SN/T 0868-2017
基本信息
标准号： SN/T 0868-2017
中文名称：出口甜叶菊中总糖甙含量的测定
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 0868-2017.Determination of steviosides in stevia leaf for export.
1范围
SN/T 0868规定了出口甜叶菊中总糖甙含量的测定方法。
SN/T 0868适用了甜叶菊中总糖甙的检测和确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分 析实验室用水规格和试验方法
第一法高效液相色谱法
3方法提要
试样中的总糖甙用水超声提取,用带有紫外检测器的液相色谱仪(波长200nm)测定,以色谱峰的保留时间定性,外标法定量。
4试剂和材 料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 乙腈:色谱纯。
4.2乙 腈-水溶液(78+22,体积比):取78 mL的乙腈,加入22 mL的水,混匀。
4.3标准物质 :甜菊糖甙(CAS号57817-89- 7)纯度≥98%。
4.4标准物质 :瑞鲍迪甙A(CAS号58543-16-1)纯度≥98%。
4.5标准物质:瑞鲍迪甙C(CAS号63550-99-2)纯度≥98%。
4.6标准物质 :杜克甙A(CAS号64432-06-0)纯度≥98%。
4.7标准物质:甜菊 双糖甙(CAS号41093-60-1)纯度≥>93%。
4.8甜菊 糖甙标准储备溶液:1.0 mg/mL。准确称取甜菊糖甙标准物质10.0mg(精确至0.1 mg),
4.2溶液溶解,并定容至10mL。所配制溶液于0°C~4°C冰箱可保存6个月。
4.9 瑞鲍迪甙A标准储备溶液:1.0mg/mL。准确称取瑞鲍迪甙A标准物质10.0mg(精确至0.1 mg),用4.2溶液溶解,并定容至10mL。所配制溶液于0 °C~4°C冰箱可保存6个月。
1范围
SN/T 0868规定了出口甜叶菊中总糖甙含量的测定方法。
SN/T 0868适用了甜叶菊中总糖甙的检测和确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分 析实验室用水规格和试验方法
第一法高效液相色谱法
3方法提要
试样中的总糖甙用水超声提取,用带有紫外检测器的液相色谱仪(波长200nm)测定,以色谱峰的保留时间定性,外标法定量。
4试剂和材 料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 乙腈:色谱纯。
4.2乙 腈-水溶液(78+22,体积比):取78 mL的乙腈,加入22 mL的水,混匀。
4.3标准物质 :甜菊糖甙(CAS号57817-89- 7)纯度≥98%。
4.4标准物质 :瑞鲍迪甙A(CAS号58543-16-1)纯度≥98%。
4.5标准物质:瑞鲍迪甙C(CAS号63550-99-2)纯度≥98%。
4.6标准物质 :杜克甙A(CAS号64432-06-0)纯度≥98%。
4.7标准物质:甜菊 双糖甙(CAS号41093-60-1)纯度≥>93%。
4.8甜菊 糖甙标准储备溶液:1.0 mg/mL。准确称取甜菊糖甙标准物质10.0mg(精确至0.1 mg),
4.2溶液溶解,并定容至10mL。所配制溶液于0°C~4°C冰箱可保存6个月。
4.9 瑞鲍迪甙A标准储备溶液:1.0mg/mL。准确称取瑞鲍迪甙A标准物质10.0mg(精确至0.1 mg),用4.2溶液溶解,并定容至10mL。所配制溶液于0 °C~4°C冰箱可保存6个月。
标准图片预览
标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T0868—2017
代替SN/T0868—2000
出口甜叶菊中总糖含量的测定
Determination of steviosides in stevia leaf for export2017-05-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-12-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替SN/T0868—2000《进出口甜叶菊中总糖武含量的测定方法本标准与SN/T0868一2000相比，主要技术变化如下：修改了标准名称；
一增加了高效液相色谱法作为本标准的第一法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局，SN/T0868—2017
比色法》。
本标准主要起草人：曲栗、曹晨、王传现、樊祥、顾莹、盛永刚、韩丽、王敏、邓晓军。本标准所代替标准的历次版本发布情况为-SN/T0868—2000。
1范围
出口甜叶菊中总糖贰含量的测定本标准规定了出口甜叶菊中总糖武含量的测定方法本标准适用了甜叶菊中总糖试的检测和确证。2规范性引用文件
SN/T0868—2017
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法第一法高效液相色谱法
3方法提要
试样中的总糖武用水超声提取，用带有紫外检测器的液相色谱仪（波长200nm）测定，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1乙睛：色谱纯。
