SN/T 3088-2012
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标准简介
SN/T 3088-2012.Detection and identification of Candidatus Liberobacter africanum.
1范围
SN/T 3088规定了进出境植物检疫中非洲柑桔黄龙病菌(参见附录A)的PCR检测和鉴定方法。
SN/T 3088适用于进出境柑桔接穗等寄主繁殖材料中非洲柑桔黄龙病菌的检疫和鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3缩略语
下列缩略语适用于本文件。
3.1PCR polymerase chain reaction
聚合酶链反应。
3.2DNA deoxyribonucleic acid
脱氧核糖核酸。
3.3dNTP deoxyribonucleoside triphosphate
脱氧核苷三磷酸。
3.4dATP deoxyadenosine triphosphate
脱氧腺苷三磷酸。
3.5dGTP deoxyguanosine triphosphate
脱氧鸟苷三磷酸。
3.6dCTP deoxycytidine triphosphate
脱氧胞苷三磷酸。
3.7dTTP deoxythymidine triphosphate
脱氧胸苷三磷酸。
4原理
4.1 非洲柑桔黄龙病菌的分类地位
学名Candidatus Liberobact
属于变形菌门Proteobacterisca0原備润Aphaproteobecteris. 根瘤菌目Rhizobiales, 根瘤菌科Rhizobiaceae,韧皮部杆菌属Candraauustibertbacre.
属内与其近似的病原菌有亚洲柑桔黄龙病蓝CI ibhernhuinter asiaticum.美洲柑桔黄龙病菌C. Li-berobacter americanum。
1范围
SN/T 3088规定了进出境植物检疫中非洲柑桔黄龙病菌(参见附录A)的PCR检测和鉴定方法。
SN/T 3088适用于进出境柑桔接穗等寄主繁殖材料中非洲柑桔黄龙病菌的检疫和鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3缩略语
下列缩略语适用于本文件。
3.1PCR polymerase chain reaction
聚合酶链反应。
3.2DNA deoxyribonucleic acid
脱氧核糖核酸。
3.3dNTP deoxyribonucleoside triphosphate
脱氧核苷三磷酸。
3.4dATP deoxyadenosine triphosphate
脱氧腺苷三磷酸。
3.5dGTP deoxyguanosine triphosphate
脱氧鸟苷三磷酸。
3.6dCTP deoxycytidine triphosphate
脱氧胞苷三磷酸。
3.7dTTP deoxythymidine triphosphate
脱氧胸苷三磷酸。
4原理
4.1 非洲柑桔黄龙病菌的分类地位
学名Candidatus Liberobact
属于变形菌门Proteobacterisca0原備润Aphaproteobecteris. 根瘤菌目Rhizobiales, 根瘤菌科Rhizobiaceae,韧皮部杆菌属Candraauustibertbacre.
属内与其近似的病原菌有亚洲柑桔黄龙病蓝CI ibhernhuinter asiaticum.美洲柑桔黄龙病菌C. Li-berobacter americanum。
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3088—2012
非洲柑桔黄龙病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Candidatus Liberobacter africanum(Jagoueix et al.)
2012-05-07发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2012-11-16实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T3088-2012
本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国湖北出人境检验检疫局中华人民共和国湖南出人境检验检疫局、中华人民共和国北京出人境检验检疫局。本标准主要起草人：龙海、李一农、李芳荣、冯建军、朱金国、王振华、高文娜、郑耘、龚强1范围
非洲柑桔黄龙病菌检疫鉴定方法SN/T3088—2012
本标准规定了进出境植物检疫中非洲柑桔黄龙病菌（参见附录A)的PCR检测和鉴定方法。本标准适用于进出境柑桔接穗等寄主紧殖材料中非洲柑桔黄龙病菌的检疫和鉴定规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法缩略语
下列缩略语适用于本文件。
PCR polymerase chain reaction聚合酶链反应。
DNA deoxyribonucleic acid
脱氧核糖核酸。
dNTpdeoxyribonucleosidetriphosphate脱氧核苷三磷酸。
deoxyadenosine triphosphate
脱氧腺苷三磷酸。
dGTP deoxyguanosine triphosphate脱氧鸟苷三磷酸。
dCTp deoxyeytidine triphosphate脱氧胞苷三磷酸。
dTTP deoxythymidine triphosphate脱氧胸苷三磷酸。
CTABHexadecyltrimethyl ammoniumBromide十六烷基三甲基漠化胺。
SN/T3088—2012
SDsDodecyl sulfonic acid sodium salt十二烷基磺酸钠。
EB ethidiumbromide
溴化乙锭。
非洲柑桔黄龙病菌的分类地位
学名 Candidatus Liberobact
属于变形菌门Proteobacteri
Rhizobiaceae.韧皮部杆菌属Candidatus属内与其近似的病原菌有亚洲柑桔黄龙病berobacter americanuma
4.2传播途径
病原可以通过嫁接或范丝子
苗木、接穗和果实等进行远距离传4.3鉴定依据
在检疫现场抽取接穗样本，在实扩增·根据PCR扩增结果对种类
5器材和试剂
5.1器材
可封口塑料袋、标签、白磁盆
调、200μL可调、20μL可调、2.5泳仪、凝胶成像仪、电子天平、高压爽5.2试剂
根瘤菌目Rhizobiales+根瘤菌科asiaticum.美洲柑桔黄龙病菌C.Li小能通过汁液和土壤传播，通过带病的自络传插介体为非州供情本
中提取督
肉勺、CR
浴锅超净工作
Trioza erytrede).
