SN/T 5140-2019
基本信息
标准号： SN/T 5140-2019
中文名称：出口动物源食品中磺胺类药物残留量的测定
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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出版信息
相关单位信息
标准简介
标准号：SN/T 5140-2019
标准名称：出口动物源食品中磺胺类药物残留量的测定
英文名称：Determination of sulfonamides residues in foodstuffs of animal origin for export
标准格式：PDF
发布时间：2019-10-25
实施时间：2020-05-01
标准大小：4.97M
标准介绍：本标准按照GB/T1.12009给出的规则编写。
本标准整合、修订了SN0498-1995《出口肉类中磺胺间二甲氧嘧啶残留量检验方法》、SN/T1965-2007《鳗鱼及其制品中磺胺类药物残留量测定方法高效液相色谱法》和SN/2580-2)10《进出口蜂王浆中16种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》，与上述三个标准相比，除编辑性修改以外，主要技术内容变化如下
液相色谱法适用范围増加」畜禽肌肉，检测药物増加了磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺对甲氧嘧啶、
磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺二甲异嘌唑、苯酰磺胺和磺胺苯吡啶；
液相色谱质谱/质谱法适用范围增加了蜂蜜和脂肪，检测药物増加了磺胺醋酰和磺胺氯吡啶。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国广州海关、中华人民共和国杭州海关。本标准主要起草人：吴映璇、邵琳智、侯建波、陈思敏、林峰、姚仰勛、谢敏玲、蓝草、欧阳少伦
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
SN0498—1995
SN/T1965-2007;
SN/T2580—2010
本标准规定了岀口动物源性食品中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻〓唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氰哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲异嗯唑、芣酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹嗯晽、磺胺苯吡啶、磺胺醋酰和磺胺氯吡啶19种磺胺类药物残留的液相色谱和液相色谱-质谱/质谱测定方法
夲标准第一法适用于畜禽肌肉、水产品中磺胺嘧啶、碳磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺卬氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺阃甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异囈唑、磺胺二甲异囈唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹囈晽和磺胺苯吡啶1?种磺胺类药物残留量的液相色谱法检测；第二法适用于畜禽肌肉、肝脏、水产品、鸡蛋、牛奶、脂肪、蜂蜜和蜂王浆中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲异嗯唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹嗯晽、磺胺苯吡啶、磺胺醋駪和磺胺氯吡啶19种磺胺类药物残留量的液相色谱质谱/质谱法检测和确证。
标准名称：出口动物源食品中磺胺类药物残留量的测定
英文名称：Determination of sulfonamides residues in foodstuffs of animal origin for export
标准格式：PDF
发布时间：2019-10-25
实施时间：2020-05-01
标准大小：4.97M
标准介绍：本标准按照GB/T1.12009给出的规则编写。
本标准整合、修订了SN0498-1995《出口肉类中磺胺间二甲氧嘧啶残留量检验方法》、SN/T1965-2007《鳗鱼及其制品中磺胺类药物残留量测定方法高效液相色谱法》和SN/2580-2)10《进出口蜂王浆中16种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》，与上述三个标准相比，除编辑性修改以外，主要技术内容变化如下
液相色谱法适用范围増加」畜禽肌肉，检测药物増加了磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺对甲氧嘧啶、
磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺二甲异嘌唑、苯酰磺胺和磺胺苯吡啶；
液相色谱质谱/质谱法适用范围增加了蜂蜜和脂肪，检测药物増加了磺胺醋酰和磺胺氯吡啶。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国广州海关、中华人民共和国杭州海关。本标准主要起草人：吴映璇、邵琳智、侯建波、陈思敏、林峰、姚仰勛、谢敏玲、蓝草、欧阳少伦
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
SN0498—1995
SN/T1965-2007;
SN/T2580—2010
本标准规定了岀口动物源性食品中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻〓唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氰哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲异嗯唑、芣酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹嗯晽、磺胺苯吡啶、磺胺醋酰和磺胺氯吡啶19种磺胺类药物残留的液相色谱和液相色谱-质谱/质谱测定方法
夲标准第一法适用于畜禽肌肉、水产品中磺胺嘧啶、碳磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺卬氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺阃甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异囈唑、磺胺二甲异囈唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹囈晽和磺胺苯吡啶1?种磺胺类药物残留量的液相色谱法检测；第二法适用于畜禽肌肉、肝脏、水产品、鸡蛋、牛奶、脂肪、蜂蜜和蜂王浆中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲异嗯唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹嗯晽、磺胺苯吡啶、磺胺醋駪和磺胺氯吡啶19种磺胺类药物残留量的液相色谱质谱/质谱法检测和确证。
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标准内容
ICS67.050
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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5140—2019
代替SN0498—1995.SN/T1965—2007、SN/T2580—2010出口动物源食品中磺胺类药物
残留量的测定
Determination of sulfonamides residues in foodstuffs ofanimal originforexport
2019-10-25发布
中华人民共和国海关总署发布
2020-05-01实施
