标准号：SN/T 5142-2019
标准名称：进出口动物源性食品中粘菌素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
英文名称：Determination oi colistin residue in foodstuffs of animal origin ior import and export--LC-MS/MS method
标准格式：PDF
发布时间：2019-10-25
实施时间：2020-05-01
标准大小：1.67M
标准介绍：本标准规定了动物源性食品中粘菌素A和粘菌素B残留量的液相色谱串联质谱测定方法
本标推适用于进出口鸡肉、鸡肝、猪肾、扇贝、鸡蛋、牛奶等动物源性食品中粘菌素残量的测定
本标准按照(B/T1.1—2009给出的规则编写。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国石家庄海关。本标准主要起草人：侯霞、王凤池、赵雁冰、阚宝东、刘晓茂、艾连峰、徐文科。

ICS67.050
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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5142—2019
进出口动物源性食品中粘菌素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of colistin residue in foodstuffs of animal origin for importandexportLC-MS/MSmethod
2019-10-25发布
中华人民共和国海关总署
2020-05-01实施
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本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则编写。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国石家庄海关。本标准主要起草人：侯霞、王凤池、赵雁冰、阀宝东、刘晓茂、艾连峰、徐文科SN/T5142—2019
1范围
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进出口动物源性食品中粘菌素残留量的测定液相色谱-患联质谱法
SN/T5142—2019
本标准规定了动物源性食品中粘菌素A和粘菌素B残留量的液相色谱-串联质谱测定方法本标准适用于进出口鸡肉、鸡肝、猪肾、扇贝、鸡蛋、牛奶等动物源性食品中粘菌素残量的测定2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3方法提要
用三氣之酸-乙睛溶液提取试样中残留的粘菌素，提取液经WCX固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱（ESI十）检测，外标法定量。4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。
4.2乙腊：色谱纯。
甲酸：色谱纯。
乙酸：色谱纯。
4.5氨水。
5三氯乙酸。
4.710%（W/V）三氯乙酸溶液：取10.00g三氯乙酸（4.6），用水溶解，定容至100mL。4.810%三氯乙酸溶液-乙腈（3+7V/V）：取30mL10%三氯乙酸溶液（4.7）和70mL乙腈（4.2），混匀，现用现配。
4.9甲酸-甲醇（1+4，V/V）：取20mL甲酸（4.3）.加人80mL甲醇（4.1），混勾。4.10甲酸溶液（0.2十99.8，V/V）：取0.2mL甲酸（4.3），加入99.8mL水，混匀。4.11标准物质：粘菌素，CASNo.1264-72-8，纯度为78.3%，标准品信息见附录A表A.1。4.12标准贮备溶液：1.0mg/mL。根据纯度进行折算后称取适量的粘菌素标准物质（4.11），用甲酸溶液（4.10）溶解并配制成1.0mg/mL的标准贮备液。0℃C～4℃冷藏避光保存。4.13粘菌素中间标准工作溶液：100μg/mL。：吸取适量粘菌素标准贮备溶液（4.12），用甲酸溶液（4.10）稀释成100μg/mL的标准工作溶液，0℃～4℃冷藏避光保存。4.14基质标准工作溶液：吸取适量粘菌素中间标准溶液（4.13），用相应基质的空白样品提取液配成合适浓度的基质标准工作溶液，使用前配制。1
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4.15固相萃取小柱：OasisWCX柱，60mg，3mL，或相当者。使用前依次用3mL甲醇和3mL水预处理，保持柱体湿润。
4.16微孔滤膜：0.22μm，有机相型5仪器
5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪.配有电喷雾离子源（ESI）。5.2分析天平：感量分别为0.01mg和0.01g。5.3涡旋混匀器。
离心机：转速不低于5000r/min。5.5均质器：转速不低于10000r/min。5.6
固相萃取装置。
真空泵：真空度大于80kPa。
组织捣碎机。
5.9氮吹仪。
聚丙烯离心管：100mL，具塞。
试管：10mL，玻璃。
2振荡器。
试样的制备与保存
6.1通则
在样品制备和保存的操作过程中，应防止样品污染或发生待测物含量的变化。行业
6.2动物组织、内脏
取有代表性样品约0.5kg，用组织品碎机分捣碎混勾分成两份，装人洁净容器作为试样，密封，标明标记。将试样置于18℃冷冻保存。6.3蛋
服务平
密封，标明标记。将试样置于0℃～4℃冷藏保存。6.4牛奶
取适量新鲜或冷藏的样品约500mL，充分混匀分成两份，装人洁净容器作为试样，密封，标明标记将试样置于0℃～4℃冷藏保存。7
测定步骤
7.1提取
7.1.1动物组织、内脏
称取试样2g（精确到0.01g），置于100mL聚丙烯离心管（5.10）中，加人10mL10%三氯乙酸水溶液-乙睛（4.8），10000r/min均质2min后，5000r/min离心5min。转移上清液至另一离心管中，残2
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渣中加入10mL10%三氯乙酸水溶液-乙睛（4.8），重复以上提取操作。合并2次提取上清液，用氨水调pH=9，5000r/min离心5min，上清液待净化。7.1.2蛋和牛奶
称取试样2g（精确到0.01g），置于100mL聚丙烯离心管（5.10）中，加人10mL10%三氯乙酸水溶液-乙睛（4.8），用振荡器振摇提取20min后，5000r/min离心5min。转移上清液至另一离心管中，余下操作同7.1.1。
7.2净化
将测定步骤7.1所得待净化液，以小于2mL/min的流速通过WCX固相萃取柱（4.15），待样液全部通过后，依次用5mL水、3mL甲醇洗涤固相萃取柱，弃去全部流出液。在65kPa的负压下，减压抽至近干。固相萃取柱用5mL甲酸-甲醇（4.9）洗脱至10mL试管（5.11）中，在45℃下氮气吹至约1.0mL，用水定容至2.0mL，涡旋混匀，过0.22μm膜（4.16），供液相色谱-串联质谱仪测定。7.3测定
液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：Atlantis?dCis，3.0μm，150mmX2.1mm（内径）或相当者；a）：
b）柱温：35℃；