4.2乙睛-水溶液（78十22，体积比）：取78mL的乙睛，加人22mL的水，混勾。4.3标准物质：甜菊糖试（CAS号57817-89-7）纯度≥98%。4.4标准物质：瑞鲍迪贰A（CAS号58543-16-1）纯度≥98%。4.5标准物质：瑞鲍迪试C（CAS号63550-99-2）纯度≥98%。4.6标准物质：杜克武A（CAS号64432-06-0）纯度≥98%。4.7标准物质：甜菊双糖武（CAS号41093-60-1）纯度≥93%。4.8甜菊糖武标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取甜菊糖标准物质10.0mg（精确至0.1mg），用4.2溶液溶解，并定容至10mL。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存6个月。4.9瑞鲍迪武A标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取瑞鲍迪贰A标准物质10.0mg（精确至0.1mg），用4.2溶液溶解，并定容至10mL。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存6个月。0瑞鲍迪武C标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取瑞鲍迪贰C标准物质10.0mg（精确至4.10
0.1mg，用4.2溶液溶解，并定容至10mL。所配制溶液于0C～一4C冰箱可保存6个月。4.11杜克武A标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取杜克A标准物质10.0mg（精确至0.1mg），用4.2溶液溶解，并定容至10mL。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存6个月。4.12甜菊双糖武标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取甜菊双糖试标准物质10.0mg（精确至0.1mg），用4.2溶液溶解，并定容至10mL。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存6个月。1
SN/T0868—2017
4.13总糖试混合标准中间溶液：1.0mg/mL。分别准确吸取甜菊糖武、瑞鲍迪武A、瑞鲍迪试C、杜克武A和甜菊双糖武标准储备溶液2mL于10mL容量瓶中，配制成浓度为1.0mg/mL混合标准中间溶液。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存3个月。4.14总糖混合标准工作溶液：根据需要吸取适量混合标准中间溶液，用4.2溶液稀释成适当的混合标准工作溶液。混合标准工作溶液现用现配。5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。5.2液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子（ESI)源。5.3分析天平：感量为0.1mg和0.01g。5.4涡旋混合器。
5.5离心机：转速不低于4000r/min。5.6
超声波清洗器。
6分析步骤
6.1试样处理
称取约0.5g试样（精确至0.001g）于50mL离心管中，用水定容至50mL，振荡，超声提取15min吸取500μL，加人500μL乙振荡混勾，15000r/min离心5min，过0.22μm有机相滤膜，供HPLC测定。
6.2液相色谱测定
色谱参考条件
色谱参考条件如下：
色谱柱：氨基柱，250mmx4.6mm（内径），5μm，或性能相当者。a)
柱温：室温。
流动相：乙睛-水（78+22，体积比）。流速：0.8mL/min。
检测波长：220nm。
进样量：10μL。
色谱测定
在仪器最佳工作条件下，用标准工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，以标准工作溶液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定线性范围内。在上述色谱条件下，混合标准溶液色谱图参见附录A。6.3液相色谱-质谱/质谱确证
6.3.1色谱参考条件
色谱参考条件如下：
色谱柱：氨基柱，150mm×4.6mm（内径），5μm，或性能相当者。a)
b）流动相：乙睛-水（78十22，体积比）。2
c）流速：0.5mL/min。
d）进样量：5μL。
6.3.2质谱参考条件
质谱参考条件如下：
a）电离方式：电喷雾电离，负离子。b）扫描方式：选择反应监测（SRM）。SN/T0868—2017
雾化气，气帘气，辅助加热气，碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体：使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，参考质谱条件参见附录B中表B.1，五种甜菊糖武标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图见附录C。6.3.3定性测定