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本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则编写SN/T5140—2019
本标准整合，修订了SN0498一1995《出口内类中磺胺间二甲氧密啶残留量检验方法》，SN/11965-2007《鳗鱼及其制品中磺胺类药物残留量测定方法高效液相色谱法》和SN/T2580—2010《进出口蜂王浆中16种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》，与上述三个标准相比，除编辑性修改以外，主要技术内容变化如下：液相色谱法适用范围增加了畜禽肌肉，检测药物增加了磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺二甲异嗯唑、苯酰磺胺和磺胺苯吡啶；液相色谱-质谱/质谱法适用范围增加了择蜜和脂肪，检测药物增加了磺胺酷酰和磺胺氯吡啶。请注意木文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广州海关、中华人民共和国杭州海关本标准主要起草人：昊陕璇、邵琳智、侯建波、陈思敏、林峰、姚仰勋、谢敏玲，蓝草、欧阳少伦本标准所代替标准的历次版本发布情况为：31995；
SN0498
—SN/T1965—2007；
SN/T25802010
1范围
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出口动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定
SN/T5140—2019
本标准规定了出口动物源性食品中磺胺密啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基密啶、磺胺二甲嘧啶磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒哮、磺胺氯哒、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲异嗯唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹嗯啉、磺胺苯吡啶、磺胺醋酰和磺胺氨吡啶19种磺胺类药物残留的液相色谱和液相色谱-质谱/质谱测定方法。木标准第一法适用丁畜禽肌肉、水产品中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲密啶、磺胺对甲氧噻啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氮哒嗪、磺胺间甲氧密啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲异睡唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺唑嗯啉和磺胺苯吡啶17种磺胺类药物残留量的液相色谱法检测；第二法适用于畜禽肌肉、肝脏、水产品，鸡蛋、牛奶、脂肪、蜂蜜和蜂王浆中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺中氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间中氧嘧定、磺胺邻二中氧密啶、磺胺中基异嗯唑、磺胺二中异嗯唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺唑嗯、磺胺茎吡啶、磺胺醋酰和磺胺氯吡啶19种磺胺类药物残留量的液相色谱-质谱/质谱法检测和确证。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注口期的引用文件，仅注口期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3第一法高效液相色谱法（HPLC法）3.1方法提要
试样中的磺胺类药物经乙酸乙酯提取，提取液经正已烷脱脂后用固相萃取柱净化，高效液相色谱仪测定，外标法定量。
3.2试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水，3.2.1甲醇.HPLC级。
3.2.2乙酸乙酯，HPLC级，
3.2.3正已烷。
3.2.4乙酸.HPLC级。
3.2.5氮水，优级纯。
3.2.6乙酸钦，HPLC级。
3.2.7氯化钠
3.2.82mmol/L乙酸铵溶液：准确称取0.154克乙酸铵（3.2.6）于烧杯中，用500mL水溶解并转移至1L容量瓶中.用水定容至刻度
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3.2.9流动相B（0.3%乙酸-2mmol/L乙酸铵溶液）：吸取3mL乙酸（3.2.4）至1L的2mmol/L乙酸铵溶液（3.2.8)中，摇勾备用。3.2.10饱和氯化钠溶液：称取50g氯化钠（3.2.7）于具塞三角瓶中，加人100mL水，摇勺备用。3.2.11洗脱液（5%氨甲醇）：量取5mL氨水（3.2.5）和95mL甲醇（3.2.1）置于聚丙烯试剂瓶中，摇勺备用。
2定容液1：量取50mL甲醇和50mL流动相B(3.2.9)置于具塞三角瓶中，摇勾备用。3.2.12
3.2.13定容液2：量取20ml.甲醇和80mL流动相B(3.2.9）置于具塞三角瓶中，摇匀备用3.2.1417种磺胺类药物标准品：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲异唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺唑啉和磺胺苯吡啶17种磺胺类化合物的中英文名CAS号、分子式和分子量见表A.1纯度均大于95%。3.2.15磺胺标准储备液：准确称取适量17种磺胺类化合物标准品（3.2.14），用甲醇配制成浓度为500ug/mL的标准储备液。
3.2.16磺胺混合标准中间液（10mg/L）：分别吸取适量的磺胺标准储备液（3.2.15）至50mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为10mg/L标准中间液。3.2.17磺胺混合标准中间液（1.0mlg/L）：分别吸适量的磺胺标准储备液（3.2.16）至50mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为1.0mg/L标准中间液。3.2.18标准曲线：按准确吸取一定量的磺胺标准混合中问液（3.2.17）、定容液1（3.2.12）于液相色谱进样瓶中，摇匀备用。该标准曲线溶液即配即用。3.2.19混合型阳离子交换固相萃取柱（150mg.6mL)或性能相当者，使用前依次用5mL甲醇、5ml流动相B(3.2.9)活化。
3.3仪器和设备
3.3.1高效液相色谱仪配紫外或二极管列检测器。3.3.2均质器，配备直径19mm均质刀。3.3.3超声波振荡器
3.3.4高速离心机，4000r/min.8500r/min。肉类组织粉碎机。
3.3.6减压旋转蒸发仪。
3.3.7吹氮浓缩仪。
漩涡振荡器。
3.3.9离心管：具塞，50ml
3.3.10滤膜：0.2m，聚四氟乙烯滤膜。试样的制备与保存
3.4.1在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留量含量的变化3.4.2畜禽肌肉、水产品：取有代表性样约500g，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于一18℃下保存。
3.5测定步骤
3.5.1提取
称取经制备的试样5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人15mL乙酸乙酯（3.2.2）超声10min，用均质器以14000r/min均质30s，提取液以40c0r/min离心5min。上清液转移至100ml茄形瓶中。另取一50mL离心管·加入15mL乙酸乙酯以洗涤均质刀头10s。洗涤液转入前-离心管2
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中，用玻棒捣碎下层残渣，超声10min，在涡旋振荡器上振荡2min，4000r/min离心5min，上清液合并至茄形瓶中。40C减压旋转蒸发至干。残渣用2.0mL定容液1（3.2.12溶解，涡旋振荡1min，超声5min。加人1.0mL饱和氯化钠（3.2.10），振荡0.5min。加入5mL正已烷（3.2.3），涡旋振荡0.5min，转移至15mL离心管中，35c0r/min离心5min分层。弃去上层正已烷，再按上法加人5mL正已脱胎一次，下层清液备用待净化。