性引物进行聚合酶链式反应（PCR)心管、pH计、移液枪（1000μL可、低温冷冻离心机、PCR扩增仪、电除另有规定外，所有试剂均为分析纯和生化级试剂。实验用水均为超纯水，规格符合GB/T6682相关规定。
CTAB抽提缓冲液（见附录B）、液氮、20%SDS、5mol/L醋酸钾（KAc）、75%乙醇、95%乙醇、灭菌水、电泳缓冲液、苯酚、三氯甲烷（氯仿）、异戊醇、异丙醇、引物A2/J5、10×PCR缓冲液（Mg+free）、TaqDNA聚合酶、dNTPs（含dATP、dTTP、dGTP、dGTP）、氯化镁（MgCl）、DL2000Marker、琼脂糖、EB。6
检测与鉴定
6.1检测样品的准备
检测样品：待检接穗选择枝条的韧皮部约2.0g·用无菌水冲洗干净2
SN/T3088-2012
阳性对照样品：取被非洲柑桔黄龙病菌感染的柑桔叶脉约2.0，用无菌水冲洗干净。阴性对照样品：取健康的柑桔叶脉约2.0g，用无菌水冲洗干净。6.2样品核酸的提取
将准备好的检测样品和对照样品各0.5g，用蒸馏水冲洗干净，再用灭菌水冲洗2次，放人经液氮预冷的研钵中.加人液氨研磨至粉末状，加人2.0mL65C预热的CTAB抽提缓冲液·将混合液转移到灭菌的2.0mLEppendorf管中。65C水浴1h，每隔10min轻摇一次.12000r/min离心15min.取上清液，加人等体积的苯/三氯甲烷/异戊醇（25：241）混勾，12000r/min离心10min，取上清液，加人等体积的异丙醇，一20℃放置30min，12000r/min离心10min，弃去上清液，保留沉淀，加人600μL75%乙醇洗涤基因组DNA，12000r/min离心5min.弃去上清液，保留沉淀，加人600μL95%乙醇洗涤基因组DNA，12000r/min离心
溶解DNA
6.3PCR扩增
6.3.1扩增引物（引自Hocquelletetal.，1999）上游引物A2：5-TATAAAGGTTO
下游引物J5：5-ACAAAAGC
6.3.2PCR扩增体系和程序
LAAATAG
ACGAACAA-3
PCR扩增体系（25μL）中各成分依次为XPCR级冲液（M加人适量的灭菌水或TE缓冲液
ce).MgClz2.5mmol/L,dNTPsbzxZ.net
200μmol/L上游引物A20.2μmol/L，下游引物J50.2umol/L，TagDNA聚合酶1.0U.模板DNA1.0μL，灭菌水补足总体积至25L柑桔感病叶脉材
性对照，健康叶脉样品核酸做阴性对品核酸做用
照，超纯水做空白对照。扩增程序为72℃延伸10min。
6.3.3琼脂糖凝胶电泳
用2.0%琼脂糖凝胶进行电EB
6.3.4PCR扩增结果评定
30s.72℃.1min重复35个循环；
杂色，胶成像系统观察
电泳成像结果，如果阳性对照
照和检测样品核
无669bp的预期条带，则判定检测结果为用性：品核酸均无预期条带，则判定检测结果为明7
结果判定
质期条带，而阴性对照和空白对照出现69bp的
现预期条带而阴性对照、空白对照和检测样性对照出
根据PCR扩增结果，如果阳性对照样品和待测样品出现669bp的预期条带，阴性对照样品和空白对照无669bp的预期条带出现，则判定测试样品669bp的预期条带.检测样品、阴性对照样品和空白对照不含有非洲柑桔黄龙病菌。
8样本保存和复核
吉黄龙病菌：如果阳性对照样品出现bp的预期条带出现.则判定测试样品中样品保存6个月，发现非洲柑桔黄龙病的样品保存1年。柑桔接穗经液氮处理后在一20℃条件下保存，检测的原始记录照片，文档按有关规定做好登记，标识和存档，以备必要时复核3
SN/T3088—2012
地理分布
附录A
（资料性附录
非洲柑桔黄龙病菌相关信息
非洲柑桔黄龙病是柑桔上的一种毁灭性细菌病害·为我国进境植物检疫性有害生物，主要分布于南非、津巴布韦、马拉维、布隆迪、肯尼亚、索马里、埃塞俄比亚、喀麦隆、也门、留尼汪、毛里求斯。我国未见发生的报道。
A.2寄主植物