进样量：5μL。
流动相、流速及梯度洗脱条件见表1。表1
液相色谱梯度洗脱条件
质谱参考条件
质谱参考条件如下：
μL/min
离子源：电喷雾离子源（ESI）；a)
b）扫描方式：正离子扫描；
乙酸铵（0.02mmol/L)-甲酸（0.1%）标准信长服务
溶液%
c）检测方式：多反应监测（MRM）；其他参考质谱条件参见附录B中表B.1。%
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7.3.3液相色谱-串联质谱测定
7.3.3.1定性确证
每种被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与混合基质标准校准溶液中对应组分的保留时间偏差在士2.5%之内；且样品谱图中各组分的定性离子对的相对离子丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子对的相对离子丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对应的待测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度K
允许的最大偏差
7.3.3.2定量测定
20%10%K≤10%
由于粘菌素为粘菌素A和粘菌素B的混合物，采用粘菌素A和粘菌素B的峰面积加和进行定量分析。
外标法定量：在仪器最佳工作条件下，对粘菌素的基质校准标准溶液分别进样测定，以系列基质校准标准溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对待测样品进行定有发学产
量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。粘菌素A和粘菌素B的标准物质多反应监测（MRM)色谱图参见附录C中的图C.1。7.4平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定行业票
7.5空白试验
结果计算
结果按（1)式计算：
X =C(A+B) X
式中：
X一试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（ug/kg）；C一从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）V一样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL)；样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）。m
注：计算结果应扣除空白值：C是粘菌素A和B总量；粘菌素A和粘菌素B按照峰面积进行加和。测定低限和回收率
9.1测定低限
本方法用于牛奶的测定低限为20.0μg/kg，其它样品的测定低限为50.0ug/kg。4
9.2回收率
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本方法对鸡肉、鸡肝、猪肾、扇贝、鸡蛋、牛奶等食品基质进行添加回收率试验，粘菌素的添加浓度及回收率范围参见附录D中的表D.1。行业标准信息服务平台
SN/T5142—2019Www.bzxZ.net
粘菌素A
粘菌素 B
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附录A
（规范性附录）
粘菌素的相关信息
英文名称
Colistin A
ColistinB
粘菌素的相关信息
CAS编号
1264-72-8
1264-72-8
分子式
C52HNieOrs
C5aHioaNiaOie
相对分子质量
行业标准信息服务平台
参考质谱条件：
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附录B
（资料性附录）
参考质谱条件
离子源：电喷雾离子源（ESI）；b）
扫描方式：正离子扫描；
检测方式：多反应监测（MRM）：电喷雾电压（IS)：5500V；
气帘气流速（CUR）：35psi；
喷雾气流速（GS1）：55psi；
辅助加热气流速（GS2）：55psi；离子源温度（TEM）：550℃；
去簇电压（DP）：60.00V：
人口电压（EP)：10.00V；
碰撞室出口电压（CXP）：16.00V；驻留时间：100msec；
定性离子对、定量离子对和碰撞能量见表B.1。m）
表B.1粘菌素的定性离子对、定量离子对和碰撞能量化合物
粘菌素A
粘菌素B
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参考保留时间
定性离子对
定量离子对
行业核准信息服务平台
碰撞能量/(V）
/(min）
/(m/z)
386.1/101.2
386.1/380.3
391.2/101.1
391.2/385.1
/(m/z)
386.1/101.2
391.2/101.1
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附录C
（资料性附录）
粘菌素的选择离子色谱图
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粘菌素A的选择离子色谱图
kex .ecs.
4R55:12412-1Ew\IT.mFy
业标准信息服务平台
粘菌素B的选择离子色谱图
iiiKAa~cJouaKAa
附录D
（资料性附录）
回收率
粘菌素（4+B）添加浓度及其平均回收率的试验数据（n=6）添加浓度/（μg/kg）
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平均回收率/（%）
94.6~109.6
102.0~108.7
92.7~102.0
86.0~108.7
88.7~109.0
80.2~105.2
91.5~105.5
94.2~106.5
104.0~109.4
87.0~105.5
80.3~107.2
81.8~108.6
上标准信息服务平台
81.7~91.3
95.3~108.7
92.5109.0
82.4~106.6
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Foreword
Thisstandard isdrafted accordingtoGB/T1.1-2009\Directivesfor standardization—Part1:Structureanddraftingof standards\andGB/T20001.42001\Rulesfordraftingstandards—Part4:Meth-ods of chemical analysis
This standard was proposed by and is under the charge of General Administration of Customs,P.R.China.
ThisstandardwasdraftedbyShijiazhuangCustomsdistrictP.R.ChinaThis standard wasmainly drafted byHouXia,WangFengchi,Zhao Yanbing,KanBaodong,LiuXiaomao,AiLianfeng.XuWenke
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