3.5.2净化
脱脂后吸取1.5mL下层澄清液加人5.0mL流动相B（3.2.9）.移至已活化的混合型阳离子交换固相萃取柱（3.2.19）中，流速维持在1mL/min。然后用5mL流动相B,2mL甲醇淋洗，流速1mL/min，真空抽干。用8mL洗脱液（3.2.11)洗脱，流速1mlL/min，真空抽干，收集洗脱液。40℃减压旋转蒸发至干。残渣用1.0mL定容液2（3.2.13)溶解，超声5min，涡旋振荡2min.经0.2m滤膜过滤后，供液相色谱仪测定。
3.6测定
高效液相色谱条件
高效液相色谱条件如下：
色谱柱：Cs柱，4.6mm内径）×250mm，5μm，或相当者；流动相：流动相A：甲醇+流动相B：C.3%乙酸2mmol/L乙酸铵溶液，梯度洗脱程序见表1；流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
进样量：40uL：
检测波长：268nm；
表1流动相梯度洗脱程序
梯度时间/min
液相色谱测定
流动相A：甲醇/%
流动相B：0.3%乙酸2mmol/1.乙酸铵溶液/%92
按照3.6.1液相色谱测定条件对标准工作溶液及样液等体积参插进样测定，样品中待测物含量应SN/T 5140—2019
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在标准由线范围之内，如果含量超出标准曲线范围，应进行适当稀释后测定。在该条件下，17种磺胺类化合物的标准物质色谱图参见附录B中图B.1，保留时间参见附录B表B.1。3.7空白试验
除不加试样外，均接上述操作步骤进行3.8结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式（1)计算试样中磺胺类药物的含量，计算结果应扣除空白值：X_×V1000
式中：
X：——试样中被测组分含量，单位为微克每千克（ug/kg)；由标准曲线得到的样液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；样液最终定容体积，单位为毫升（mL）：m
最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。计算结果保留两位有效数字。
3.9测定低限
本方法的测定低限为10ug/kg。
3.10回收率
畜禽肌肉、水产品中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻一座、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧啶、磺胺邻一甲氧嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲异嗯唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹嗯嘛和磺胺苯吡啶17种磺胺药物的添加浓度及回收率数据见附录C中表C.1--表C.3。4第二法液相色谱-质谱/质谱法（LC-MS/MS法）4.1方法提要
试伴中的磺胺类药物经乙酸乙酯和50%三氯乙酸溶液提取，乙睛饱和正已烷脱脂，固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，内标法定量。4.2试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。无特别说明，其他试剂和材料的要求与3.2一致。
4.2.1甲酸.HPLC级。
4.2.2三氯乙酸，HPLC级。
4.2.350%三氯乙酸：准确称取50g三氯乙酸（4.2.2）于烧杯中，用50mL水溶解并转移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度。
4.2.45%甲醇：量取5mL甲醇（3.2.1)和95mL水置于具寒三角瓶中，摇勾备用。4.2.55mmol/L甲酸溶液：吸取96μL甲酸（4.2.1)至500mL水中，摇匀备用。4.2.6定容液：量取20mL甲醇和8cmL5mmol/L甲酸溶液（4.2.5），摇勾备用。4.2.719种磺胺类药物标准品：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对4
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甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲异嗯唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺座噬啉、磺胺苯吡啶、磺胺醋酰和磺胺氯吡啶、19种磺胺类化合物的中英文名、CAS号、分子式和分子量见表A.1，纯度大于等于95%4.2.8磺胺标准储备液：准确称取适量19种磺胺类化合物标准品（4.2.7），用甲醇配制成浓度为500\g/mL的标准储备液。
4.2.9磺胺混合标准中间液（10mg/L）：分别吸取适量的磺胺标准储备液（4.2.8）至50mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为10mg/L标准中间液：4.2.10磺胺混合标准中间液（1.0mg/L）：分别吸取适量的磺胺标准储备液（4.2.9）至50mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为1.0mg/L标准中间液4.2.11磺胺混合标准工作液（100ng/mL）：准确吸取500μL磺胺标准混合标准中间液（4.2.10）至具塞玻璃试管中，准确加人4.50mL甲醇，混匀，现配现用。4.2.12磺胺同位素内标储备液（1Cag/mL）：磺胺同位素内标溶液（1#，2#，3#）:10μg/ml，1.0mL，北京振期公司。15种磺胺同位素内标分别为：磺胺唑恶啉-13Cs、磺胺嘧啶-1Cg、磺胺甲基异嗯唑-3Cs磺胺甲基嘧啶-1\C、磺胺二甲基嘧啶-1\C、磺胺甲氧哒嗪-D3、磺胺邻二甲氧嘧啶-D、磺胺氯哒嗪-13C、磺胺间二甲氧嘧啶-Ds、磺胺吡啶-1\Cs、磺胺噻唑-1Ce、磺胺吡啶-13Cs、磺胺甲噻二唑-\C、磺胺二甲异嗯唑-\3C、磺胺苯吡唑-13C，15种磺胺同位素内标化合物的中英文名、分子式和分子量见表A,1。4.2.13磺胺同位素内标混合中间液（1.0mg/L）：分别吸取适量的磺胺同位素内标溶液（1#，2#，3#）(4.2.12)至10mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为1.0mg/L.标准中间液。4.2.14磺胺同位素内标混合工作液（100ng/mL）：准确吸取500μL磺胺内标混合中间液（4.2.13）至具塞玻璃试管中，准确加入4.50mL甲醇，混匀，现配现用。4.2.15空白基质溶液：将不同基质的阴性空白样品分别按照4.5和4.6处理后得到的溶液。4.2.16标准曲线：按准确吸取一定量的磺胺标准混合工作液（4.2.1）、磺胺内标混合工作液（4.2.14）、空白基质溶液于液相色谱进样瓶中，摇匀备用。该标准曲线溶液即配即用4.2.17混合型阳离子交换固相萃取柱（150mg，6mL)或性能相当者使用前依次用5mL甲醇、5ml水活化。
4.2.18Cis固相萃取柱（2C0mg，3mL)或性能相当者，使用前用5mL甲醇活化。仪器和设备
4.3.1液相色谱-质谱/质谱仪：三重四级杆串联质谱仪，配电喷雾离子源（ESI）。4.3.2其他仪器和设备的要求与3.3一致。4.4试样的制备与保存
4.4.1在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留量含量的变化4.4.2畜禽肌肉、肝脏脂肪、水产品，鸡蛋：取有代表性样约500g，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于一18℃下保存。4.4.3牛奶和蜂蜜：取有代表性样约500g·混合均匀，装人洁净容器作为试样，密封并做好标识，于4℃下保存。
4.4.4蜂王浆：取有代表性样约50Cg，在室湿下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于一18℃下保存。4.5提取与净化