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品一致，定量测定时采用标准曲线法测定。定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对离子丰度允许偏差不超过表1的规定的范围，则可判定样品中存在对应的被测物。5种甜菊糖试标准溶液的多反应监测色谱图参见附录C。表1液相色谱-串联质谱法确证试验时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
6.4空白试验
除不加试样外，均按以上操作步骤进行7结果计算和表述
>20~50
试样中甜菊糖试的含量按式（1）进行计算：CxV
mx1000
式中：
>10~20
试样中甜菊糖武的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；样液中甜菊糖武的测定值，单位为微克每毫升（ug/mL）；试样的最后定容体积，单位为毫升（mL）：试样质量，单位克（g）；
1000一一由μg/mL换算成mg/mL的换算因子；100
由mg/g换算成mg/100g的换算因子。10
甜菊糖武、瑞鲍迪贰A、瑞鲍迪武C、杜克A和甜菊双糖试各组分之和即为总糖武含量。8定量限和回收率
8.1定量限
甜叶菊中的甜菊糖试、瑞鲍迪武A、瑞鲍迪试C、杜克试A和甜菊双糖武的定量限为0.05%。SN/T08682017
8.2回收率
试样添加浓度及回收率试验数据见表2。表2试样中甜菊糖、瑞鲍迪武A、瑞鲍迪武C、杜克贰A和甜菊双糖武的回收率添加浓度/%
9方法提要
甜菊糖贰
81.6~92.8
83.4~101.6
82.4~94.6
瑞鲍迪试A
82.8~95.2
80.8~93.4
82.4~106.4
回收率范围/%
瑞鲍迪戒C
84.8104.2
83.4~98.6
80.8~96.2
第二法比色法
杜克A
84.8~103.6
82.4~94.2
甜菊双糖武
78.6~101.2
79.6~92.2
甜叶菊叶经沸水煮泡，用硫酸铝沉淀和正丁醇提取，以除去样品中色素、还原糖及其他杂质，得到的总糖武水溶液与葱酮-硫酸溶液共同加热，生成绿色的络合物，比色法测定样品中的总糖武，外标法定量。
10试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。10.1硫酸铝：化学纯。
水饱和正丁醇：将正丁醇用水饱和后备用。葱酮显色剂：精确称取0.20g蕙酮，溶于100mL75%硫酸溶液中（需用时现配）。10.4
标准物质：甜菊糖贰（CAS号57817-89-7）纯度≥98%。10.5
标准物质：瑞鲍迪武A（CAS号58543-16-1）纯度≥98%。10.6标准物质：瑞鲍迪C(CAS号63550-99-2）纯度≥98%。10.7
标准物质：杜克贰A（CAS号64432-06-0）纯度≥98%。10.8标准物质：甜菊双糖试（CAS号41093-60-1）纯度≥93%。10.9甜菊糖试标准储备溶液：2.5mg/mL。准确称取甜菊糖试标准物质25mg（精度至0.1mg），用水溶解并定容至10mL。所配制溶液于0℃~4℃冰箱可保存6个月。10.10瑞鲍迪武A标准储备溶液：2.5mg/mL。准确称取瑞鲍迪试A标准物质25mg（精确至0.1mg），用水溶解并定容至10mL。所配制溶液于0℃~4℃冰箱可保存6个月。10.11瑞鲍迪试C标准储备溶液：2.5mg/mL。准确称取瑞鲍迪试C标准物质25mg（精确至0.1mg），用水溶解并定容至10mL。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存6个月。10.12杜克武A标准储备溶液：2.5mg/mL。准确称取杜克试A标准物质25mg（精确至0.1mg）.用水溶解并定容至10mL。所配制溶液于0℃~4℃冰箱可保存6个月。10.13甜菊双糖试标准储备溶液：2.5mg/mL。准确称取甜菊双糖武标准物质25mg（精确至0.1mg），用水溶解并定容至10mL。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存6个月。10.14总糖试混合标准工作溶液：0.5mg/mL。分别准确吸取甜菊糖贰、瑞鲍迪试A，瑞鲍迪武C、杜SN/T0868—2017
克试A和甜菊双糖武标准储备溶液400μL于10mL容量瓶中，用水定容至10mL，配制成浓度为0.5mg/mL总糖武混合标准工作溶液。所配制溶液于0℃4℃冰箱可保存3个月。11
仪器和设备
分光光度计。
11.2分析天平，感量0.1mg和0.01g。11.3超纯水制备系统。
11.4旋转蒸发器。
12分析步骤
12.1试样处理
称取样品1g（精确至0.01g）于150mL烧杯中，加人60mL预先煮沸的蒸馏水，用玻璃棒搅拌浸湿。在沸水浴中加热1h。取出，过滤至250mL容量瓶中，滤纸上的残渣用60mL热水洗人原烧杯中，在水浴中加热1h，过滤于250mL容量瓶中，重复操作4次。滤液合并于同一250mL容量瓶中，用水定容至刻度
吸取上述滤液25mL于100mL烧杯中，加人0.2g硫酸铝（10.1）。待溶解后，用碱调节pH=7，静置1h。将此溶液过滤于125mL分液漏斗中。用水洗涤残渣，最后使体积成50mL。用水饱和正丁醇（10.2)50mL，25mL，25mL分三次提取，提取液收集于125mL鸡心瓶中，在旋转蒸发器上浓缩至干，用蒸馏水溶解浓缩物并移人100mL容量瓶中，定容至刻度。12.2测定
