸-乙睛溶液仪、离心加入固相萃取填料净化,取上清液氮吹尽干,定容、过膜.供液相色谱质谱测定、外标法定量。4试剂
除另有说明外,所用试剂均为优级纯,实验用水应符合GB/T4.1乙:色谱纯。
甲醇:色谱纯
甲酸:分析纯。
浓盐酸:分析纯。
4.5乙酸乙酯:分析纯。
磷酸二氢钾:分析纯。
4.7磷酸氢二钾:分析纯。
4.8氢氧化钠:分析纯。
4.9Tris缓冲溶液:0.2mol/L.pH=9.6。称取24.2gTris碱,用900mL水溶解,用盐酸调节pH=9.6,定容至1L。
4.10Protease蛋白酶:50mg/mL。4℃保存。1
SN/T5115—2019
4.110.1mol/L氢氧化钠溶液:称取4g氢氧化钠,用水溶解并定容至1L。4.120.1%甲酸溶液:准确吸取1mL甲酸,用水定容至1L.混匀。4.130.1mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=7.0):13.6g磷酸二氢钾和17.4g磷酸氢二钾,用水溶解,用氢氧化钠溶液调节PH三7.0.定容至1L。4.140.2mol/L乙酸盐缓冲溶液(PH=5.2):2.52g乙酸,12.95g乙酸钠溶解于800mL水中,用氢氧化钠溶液调节PH=5.2,加水定容至1L4.152%甲酸-乙酸乙酯溶液:取10mL甲酸,用乙酸乙酯定容至500mL。4.160.1%甲酸-乙睛溶液(9+1,体积比):量取10mL乙睛和90mL0.1%甲酸溶液,混匀。4.17固相萃取填料组合:C18200mg,氯化钠1g,无水MgSO.1g,混合均匀。4.18卡巴氧、喹嗯啉-2-羧酸、喹嗯啉-2-羧酸-d4标准物质:纯度99%。见附录A。4.19标准储备液:100mg/L。准确称取适量标准物质,分别用甲醇溶解定容,配成100mg/L的标准储备液,在一18℃以下保存,可使用1年。4.20混合标准工作溶液:根据灵敏度和使用需要,用空白样品提取液配成不同浓度(ug/L)的混合标准工作溶液.在4℃保存,可使用1周。4.21同位素内标储备溶液:100mg/L。准确称取适量喹嗯啉-2-羧酸-d4标准物质,分别用甲醇溶解定容,配成100mg/L的标准储备液,在一18℃以下保存,可使用1年。4.22同位素内标工作溶液(10ng/mL):将上述同位素内标储备溶液用甲醇进行适当稀释。4.23OasisMAX固相萃取柱:500g.3mL,或相当者。4.24分散固相萃取填料:分别称取Ci8200mg、氯化钠1g和无水MgSO.1g置于15mL离心管中。4.25滤膜:0.22um,有机相型。5仪器
5.1液相色谱-串联质谱仪:配有电喷高子源(ESI)。标准信息服务平台
固相萃取装置。
5.3离心机:最大转速不小于9500r/min。5.4
吹氮浓缩仪。
5.5旋涡振荡器。
酸度计。
聚丙烯离心管:15mL和50mL.具塞。5.8
移液枪,10-1000μL.10-100μL,1000-5000μL。6测定步骤
6.1食用动物血液类
6.1.1提取
称取2mL(精确至0.01g)试样至50mL离心管中,加入适量内标,加入8mL0.1mol/LTris溶液(4.9),混匀后,再加入100μL蛋白酶溶液(4.10),充分混匀后置于45℃水浴摇床中振摇2小时。然后冷至室温,加人1.0mL浓HCl(4.4),振荡均匀,9500r/min离心5min,取上清液加人12mL乙酸乙酯(4.5),振荡20min,离心5min,取上清液至另一洁净的15mL离心管中,45℃氮吹尽干,取出,加3mL2
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磷酸缓冲溶液(4.13),振荡,离心,取上清液。再用3mL磷酸缓冲溶液(4.13)重复提取1次,合并提取液,备用。
6.1.2净化
分别用3mL甲醇和3mL水活化OasisMAX柱(4.23),将滤液全部移人小柱,待液体全部通过柱子后,分别用3mL0.1mol/L氢氧化钠溶液(4.11)和3mL甲醇(4.2)淋洗,抽干,再用6mL2%甲酸-乙酸乙酯(4.15)洗脱,45℃吹氮尽干,用0.1%甲酸-乙睛溶液(4.16)溶解残渣,定容至1mL,过膜,供液相色谱质谱测定,内标法定量。
6.2饲料类
称取2g(精确至0.01g)试样至50mL离心管中,加人适量内标,加入10mL0.1%甲酸-乙溶液(4.16).振荡,离心,取上清液至一干净离心管中,重复操作2次,合并上清液约20mL,加入固相萃取填料(4.24),涡旋1min,离心后取10mL上清液氮吹尽干,用磷酸盐缓冲溶液(4.13)定容至1mL,过膜,供液相色谱质谱测定,外标法定量。6.3混合基质标准工作溶液的制备空白试验
称取2.00g空白试样(精确至0.01g)于50mL具塞离心管中,根据6.1和6.2分别操作处理后得到基质空白。
宁业标询信愿服务产
基质工作曲线的配制
用基质空白(6.3.1)来配制基质标准工作曲线6.4
液相色谱条件
色谱柱:Cls色谱柱,100mm×2.1mmi.b)
柱温:40℃;
进样量:20μL。
流动相、流速及梯度洗脱条件见表1。流动相时间梯度
时间(min)
流速μL/min
甲醇(%)
水(含0.1%甲酸)(%)
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质谱参考条件