4.5.1畜禽肌肉、肝脏、脂肪和水产品称取经制备的试伴5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人50μL1.0mg/L内标混合中间液5
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（4.2.13），加人15mL乙酸乙醋（3.2.2）超声10min，用均质器以14000r/min均质30s，提取液以40c0r/min离心5min。上清液转移至25mL比色管中。取另→50mL离心管，加人10mL乙酸乙酯以洗涤均质刀头10s。洗涤液转人前一离心管中，用玻棒捣碎下层残渣，超声10min，在涡旋振荡器上振荡2min，4000r/min离心5min，上清液合并至比色管中，用乙酸乙酯定容至刻度，摇勾。分取5ml于15mL试管中，40℃吹氮浓缩至干。残渣用2.0ml定容液（4.2.6）溶解，涡旋振荡1min，超声5min。加人5mL.正已烷（3.2.3），涡旋振荡30s，转移至15mL离心管中，35001/min离心5min。奔去上层正已烷，再加人5mL正已烷脱脂一次，下层溶液转移至1.5mL离心管中，以10000r/min离心5min，经0.2pm滤膜过滤后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。
4.5.2鸡蛋、牛奶和蜂蜜
称取5g（精确至c.01g）试样于50mL离心管中，加人50μL1.0mg/L内标混合中间液（4.2.13），加人10mL水和2mL50%三氯乙酸溶液（4.2.3）.涡旋混匀2min.加水定容至25mL，涡旋混匀30s，85c0r/min离心5min。取5.0mL「清液移至已活化的混合型阳离子固相萃取柱（4.2.17)中，流速维持在1mL/min。15mL水淋洗，3mL5%甲醇溶液（4.2.4）淋洗，拍干后加人8mL洗脱液（3.2.11）洗脱，收集洗脱液，40℃吹氮浓缩至干，2mL定容液（4.2.6）溶解残渣，超声5min，涡旋振荡2min，经0.2um滤膜过滤后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定4.5.3蜂王浆
称取2g（精确至C.01g）试样于50mL离心管中，加人50uL1.0mg/L内标混中间液（4.2.13），加入10mL水和2mL50%三氯乙酸溶液（4.2.3），涡旋混勾2min，加水定容至20mL，涡旋混匀30s，8500r/min离心5min。取5.0ml.上清液移至已活化的混合型阳离子固相萃取柱（4.2.17)中，流速维持在1mL/min。15mL水淋洗，3ml5%甲醇溶液（4.2.4）淋洗，抽干后加人8mL洗脱液（3.2.11）洗脱，收集洗脱液，40℃吹氮浓缩至于，用10mL甲醇分3次洗涤浓缩瓶，甲醇溶液移至已活化的C同相萃取柱（4.2.18）中，流速维持在1mL/min，直接收集流出液，40℃吹氮浓缩至干，1ml.定容液（4.2.6）溶解残渣，超声5min，涡旋振荡2min，经0.2um滤膜过滤后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。4.6测定
液相色谱质谱/质谱条件
液相色谱-质谱/质谱条件如下
色谱柱：Cs柱，4.6mm（内径）×100mm，3m，或柑当者：b)
流动相：甲醇-5mMol/L甲酸溶液，梯度洗脱程序见表2：e
流速：0.30mL/min
柱温：40℃：
进样量：10ul：
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子；
检测方式：多反应监测（MRM)；质谱/质谱参考条件参见附录D
iiiKAa~cJouakAa
表2流动相梯度洗脱程序
梯度时间/min
4.6.2液相色谱-质谱/质谱测定和确证甲醇/%
SN/T5140—2019
5mmol/L甲酸溶液/%
按照4.6.1液相色谱-质谱/质谱条件测定标准工作溶液和样液，内标标准由线法测定样液中的磺胺类化合物含量。样品中待测物含量应在标准曲线范围之内，如果含量超出标准曲线范用，应进行适当稀释后测定。在该条件下，19种磺胺类化合物的多反应监测离子色谱图见附录B中图B.2，保留时间参见附录B中表B.2。
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定试样和标准工作溶液，如果试样中待测物质的保留时间与标准品一致，定性离子对的相对丰度，是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示，应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表3规定的范围，则可判新试样中存在对应的待测物。
表3定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
空白试验
>20%~50%
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。4.8结果计算和表述
标准曲线校准见式(2)此内容来自标准下载网
+6求得a和b,则
试样中磺胺类药物残留量按式（3)计算：X=CXVXD
式中：
标准溶液中目标化合物的峰面积；标准溶液中内标物的峰面积；
>10%~20%
标准溶液中目标化合物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；标准溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；10%
（2）
（3）
SN/T5140—2019
iiiKAa~cJouaKAa
试样溶液中目标化合物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；试样溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；试样中目标化合物的峰面积；
试样中内标物的峰面积：
供试试样中目标化合物的残留量，单位为微克每千克（ug/kg)；样液最终定容体积，单位为毫升（ml）：供试试样质量，单位为克（g)；稀释倍数。
本公式中稀释倍数为5。
计算结果保留三位有效数字。
9方法的测定低限
本方法中猪肉、猪肝、鸡肉、鸡肝、脂肪、鱼肉、牛奶和鸡蛋的测定低限为2.0μg/kg，蜂蜜和蜂王浆的测定低限为5.Cμg/kg。
4.10回收率
动物源性食品中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺腰甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲氧密啶、磺胺甲基异赚唑、磺腰甲异嗯唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹嗯啉、磺胺苯吡啶、磺胺醋酰和磺胺氯吡嗪的添加浓度及回收率数据见附录C中表C.4~C.10。8
中文名称
磺胺嘧院
磺胺噻唑
磺胺吡啶
iiiKAacJouakAa-
附录A
（资料性附录）
磺胺类药物的标准品信息
磺胺类药物的标准品信息
英文名称
Sulfadiazine
Sulfathiazole
Sulfapyridine
磺胺甲基嘧啶
磺胺对甲氧嘧啶
磺胺甲噻二唑
磺陵二中嘧啶
磺胺甲氧哒唛
磺胺氯哒嗪
磺胺甲基异嗯唑
磺胺间甲氧密嚏
磺胺邻二甲氧嘧啶
磺胺二甲异嘎唑
苯酰磺胺
磺胺苯吡唑
磺胺二甲氧嘧噬
磺胺喹嗯晰
磺胺醋
磺胺氯吡嗪
磺胺嘧啶-C
磺胺噻唑-\C
磺胺吡啶-5Ce
磺胺甲基嘧啶-13Cc
磺胺甲氧哒嗪-D
磺胺甲噻二唑-13℃g
磺胺二甲啶13C
磺胺氯哒嗪\C
磺胺甲基异恶唑\C
磺胺邻二甲氧嘧啶-D
Sulfamerazine
Sulfamethoxydiezine
sulfameter
Sulfamethizol
Sulfamethazing
Sulfamethoxypyridazine
Sulfachloropyridazine
Sulfamethoxazole
Sulfamonomethoxine
Sulfadoxine
Sulfisoxazole
Sulfabenzamide
Sulfaphenazcle
Sulfadimethoxine
Sulfaquinoxaline
Sulfacetamide
Sulfaclozine
SulfadiazineC,
Sulfathiazole-13C,
Sulfapyridine-\C,
Sulfamerazine-lC,
Sulfamethoxypyridazine-D
Sulfamethizol\C
Sulfamethazine 13C.