吸取10mL葱酮显色剂（10.3）于25mL比色管中，将比色管移入冰浴中冷却10min后，准确加人1mL样液，并用玻璃棒不断搅拌，使溶液混合均匀。取6支25mL试管，分别加人10mL葱酮显色剂，放人冰浴中，分别吸取总糖试混合标准工作溶液0.00mL0.10mL、0.20mL、0.30mL.0.40mL0.50mL于试管内，分别加水1.00mL、0.90mL、0.80mL.0.70mL，0.60mL，0.50mL，用玻璃棒搅拌均匀，将样品溶液、试剂空白液及总糖试混合标准工作溶液的试管放人沸水浴中加热10min，并不断搅拌。取出，于冰浴中冷却至室温。以酮试剂作空白，于610nm处1cm比色血测吸光度，以标准系列的总糖武含量（mg/mL）为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。样品溶液测出的吸光值与标准曲线比较求出含量。13
结果计算和表述
按式（2）计算试样中的总糖武含量：X=×250×100×100
式中：
试样中总糖武含量，单位为克每百克（g/100g）：样液中甜菊糖武的测定值，单位为毫克每毫升（mg/mL）；一试样质量，单位克（g）；
1000—由mg/mL换算成g/mL的换算因子；100
—-由g/g换算成g/100g的换算因子。·（2)
SN/T0868—2017
标准溶液液相色谱图见图A.1。
附录A
（资料性附录）
标准溶液液相色谱图
杜克试A
甜菊糖试
瑞鲍迪武c
瑞鲍迪试A
甜菊双糖武
时间/min
PDAMultil
图A.1甜菊糖武、瑞鲍迪贰A、瑞鲍迪贰C、杜克试A和甜菊双糖武标准溶液液相色谱图（10μg/mL）质谱参考条件：
电喷雾电压：一4500V：
离子源温度500℃；
附录B
（资料性附录）
质谱参考条件
雾化器压力65psi(14.5psi=100kPa）；气帘气压力35psi(14.5psi=100kPa）。表B.1
甜菊糖试类
化合物
甜菊糖武
Stevioside
瑞鲍迪戒A
Rebaudioside A
瑞鲍迪试C
Rebaudioside C
杜克武A
Dulcoside
甜菊双糖武
Steviolbioside
定性离子对
803.3/641.5
803.3/479.5
965.2/641.3
965.2/803.4
949.1/787.5
949.1/625.3
787.2/625.4
787.2/479.4
641.2/479.2
641.2/317.1
定性离子对定量离子对，去簇压力及碰撞能量定量离子对bZxz.net
803.3/641.5
965.2/803.1
949.1/787.5
787.2/625.4
641.2/479.2
去族压力
碰撞气能量
SN/T0868-2017
碰撞室出口电压
SN/T0868—2017
附录C
（资料性附录）
五种甜菊糖武标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图五种甜菊糖武标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图见图C.1。std100-803.300/641.500(Standard)803.300/641.500Da-sample 5 of 18 from Data 201312...Area:7.65e+004counts Height:5.68e +003 cps RT:9.51 min9.51
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a）甜菊糖武
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瑞鲍迪武A
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d）杜克贰A
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五种甜菊糖贰标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图（浓度为0.1μg/mL）图c.1
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甜菊双糖试
图c.1（续）
SN/T0868-2017
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
出口甜叶菊中总糖贰含量的测定SN/T0868—2017
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010)68533533
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中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16印张1字数20千字2018年5月第一版2018年5月第一次印刷印数1—500
书号：155066：2-32820
定价18.00元
2102-8980
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代替SN/T0868—2000
出口甜叶菊中总糖含量的测定