主要危害柑桔属（Citrus spp.）、积属（Poncirus spp.）和金柑属（Fortunellaspp.）。包括桔橙，柠檬、柚、四季桔、柑、茶枝柑、甜橙等。A,3对抗生素的敏感性
对四环素族抗菌素及青霉素敏感。A.4在电镜下观察到的形态
在电镜下看到其形态多为椭圆形或短杆状（见图A，1），大小为（30nm~600nm）×（500nm~1400mm），细胞壁厚度为25mm~30hm，革兰氏染色阴性甜橙叶片筛管中的柑桔黄龙病菌高倍放大的柑精黄龙病菌
电子显微镜下的柑桔黄龙病菌形态（引自Bove，2006）图A1
A,5柑桔黄龙病菌的危害症状
SN/T3088-2012
柑桔感染该病后（见图A.2），可致畸形，树势衰弱，果实苦涩。发病柑桔树一般在3年5年内丧失结果能力·直至枯死，严重时甚至毁灭整个柑桔园。其典型症状为黄梢和斑驳。发病初期·病树部分新梢叶片不转绿而呈均勾黄化：叶片从主、侧脉附近或叶片基部边缘出现黄绿相间的斑驳，后期叶片均匀黄化、失去光泽，叶脉柄肿大，木栓化，硬脆而易脱落，果实小而呈畸形。柑桔黄龙病菌在叶片上引起的症状b）剖开的感染柑桔黄龙病菌的果实感染柑桔黄龙病菌的果实外观
图A.2柑桔黄龙病菌在寄主上的危害症状（引自Bové.2006）SN/T3088—2012
附录B
(规范性附录）
CTAB抽提缓冲液的配制方法
2%CTAB(质量浓度）.100mmol/LTris-HCl(pH=8.0).1.4mol/L氯化钠.20mmol/LEDTA（pH=8.0），120℃湿热灭菌20min，室温保存。研磨植物材料之前加β-殖基乙醇至2%（体积分数）。参考文献
［17SN/T2071-2008亚洲柑桔黄龙病菌检疫鉴定方法SN/T3088—2012
[2] Bove J M. Invited review -Huanglongbing: a destructive.newly-emerging.century-old diseaseof citrus.Journal ofPlantPathology,2006,88.7~37.[3]Hocquellet A,Toorawa P.BoveJ M,et al, Detection and identification of the two Candidatus Liberobacter species associated with citrus huanglongbing by PCR amplification of ribosomal protein genesof theβoperon.Molecular and Cellular Probes.1999.13.373~379.[4] Jagoueix S.Bove J M,Garnier M. PCR detection of the two\Candidatus Liberobacter\species associated with greening disease of citrus. Molecular and Cell Probes,1996,10.43-50.[5] Li W.Lewy L.Hariung J S.Quantitative distribution of\Candidatus Liberibacter asiatieusin citrus plants with citrus huanglongbing.Phytopathology,2009,99.139~144.[6]
Li W.Hartung J S.Levy L. Evaluation of DNA amplification methods for improveddetection of \Candidatus Liberibacter species\ associated with citrus huanglongbing. Plant Disease,2007.91.51-58.