Sulfachloropyridazine-C.
Sulfamethoxazolelc
Sulfadoxine-D
CAS号
68-35-9
72-14-0
144-83-2
127-79-7
651-06-9
144-82-1
57-68-1
80-35-3
80-32-0
723-46-6
1220-83-3
2447-57-6
127-695
127-71-9
526-08-9
122-11-2
59-40-5
144-80-9
102-65-8
分了式
SN/T5140—2019
分了量
CHN,O,S
C, II,N,O,S
CnHN,O,s
CH,N,OS
CHoN OS2
ChH.N.O,s
CnHN,O,S
C.H,CIN.O,S
CHN,O,S
C2HuN,O,s
ChHNOs
ChHuN,O,s
CHN,O,S
C.HnN,O.S
Cc H, CIN, O,s
CC, HN,O,S
CeCa,NOS
CeCeNOs
CuH,D.N,O,S
\C,C, HN,O,S
CCHuNOS
BC.C,H,CIN,O,S
CeC, HnN,O,S
CH.D.N.O.S
SN/T5140—2019
中文名称
iiiKAa~cJouaKAa-
表A.1（续）
英文名称
横胺二甲异嗯唑-\C
磺胺苯吡唑-\Ce
磺胺二甲氧嘧啶-D。
磺胺喹嗯琳-3C
磺胺氯吡嗪C
Sulfisoxazole-1sC
Sulfaphenazcle-\C
Sulfadimethoxine-D,
Sulfaquinoxalinc-C
Sulfaclozine-C
CAS号
分子式
PCCHaNOS
1CC,HN,OS
C H,D, N,O,S
ECC,HN,O,S
EC.C.H.CIN.O,S
分子量
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iiiKAa~cJouakAa
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5140—2019
代替SN0498—1995.SN/T1965—2007、SN/T2580—2010出口动物源食品中磺胺类药物
残留量的测定
Determination of sulfonamides residues in foodstuffs ofanimal originforexport
2019-10-25发布
中华人民共和国海关总署发布
2020-05-01实施
iiiKAa~cJouaKAa
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则编写SN/T5140—2019
本标准整合，修订了SN0498一1995《出口内类中磺胺间二甲氧密啶残留量检验方法》，SN/11965-2007《鳗鱼及其制品中磺胺类药物残留量测定方法高效液相色谱法》和SN/T2580—2010《进出口蜂王浆中16种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》，与上述三个标准相比，除编辑性修改以外，主要技术内容变化如下：液相色谱法适用范围增加了畜禽肌肉，检测药物增加了磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺二甲异嗯唑、苯酰磺胺和磺胺苯吡啶；液相色谱-质谱/质谱法适用范围增加了择蜜和脂肪，检测药物增加了磺胺酷酰和磺胺氯吡啶。请注意木文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广州海关、中华人民共和国杭州海关本标准主要起草人：昊陕璇、邵琳智、侯建波、陈思敏、林峰、姚仰勋、谢敏玲，蓝草、欧阳少伦本标准所代替标准的历次版本发布情况为：31995；
SN0498
—SN/T1965—2007；
SN/T25802010
1范围
iiiKAa~cJouaKAa
出口动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定
SN/T5140—2019
本标准规定了出口动物源性食品中磺胺密啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基密啶、磺胺二甲嘧啶磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒哮、磺胺氯哒、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲异嗯唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹嗯啉、磺胺苯吡啶、磺胺醋酰和磺胺氨吡啶19种磺胺类药物残留的液相色谱和液相色谱-质谱/质谱测定方法。木标准第一法适用丁畜禽肌肉、水产品中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲密啶、磺胺对甲氧噻啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氮哒嗪、磺胺间甲氧密啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲异睡唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺唑嗯啉和磺胺苯吡啶17种磺胺类药物残留量的液相色谱法检测；第二法适用于畜禽肌肉、肝脏、水产品，鸡蛋、牛奶、脂肪、蜂蜜和蜂王浆中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺中氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间中氧嘧定、磺胺邻二中氧密啶、磺胺中基异嗯唑、磺胺二中异嗯唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺唑嗯、磺胺茎吡啶、磺胺醋酰和磺胺氯吡啶19种磺胺类药物残留量的液相色谱-质谱/质谱法检测和确证。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注口期的引用文件，仅注口期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3第一法高效液相色谱法（HPLC法）3.1方法提要
试样中的磺胺类药物经乙酸乙酯提取，提取液经正已烷脱脂后用固相萃取柱净化，高效液相色谱仪测定，外标法定量。
3.2试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水，3.2.1甲醇.HPLC级。
3.2.2乙酸乙酯，HPLC级，
3.2.3正已烷。
3.2.4乙酸.HPLC级。
3.2.5氮水，优级纯。
3.2.6乙酸钦，HPLC级。
3.2.7氯化钠
3.2.82mmol/L乙酸铵溶液：准确称取0.154克乙酸铵（3.2.6）于烧杯中，用500mL水溶解并转移至1L容量瓶中.用水定容至刻度
SN/T 5140—2019
iiiKAa~cJouaKAa
3.2.9流动相B（0.3%乙酸-2mmol/L乙酸铵溶液）：吸取3mL乙酸（3.2.4）至1L的2mmol/L乙酸铵溶液（3.2.8)中，摇勾备用。3.2.10饱和氯化钠溶液：称取50g氯化钠（3.2.7）于具塞三角瓶中，加人100mL水，摇勺备用。3.2.11洗脱液（5%氨甲醇）：量取5mL氨水（3.2.5）和95mL甲醇（3.2.1）置于聚丙烯试剂瓶中，摇勺备用。