离子化模式:电喷雾离子源(ESI),ESI+模式;b)扫描方式:多反应监测(MRM);分辨率:单位分辨率;
d)其它参考条件参见附录B。
6.5定性测定
在相同实验条件下,样品中待测物质的保留时间,与基质标准溶液的保留时间偏差在士2.5%之内:每种化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子,且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,偏差不超过表2规定的范围,则可判定为样品中存在对应的待测物。6.6定量测定
待测样液中卡巴氧、喹嗯-2-羧酸药物的响应值应在标准曲线线性范围内,超过线性范围则应稀释后再进样分析。卡巴氧、喹啉-2-羧酸药物标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图参见附录C。表2定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰度
允许的最大偏差
6.7平行试验
>20%至50%
>10%至20%
≤10%
标准信息
按以上步骤,对同一试样进行平行试验测定。同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%
结果计算
试样中各种药物的含量由色谱数据处理软件或按式(1)计算获得计公结果需扣除空白值,并保留服务平
三位有效数字。
X_AXcXVX1000
AXm×1000
式中:
试样中待测物的含量,单位为毫克每千克(ug/kg);A
样液中待测物的峰面积:
标准溶液中待测物的浓度,单位为毫克每升(ug/L):样液最终定容体积,单位为毫升(mL);标准溶液中待测物的峰面积;
试样的质量,单位为克(g);
稀释倍数。
8方法的检测低限和回收率
8.1检测低限
本方法的检测低限:卡巴氧为5.0μg/kg,喹嗯啉-2-羧酸为1.0uμg/kg8.2回收率
在三个添加浓度范围内,各种基质中的化合物回收率数据见附录DSN/T5115—2019
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SN/T5115—2019
化合物名称
卡巴氧
Carbadox
喹喔啉-2-羧酸(qca)
Quinoxaline-2-carboxylic acid6
附录A
(规范性附录)
卡巴氧及其代谢物信息
母体化合物
卡巴氧
登记号
6804-07-5
879-65-2
化学结构式
CH-N-N-C-OCH
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电喷雾电压:4500V:
辅助气压力:41.4kPa6psi);
雾化气压力:448.5KPa(65psi);气帘气压力:138kPa(20psi):离子源温度:450℃;
碰撞气:氮气;
附录B
(资料性附录)
参考质谱条件
定性离子对、定量离子对、保留时间、锥孔电压及碰撞能量见表A.1。表B.1
化合物
卡巴氧
唑嗯啉-2-羧酸
喹嗯啉-2-羧酸-d4
母离子
子离子
卡巴氧类药物的主要质谱参数
保留时间
去簇电压
入口电压
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碰撞气能量
注:*为定量离子,对于不同质谱丈器,仪程参数可能存在差异,测定前应将质谱参数优化到最佳撞池出口
电压(V)
非商业性声明:附录A所列参考质语余件是在AFI5000型液质联用仪上完成的,此处列出试验用仪器型号仅为提供参考,并不涉及商业目的,支面标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。准信息服务平台
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qcal(175.0 / 102.1)
附录CbZxz.net
(资料性附录)
卡巴氧代谢物标准(qca)溶液离子色谱图qca2(175.0 / 131.1)
qca-d4
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样品基质
样品基质
猪饲料
鸡饲料
鱼饲料
附录D
(规范性附录)
食用动物样品的添加浓度及回收率的数据表D.1
加标水平
(μg/kg)
食用动物样品的添加浓度及回收率的数据回收率范围/%
喹嗯啉-2-羧酸
93.0~101.5
83.8~111.2
79.8~103.6
96.9~102.2
83.8~111.2
83.0~99.0
83.0~98.4
加标水平
(μg/kg)
动物饲料的添加浓度及回收率的数据SN/T5115—2019
3-甲基喹嗯啉-2-羧酸
83.6~105.4
85.5~110.5
91.4111.6
87.8~109.4
回收率范围/%
卡巴氧石
102~113
74.5~94.0
90.0~108.2
84.5~98.5
86.1~95.0
74.5~103.5
喹乙醇
89.6~104.8
53.0~104.5
95.5~108.5
109.4~118.6
82.7~94.0
73.5107.5
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