Determination of steviosides in stevia leaf for export2017-05-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-12-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替SN/T0868—2000《进出口甜叶菊中总糖武含量的测定方法本标准与SN/T0868一2000相比，主要技术变化如下：修改了标准名称；
一增加了高效液相色谱法作为本标准的第一法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局，SN/T0868—2017
比色法》。
本标准主要起草人：曲栗、曹晨、王传现、樊祥、顾莹、盛永刚、韩丽、王敏、邓晓军。本标准所代替标准的历次版本发布情况为-SN/T0868—2000。
1范围
出口甜叶菊中总糖贰含量的测定本标准规定了出口甜叶菊中总糖武含量的测定方法本标准适用了甜叶菊中总糖试的检测和确证。2规范性引用文件
SN/T0868—2017
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法第一法高效液相色谱法
3方法提要
试样中的总糖武用水超声提取，用带有紫外检测器的液相色谱仪（波长200nm）测定，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1乙睛：色谱纯。
4.2乙睛-水溶液（78十22，体积比）：取78mL的乙睛，加人22mL的水，混勾。4.3标准物质：甜菊糖试（CAS号57817-89-7）纯度≥98%。4.4标准物质：瑞鲍迪贰A（CAS号58543-16-1）纯度≥98%。4.5标准物质：瑞鲍迪试C（CAS号63550-99-2）纯度≥98%。4.6标准物质：杜克武A（CAS号64432-06-0）纯度≥98%。4.7标准物质：甜菊双糖武（CAS号41093-60-1）纯度≥93%。4.8甜菊糖武标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取甜菊糖标准物质10.0mg（精确至0.1mg），用4.2溶液溶解，并定容至10mL。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存6个月。4.9瑞鲍迪武A标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取瑞鲍迪贰A标准物质10.0mg（精确至0.1mg），用4.2溶液溶解，并定容至10mL。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存6个月。0瑞鲍迪武C标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取瑞鲍迪贰C标准物质10.0mg（精确至4.10
0.1mg，用4.2溶液溶解，并定容至10mL。所配制溶液于0C～一4C冰箱可保存6个月。4.11杜克武A标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取杜克A标准物质10.0mg（精确至0.1mg），用4.2溶液溶解，并定容至10mL。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存6个月。4.12甜菊双糖武标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取甜菊双糖试标准物质10.0mg（精确至0.1mg），用4.2溶液溶解，并定容至10mL。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存6个月。1
SN/T0868—2017
4.13总糖试混合标准中间溶液：1.0mg/mL。分别准确吸取甜菊糖武、瑞鲍迪武A、瑞鲍迪试C、杜克武A和甜菊双糖武标准储备溶液2mL于10mL容量瓶中，配制成浓度为1.0mg/mL混合标准中间溶液。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存3个月。4.14总糖混合标准工作溶液：根据需要吸取适量混合标准中间溶液，用4.2溶液稀释成适当的混合标准工作溶液。混合标准工作溶液现用现配。5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。5.2液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子（ESI)源。5.3分析天平：感量为0.1mg和0.01g。5.4涡旋混合器。
5.5离心机：转速不低于4000r/min。5.6
超声波清洗器。
6分析步骤
6.1试样处理
称取约0.5g试样（精确至0.001g）于50mL离心管中，用水定容至50mL，振荡，超声提取15min吸取500μL，加人500μL乙振荡混勾，15000r/min离心5min，过0.22μm有机相滤膜，供HPLC测定。
6.2液相色谱测定
色谱参考条件
色谱参考条件如下：
色谱柱：氨基柱，250mmx4.6mm（内径），5μm，或性能相当者。a)
柱温：室温。
流动相：乙睛-水（78+22，体积比）。流速：0.8mL/min。
检测波长：220nm。
进样量：10μL。
色谱测定
在仪器最佳工作条件下，用标准工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，以标准工作溶液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定线性范围内。在上述色谱条件下，混合标准溶液色谱图参见附录A。6.3液相色谱-质谱/质谱确证