2定容液1：量取50mL甲醇和50mL流动相B(3.2.9)置于具塞三角瓶中，摇勾备用。3.2.12
3.2.13定容液2：量取20ml.甲醇和80mL流动相B(3.2.9）置于具塞三角瓶中，摇匀备用3.2.1417种磺胺类药物标准品：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲异唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺唑啉和磺胺苯吡啶17种磺胺类化合物的中英文名CAS号、分子式和分子量见表A.1纯度均大于95%。3.2.15磺胺标准储备液：准确称取适量17种磺胺类化合物标准品（3.2.14），用甲醇配制成浓度为500ug/mL的标准储备液。
3.2.16磺胺混合标准中间液（10mg/L）：分别吸取适量的磺胺标准储备液（3.2.15）至50mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为10mg/L标准中间液。3.2.17磺胺混合标准中间液（1.0mlg/L）：分别吸适量的磺胺标准储备液（3.2.16）至50mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为1.0mg/L标准中间液。3.2.18标准曲线：按准确吸取一定量的磺胺标准混合中问液（3.2.17）、定容液1（3.2.12）于液相色谱进样瓶中，摇匀备用。该标准曲线溶液即配即用。3.2.19混合型阳离子交换固相萃取柱（150mg.6mL)或性能相当者，使用前依次用5mL甲醇、5ml流动相B(3.2.9)活化。
3.3仪器和设备
3.3.1高效液相色谱仪配紫外或二极管列检测器。3.3.2均质器，配备直径19mm均质刀。3.3.3超声波振荡器
3.3.4高速离心机，4000r/min.8500r/min。肉类组织粉碎机。
3.3.6减压旋转蒸发仪。
3.3.7吹氮浓缩仪。
漩涡振荡器。
3.3.9离心管：具塞，50ml
3.3.10滤膜：0.2m，聚四氟乙烯滤膜。试样的制备与保存
3.4.1在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留量含量的变化3.4.2畜禽肌肉、水产品：取有代表性样约500g，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于一18℃下保存。
3.5测定步骤
3.5.1提取
称取经制备的试样5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人15mL乙酸乙酯（3.2.2）超声10min，用均质器以14000r/min均质30s，提取液以40c0r/min离心5min。上清液转移至100ml茄形瓶中。另取一50mL离心管·加入15mL乙酸乙酯以洗涤均质刀头10s。洗涤液转入前-离心管2
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SN/T5140—2019
中，用玻棒捣碎下层残渣，超声10min，在涡旋振荡器上振荡2min，4000r/min离心5min，上清液合并至茄形瓶中。40C减压旋转蒸发至干。残渣用2.0mL定容液1（3.2.12溶解，涡旋振荡1min，超声5min。加人1.0mL饱和氯化钠（3.2.10），振荡0.5min。加入5mL正已烷（3.2.3），涡旋振荡0.5min，转移至15mL离心管中，35c0r/min离心5min分层。弃去上层正已烷，再按上法加人5mL正已脱胎一次，下层清液备用待净化。
3.5.2净化
脱脂后吸取1.5mL下层澄清液加人5.0mL流动相B（3.2.9）.移至已活化的混合型阳离子交换固相萃取柱（3.2.19）中，流速维持在1mL/min。然后用5mL流动相B,2mL甲醇淋洗，流速1mL/min，真空抽干。用8mL洗脱液（3.2.11)洗脱，流速1mlL/min，真空抽干，收集洗脱液。40℃减压旋转蒸发至干。残渣用1.0mL定容液2（3.2.13)溶解，超声5min，涡旋振荡2min.经0.2m滤膜过滤后，供液相色谱仪测定。
3.6测定
高效液相色谱条件
高效液相色谱条件如下：
色谱柱：Cs柱，4.6mm内径）×250mm，5μm，或相当者；流动相：流动相A：甲醇+流动相B：C.3%乙酸2mmol/L乙酸铵溶液，梯度洗脱程序见表1；流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
进样量：40uL：
检测波长：268nm；
表1流动相梯度洗脱程序
梯度时间/min
液相色谱测定
流动相A：甲醇/%
流动相B：0.3%乙酸2mmol/1.乙酸铵溶液/%92
按照3.6.1液相色谱测定条件对标准工作溶液及样液等体积参插进样测定，样品中待测物含量应SN/T 5140—2019
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在标准由线范围之内，如果含量超出标准曲线范围，应进行适当稀释后测定。在该条件下，17种磺胺类化合物的标准物质色谱图参见附录B中图B.1，保留时间参见附录B表B.1。3.7空白试验
除不加试样外，均接上述操作步骤进行3.8结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式（1)计算试样中磺胺类药物的含量，计算结果应扣除空白值：X_×V1000
式中：
X：——试样中被测组分含量，单位为微克每千克（ug/kg)；由标准曲线得到的样液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；样液最终定容体积，单位为毫升（mL）：m
最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。计算结果保留两位有效数字。
3.9测定低限
本方法的测定低限为10ug/kg。
3.10回收率
畜禽肌肉、水产品中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻一座、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧啶、磺胺邻一甲氧嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲异嗯唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹嗯嘛和磺胺苯吡啶17种磺胺药物的添加浓度及回收率数据见附录C中表C.1--表C.3。4第二法液相色谱-质谱/质谱法（LC-MS/MS法）4.1方法提要
试伴中的磺胺类药物经乙酸乙酯和50%三氯乙酸溶液提取，乙睛饱和正已烷脱脂，固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，内标法定量。4.2试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。无特别说明，其他试剂和材料的要求与3.2一致。
4.2.1甲酸.HPLC级。
4.2.2三氯乙酸，HPLC级。
4.2.350%三氯乙酸：准确称取50g三氯乙酸（4.2.2）于烧杯中，用50mL水溶解并转移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度。
4.2.45%甲醇：量取5mL甲醇（3.2.1)和95mL水置于具寒三角瓶中，摇勾备用。4.2.55mmol/L甲酸溶液：吸取96μL甲酸（4.2.1)至500mL水中，摇匀备用。4.2.6定容液：量取20mL甲醇和8cmL5mmol/L甲酸溶液（4.2.5），摇勾备用。4.2.719种磺胺类药物标准品：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对4
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SN/T5140—2019
甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲异嗯唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺座噬啉、磺胺苯吡啶、磺胺醋酰和磺胺氯吡啶、19种磺胺类化合物的中英文名、CAS号、分子式和分子量见表A.1，纯度大于等于95%4.2.8磺胺标准储备液：准确称取适量19种磺胺类化合物标准品（4.2.7），用甲醇配制成浓度为500\g/mL的标准储备液。
4.2.9磺胺混合标准中间液（10mg/L）：分别吸取适量的磺胺标准储备液（4.2.8）至50mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为10mg/L标准中间液：4.2.10磺胺混合标准中间液（1.0mg/L）：分别吸取适量的磺胺标准储备液（4.2.9）至50mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为1.0mg/L标准中间液4.2.11磺胺混合标准工作液（100ng/mL）：准确吸取500μL磺胺标准混合标准中间液（4.2.10）至具塞玻璃试管中，准确加人4.50mL甲醇，混匀，现配现用。4.2.12磺胺同位素内标储备液（1Cag/mL）：磺胺同位素内标溶液（1#，2#，3#）:10μg/ml，1.0mL，北京振期公司。15种磺胺同位素内标分别为：磺胺唑恶啉-13Cs、磺胺嘧啶-1Cg、磺胺甲基异嗯唑-3Cs磺胺甲基嘧啶-1\C、磺胺二甲基嘧啶-1\C、磺胺甲氧哒嗪-D3、磺胺邻二甲氧嘧啶-D、磺胺氯哒嗪-13C、磺胺间二甲氧嘧啶-Ds、磺胺吡啶-1\Cs、磺胺噻唑-1Ce、磺胺吡啶-13Cs、磺胺甲噻二唑-\C、磺胺二甲异嗯唑-\3C、磺胺苯吡唑-13C，15种磺胺同位素内标化合物的中英文名、分子式和分子量见表A,1。4.2.13磺胺同位素内标混合中间液（1.0mg/L）：分别吸取适量的磺胺同位素内标溶液（1#，2#，3#）(4.2.12)至10mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为1.0mg/L.标准中间液。4.2.14磺胺同位素内标混合工作液（100ng/mL）：准确吸取500μL磺胺内标混合中间液（4.2.13）至具塞玻璃试管中，准确加入4.50mL甲醇，混匀，现配现用。4.2.15空白基质溶液：将不同基质的阴性空白样品分别按照4.5和4.6处理后得到的溶液。4.2.16标准曲线：按准确吸取一定量的磺胺标准混合工作液（4.2.1）、磺胺内标混合工作液（4.2.14）、空白基质溶液于液相色谱进样瓶中，摇匀备用。该标准曲线溶液即配即用4.2.17混合型阳离子交换固相萃取柱（150mg，6mL)或性能相当者使用前依次用5mL甲醇、5ml水活化。
4.2.18Cis固相萃取柱（2C0mg，3mL)或性能相当者，使用前用5mL甲醇活化。仪器和设备
4.3.1液相色谱-质谱/质谱仪：三重四级杆串联质谱仪，配电喷雾离子源（ESI）。4.3.2其他仪器和设备的要求与3.3一致。4.4试样的制备与保存
4.4.1在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留量含量的变化4.4.2畜禽肌肉、肝脏脂肪、水产品，鸡蛋：取有代表性样约500g，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于一18℃下保存。4.4.3牛奶和蜂蜜：取有代表性样约500g·混合均匀，装人洁净容器作为试样，密封并做好标识，于4℃下保存。
4.4.4蜂王浆：取有代表性样约50Cg，在室湿下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于一18℃下保存。4.5提取与净化
4.5.1畜禽肌肉、肝脏、脂肪和水产品称取经制备的试伴5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人50μL1.0mg/L内标混合中间液5
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iiiKAa~cJouaKAa
（4.2.13），加人15mL乙酸乙醋（3.2.2）超声10min，用均质器以14000r/min均质30s，提取液以40c0r/min离心5min。上清液转移至25mL比色管中。取另→50mL离心管，加人10mL乙酸乙酯以洗涤均质刀头10s。洗涤液转人前一离心管中，用玻棒捣碎下层残渣，超声10min，在涡旋振荡器上振荡2min，4000r/min离心5min，上清液合并至比色管中，用乙酸乙酯定容至刻度，摇勾。分取5ml于15mL试管中，40℃吹氮浓缩至干。残渣用2.0ml定容液（4.2.6）溶解，涡旋振荡1min，超声5min。加人5mL.正已烷（3.2.3），涡旋振荡30s，转移至15mL离心管中，35001/min离心5min。奔去上层正已烷，再加人5mL正已烷脱脂一次，下层溶液转移至1.5mL离心管中，以10000r/min离心5min，经0.2pm滤膜过滤后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。
4.5.2鸡蛋、牛奶和蜂蜜
称取5g（精确至c.01g）试样于50mL离心管中，加人50μL1.0mg/L内标混合中间液（4.2.13），加人10mL水和2mL50%三氯乙酸溶液（4.2.3）.涡旋混匀2min.加水定容至25mL，涡旋混匀30s，85c0r/min离心5min。取5.0mL「清液移至已活化的混合型阳离子固相萃取柱（4.2.17)中，流速维持在1mL/min。15mL水淋洗，3mL5%甲醇溶液（4.2.4）淋洗，拍干后加人8mL洗脱液（3.2.11）洗脱，收集洗脱液，40℃吹氮浓缩至干，2mL定容液（4.2.6）溶解残渣，超声5min，涡旋振荡2min，经0.2um滤膜过滤后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定4.5.3蜂王浆
称取2g（精确至C.01g）试样于50mL离心管中，加人50uL1.0mg/L内标混中间液（4.2.13），加入10mL水和2mL50%三氯乙酸溶液（4.2.3），涡旋混勾2min，加水定容至20mL，涡旋混匀30s，8500r/min离心5min。取5.0ml.上清液移至已活化的混合型阳离子固相萃取柱（4.2.17)中，流速维持在1mL/min。15mL水淋洗，3ml5%甲醇溶液（4.2.4）淋洗，抽干后加人8mL洗脱液（3.2.11）洗脱，收集洗脱液，40℃吹氮浓缩至于，用10mL甲醇分3次洗涤浓缩瓶，甲醇溶液移至已活化的C同相萃取柱（4.2.18）中，流速维持在1mL/min，直接收集流出液，40℃吹氮浓缩至干，1ml.定容液（4.2.6）溶解残渣，超声5min，涡旋振荡2min，经0.2um滤膜过滤后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。4.6测定
液相色谱质谱/质谱条件
液相色谱-质谱/质谱条件如下