6.3.1色谱参考条件
色谱参考条件如下：
色谱柱：氨基柱，150mm×4.6mm（内径），5μm，或性能相当者。a)
b）流动相：乙睛-水（78十22，体积比）。2
c）流速：0.5mL/min。
d）进样量：5μL。
6.3.2质谱参考条件
质谱参考条件如下：
a）电离方式：电喷雾电离，负离子。b）扫描方式：选择反应监测（SRM）。SN/T0868—2017
雾化气，气帘气，辅助加热气，碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体：使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，参考质谱条件参见附录B中表B.1，五种甜菊糖武标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图见附录C。6.3.3定性测定
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品一致，定量测定时采用标准曲线法测定。定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对离子丰度允许偏差不超过表1的规定的范围，则可判定样品中存在对应的被测物。5种甜菊糖试标准溶液的多反应监测色谱图参见附录C。表1液相色谱-串联质谱法确证试验时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
6.4空白试验
除不加试样外，均按以上操作步骤进行7结果计算和表述
>20~50
试样中甜菊糖试的含量按式（1）进行计算：CxV
mx1000
式中：
>10~20
试样中甜菊糖武的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；样液中甜菊糖武的测定值，单位为微克每毫升（ug/mL）；试样的最后定容体积，单位为毫升（mL）：试样质量，单位克（g）；
1000一一由μg/mL换算成mg/mL的换算因子；100
由mg/g换算成mg/100g的换算因子。10
甜菊糖武、瑞鲍迪贰A、瑞鲍迪武C、杜克A和甜菊双糖试各组分之和即为总糖武含量。8定量限和回收率
8.1定量限
甜叶菊中的甜菊糖试、瑞鲍迪武A、瑞鲍迪试C、杜克试A和甜菊双糖武的定量限为0.05%。SN/T08682017
8.2回收率
试样添加浓度及回收率试验数据见表2。表2试样中甜菊糖、瑞鲍迪武A、瑞鲍迪武C、杜克贰A和甜菊双糖武的回收率添加浓度/%
9方法提要
甜菊糖贰
81.6~92.8
83.4~101.6
82.4~94.6
瑞鲍迪试A
82.8~95.2
80.8~93.4
82.4~106.4
回收率范围/%
瑞鲍迪戒C
84.8104.2
83.4~98.6
80.8~96.2
第二法比色法
杜克A
84.8~103.6
82.4~94.2
甜菊双糖武
78.6~101.2
79.6~92.2
甜叶菊叶经沸水煮泡，用硫酸铝沉淀和正丁醇提取，以除去样品中色素、还原糖及其他杂质，得到的总糖武水溶液与葱酮-硫酸溶液共同加热，生成绿色的络合物，比色法测定样品中的总糖武，外标法定量。
10试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。10.1硫酸铝：化学纯。
水饱和正丁醇：将正丁醇用水饱和后备用。葱酮显色剂：精确称取0.20g蕙酮，溶于100mL75%硫酸溶液中（需用时现配）。10.4
标准物质：甜菊糖贰（CAS号57817-89-7）纯度≥98%。10.5
标准物质：瑞鲍迪武A（CAS号58543-16-1）纯度≥98%。10.6标准物质：瑞鲍迪C(CAS号63550-99-2）纯度≥98%。10.7
标准物质：杜克贰A（CAS号64432-06-0）纯度≥98%。10.8标准物质：甜菊双糖试（CAS号41093-60-1）纯度≥93%。10.9甜菊糖试标准储备溶液：2.5mg/mL。准确称取甜菊糖试标准物质25mg（精度至0.1mg），用水溶解并定容至10mL。所配制溶液于0℃~4℃冰箱可保存6个月。10.10瑞鲍迪武A标准储备溶液：2.5mg/mL。准确称取瑞鲍迪试A标准物质25mg（精确至0.1mg），用水溶解并定容至10mL。所配制溶液于0℃~4℃冰箱可保存6个月。10.11瑞鲍迪试C标准储备溶液：2.5mg/mL。准确称取瑞鲍迪试C标准物质25mg（精确至0.1mg），用水溶解并定容至10mL。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存6个月。10.12杜克武A标准储备溶液：2.5mg/mL。准确称取杜克试A标准物质25mg（精确至0.1mg）.用水溶解并定容至10mL。所配制溶液于0℃~4℃冰箱可保存6个月。10.13甜菊双糖试标准储备溶液：2.5mg/mL。准确称取甜菊双糖武标准物质25mg（精确至0.1mg），用水溶解并定容至10mL。所配制溶液于0℃～4℃冰箱可保存6个月。10.14总糖试混合标准工作溶液：0.5mg/mL。分别准确吸取甜菊糖贰、瑞鲍迪试A，瑞鲍迪武C、杜SN/T0868—2017
克试A和甜菊双糖武标准储备溶液400μL于10mL容量瓶中，用水定容至10mL，配制成浓度为0.5mg/mL总糖武混合标准工作溶液。所配制溶液于0℃4℃冰箱可保存3个月。11
仪器和设备
分光光度计。
11.2分析天平，感量0.1mg和0.01g。11.3超纯水制备系统。
11.4旋转蒸发器。
12分析步骤
12.1试样处理
称取样品1g（精确至0.01g）于150mL烧杯中，加人60mL预先煮沸的蒸馏水，用玻璃棒搅拌浸湿。在沸水浴中加热1h。取出，过滤至250mL容量瓶中，滤纸上的残渣用60mL热水洗人原烧杯中，在水浴中加热1h，过滤于250mL容量瓶中，重复操作4次。滤液合并于同一250mL容量瓶中，用水定容至刻度
吸取上述滤液25mL于100mL烧杯中，加人0.2g硫酸铝（10.1）。待溶解后，用碱调节pH=7，静置1h。将此溶液过滤于125mL分液漏斗中。用水洗涤残渣，最后使体积成50mL。用水饱和正丁醇（10.2)50mL，25mL，25mL分三次提取，提取液收集于125mL鸡心瓶中，在旋转蒸发器上浓缩至干，用蒸馏水溶解浓缩物并移人100mL容量瓶中，定容至刻度。12.2测定
吸取10mL葱酮显色剂（10.3）于25mL比色管中，将比色管移入冰浴中冷却10min后，准确加人1mL样液，并用玻璃棒不断搅拌，使溶液混合均匀。取6支25mL试管，分别加人10mL葱酮显色剂，放人冰浴中，分别吸取总糖试混合标准工作溶液0.00mL0.10mL、0.20mL、0.30mL.0.40mL0.50mL于试管内，分别加水1.00mL、0.90mL、0.80mL.0.70mL，0.60mL，0.50mL，用玻璃棒搅拌均匀，将样品溶液、试剂空白液及总糖试混合标准工作溶液的试管放人沸水浴中加热10min，并不断搅拌。取出，于冰浴中冷却至室温。以酮试剂作空白，于610nm处1cm比色血测吸光度，以标准系列的总糖武含量（mg/mL）为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。样品溶液测出的吸光值与标准曲线比较求出含量。13
结果计算和表述
按式（2）计算试样中的总糖武含量：X=×250×100×100
式中：
试样中总糖武含量，单位为克每百克（g/100g）：样液中甜菊糖武的测定值，单位为毫克每毫升（mg/mL）；一试样质量，单位克（g）；
1000—由mg/mL换算成g/mL的换算因子；100
—-由g/g换算成g/100g的换算因子。·（2)
SN/T0868—2017
标准溶液液相色谱图见图A.1。
附录A
（资料性附录）
标准溶液液相色谱图
杜克试A
甜菊糖试
瑞鲍迪武c
瑞鲍迪试A
甜菊双糖武
时间/min
PDAMultil
图A.1甜菊糖武、瑞鲍迪贰A、瑞鲍迪贰C、杜克试A和甜菊双糖武标准溶液液相色谱图（10μg/mL）质谱参考条件：
电喷雾电压：一4500V：
离子源温度500℃；
附录B
（资料性附录）
质谱参考条件
雾化器压力65psi(14.5psi=100kPa）；气帘气压力35psi(14.5psi=100kPa）。表B.1
甜菊糖试类
化合物
甜菊糖武
Stevioside
瑞鲍迪戒A
Rebaudioside A
瑞鲍迪试C
Rebaudioside C
杜克武A
Dulcoside
甜菊双糖武
Steviolbioside
定性离子对
803.3/641.5
803.3/479.5
965.2/641.3
965.2/803.4
949.1/787.5
949.1/625.3
787.2/625.4
787.2/479.4
641.2/479.2
641.2/317.1
定性离子对定量离子对，去簇压力及碰撞能量定量离子对bZxz.net
803.3/641.5
965.2/803.1
949.1/787.5
787.2/625.4
641.2/479.2
去族压力
碰撞气能量
SN/T0868-2017
碰撞室出口电压
SN/T0868—2017
附录C
（资料性附录）
五种甜菊糖武标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图五种甜菊糖武标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图见图C.1。std100-803.300/641.500(Standard)803.300/641.500Da-sample 5 of 18 from Data 201312...Area:7.65e+004counts Height:5.68e +003 cps RT:9.51 min9.51
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a）甜菊糖武
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五种甜菊糖贰标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图（浓度为0.1μg/mL）图c.1
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甜菊双糖试
图c.1（续）
SN/T0868-2017
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
出口甜叶菊中总糖贰含量的测定SN/T0868—2017
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