色谱柱：Cs柱，4.6mm（内径）×100mm，3m，或柑当者：b)
流动相：甲醇-5mMol/L甲酸溶液，梯度洗脱程序见表2：e
流速：0.30mL/min
柱温：40℃：
进样量：10ul：
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子；
检测方式：多反应监测（MRM)；质谱/质谱参考条件参见附录D
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表2流动相梯度洗脱程序
梯度时间/min
4.6.2液相色谱-质谱/质谱测定和确证甲醇/%
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5mmol/L甲酸溶液/%
按照4.6.1液相色谱-质谱/质谱条件测定标准工作溶液和样液，内标标准由线法测定样液中的磺胺类化合物含量。样品中待测物含量应在标准曲线范围之内，如果含量超出标准曲线范用，应进行适当稀释后测定。在该条件下，19种磺胺类化合物的多反应监测离子色谱图见附录B中图B.2，保留时间参见附录B中表B.2。
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定试样和标准工作溶液，如果试样中待测物质的保留时间与标准品一致，定性离子对的相对丰度，是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示，应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表3规定的范围，则可判新试样中存在对应的待测物。
表3定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
空白试验
>20%~50%
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。4.8结果计算和表述
标准曲线校准见式(2)此内容来自标准下载网
+6求得a和b,则
试样中磺胺类药物残留量按式（3)计算：X=CXVXD
式中：
标准溶液中目标化合物的峰面积；标准溶液中内标物的峰面积；
>10%~20%
标准溶液中目标化合物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；标准溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；10%
（2）
（3）
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试样溶液中目标化合物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；试样溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；试样中目标化合物的峰面积；
试样中内标物的峰面积：
供试试样中目标化合物的残留量，单位为微克每千克（ug/kg)；样液最终定容体积，单位为毫升（ml）：供试试样质量，单位为克（g)；稀释倍数。
本公式中稀释倍数为5。
计算结果保留三位有效数字。
9方法的测定低限
本方法中猪肉、猪肝、鸡肉、鸡肝、脂肪、鱼肉、牛奶和鸡蛋的测定低限为2.0μg/kg，蜂蜜和蜂王浆的测定低限为5.Cμg/kg。
4.10回收率
动物源性食品中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺腰甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲氧密啶、磺胺甲基异赚唑、磺腰甲异嗯唑、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹嗯啉、磺胺苯吡啶、磺胺醋酰和磺胺氯吡嗪的添加浓度及回收率数据见附录C中表C.4~C.10。8
中文名称
磺胺嘧院
磺胺噻唑
磺胺吡啶
iiiKAacJouakAa-
附录A
（资料性附录）
磺胺类药物的标准品信息
磺胺类药物的标准品信息
英文名称
Sulfadiazine
Sulfathiazole
Sulfapyridine
磺胺甲基嘧啶
磺胺对甲氧嘧啶
磺胺甲噻二唑
磺陵二中嘧啶
磺胺甲氧哒唛
磺胺氯哒嗪
磺胺甲基异嗯唑
磺胺间甲氧密嚏
磺胺邻二甲氧嘧啶
磺胺二甲异嘎唑
苯酰磺胺
磺胺苯吡唑
磺胺二甲氧嘧噬
磺胺喹嗯晰
磺胺醋
磺胺氯吡嗪
磺胺嘧啶-C
磺胺噻唑-\C
磺胺吡啶-5Ce
磺胺甲基嘧啶-13Cc
磺胺甲氧哒嗪-D
磺胺甲噻二唑-13℃g
磺胺二甲啶13C
磺胺氯哒嗪\C
磺胺甲基异恶唑\C
磺胺邻二甲氧嘧啶-D
Sulfamerazine
Sulfamethoxydiezine
sulfameter
Sulfamethizol
Sulfamethazing
Sulfamethoxypyridazine
Sulfachloropyridazine
Sulfamethoxazole
Sulfamonomethoxine
Sulfadoxine
Sulfisoxazole
Sulfabenzamide
Sulfaphenazcle
Sulfadimethoxine
Sulfaquinoxaline
Sulfacetamide
Sulfaclozine
SulfadiazineC,
Sulfathiazole-13C,
Sulfapyridine-\C,
Sulfamerazine-lC,
Sulfamethoxypyridazine-D
Sulfamethizol\C
Sulfamethazine 13C.
Sulfachloropyridazine-C.
Sulfamethoxazolelc
Sulfadoxine-D
CAS号
68-35-9
72-14-0
144-83-2
127-79-7
651-06-9
144-82-1
57-68-1
80-35-3
80-32-0
723-46-6
1220-83-3
2447-57-6
127-695
127-71-9
526-08-9
122-11-2
59-40-5
144-80-9
102-65-8
分了式
SN/T5140—2019
分了量
CHN,O,S
C, II,N,O,S
CnHN,O,s
CH,N,OS
CHoN OS2
ChH.N.O,s
CnHN,O,S
C.H,CIN.O,S
CHN,O,S
C2HuN,O,s
ChHNOs
ChHuN,O,s
CHN,O,S
C.HnN,O.S
Cc H, CIN, O,s
CC, HN,O,S
CeCa,NOS
CeCeNOs
CuH,D.N,O,S
\C,C, HN,O,S
CCHuNOS
BC.C,H,CIN,O,S
CeC, HnN,O,S
CH.D.N.O.S
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中文名称
iiiKAa~cJouaKAa-
表A.1（续）
英文名称
横胺二甲异嗯唑-\C
磺胺苯吡唑-\Ce
磺胺二甲氧嘧啶-D。
磺胺喹嗯琳-3C
磺胺氯吡嗪C
Sulfisoxazole-1sC
Sulfaphenazcle-\C
Sulfadimethoxine-D,
Sulfaquinoxalinc-C
Sulfaclozine-C
CAS号
分子式
PCCHaNOS
1CC,HN,OS
C H,D, N,O,S
ECC,HN,O,S
EC.C.H.CIN.O,S
分子量
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