[7] Tatineni S,Sagaram U S,Gowda S,et al. In plant distribution of\Candidatus Liberibacterasiaticus\as revealed by polymerase chain reaction (PCR) and real-time PCR.Phytopathology,2oo8,98.592599
［8]胡浩。应用荧光定量PCR技术研究亚洲韧皮部杆菌在寄主体内的动态变化及分布，重庆：重庆大学生物工程学院.2007.
[9]鹿连明.范国成，胡秀荣等.田间柑橘植株不同部位黄龙病菌的PCR检测及发病原因分析.植物保护，2011.37(2)：45~49.
SN/T3088-2012
中华人民共和国出人境检验检
行业标准
非洲柑桔黄龙病菌检疫鉴定方法SN/T3088-2012
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010）64275323
网址spc.net.cn
中国标准出版社泰皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16
2012年10月第一版
印张0.75
字数14千字
2012年10月第一次印刷
印数1-1600
书号：155066-2-23986
定价18.00元
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非洲柑桔黄龙病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Candidatus Liberobacter africanum(Jagoueix et al.)
2012-05-07发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2012-11-16实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T3088-2012
本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国湖北出人境检验检疫局中华人民共和国湖南出人境检验检疫局、中华人民共和国北京出人境检验检疫局。本标准主要起草人：龙海、李一农、李芳荣、冯建军、朱金国、王振华、高文娜、郑耘、龚强1范围
非洲柑桔黄龙病菌检疫鉴定方法SN/T3088—2012
本标准规定了进出境植物检疫中非洲柑桔黄龙病菌（参见附录A)的PCR检测和鉴定方法。本标准适用于进出境柑桔接穗等寄主紧殖材料中非洲柑桔黄龙病菌的检疫和鉴定规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法缩略语
下列缩略语适用于本文件。
PCR polymerase chain reaction聚合酶链反应。
DNA deoxyribonucleic acid
脱氧核糖核酸。
dNTpdeoxyribonucleosidetriphosphate脱氧核苷三磷酸。
deoxyadenosine triphosphate
脱氧腺苷三磷酸。
dGTP deoxyguanosine triphosphate脱氧鸟苷三磷酸。
dCTp deoxyeytidine triphosphate脱氧胞苷三磷酸。
dTTP deoxythymidine triphosphate脱氧胸苷三磷酸。
CTABHexadecyltrimethyl ammoniumBromide十六烷基三甲基漠化胺。
SN/T3088—2012
SDsDodecyl sulfonic acid sodium salt十二烷基磺酸钠。
EB ethidiumbromide
溴化乙锭。
非洲柑桔黄龙病菌的分类地位
学名 Candidatus Liberobact
属于变形菌门Proteobacteri
Rhizobiaceae.韧皮部杆菌属Candidatus属内与其近似的病原菌有亚洲柑桔黄龙病berobacter americanuma
4.2传播途径
病原可以通过嫁接或范丝子
苗木、接穗和果实等进行远距离传4.3鉴定依据
在检疫现场抽取接穗样本，在实扩增·根据PCR扩增结果对种类
5器材和试剂
5.1器材
可封口塑料袋、标签、白磁盆
调、200μL可调、20μL可调、2.5泳仪、凝胶成像仪、电子天平、高压爽5.2试剂
根瘤菌目Rhizobiales+根瘤菌科asiaticum.美洲柑桔黄龙病菌C.Li小能通过汁液和土壤传播，通过带病的自络传插介体为非州供情本
中提取督
肉勺、CR
浴锅超净工作
Trioza erytrede).
性引物进行聚合酶链式反应（PCR)心管、pH计、移液枪（1000μL可、低温冷冻离心机、PCR扩增仪、电除另有规定外，所有试剂均为分析纯和生化级试剂。实验用水均为超纯水，规格符合GB/T6682相关规定。
CTAB抽提缓冲液（见附录B）、液氮、20%SDS、5mol/L醋酸钾（KAc）、75%乙醇、95%乙醇、灭菌水、电泳缓冲液、苯酚、三氯甲烷（氯仿）、异戊醇、异丙醇、引物A2/J5、10×PCR缓冲液（Mg+free）、TaqDNA聚合酶、dNTPs（含dATP、dTTP、dGTP、dGTP）、氯化镁（MgCl）、DL2000Marker、琼脂糖、EB。6
检测与鉴定
6.1检测样品的准备
检测样品：待检接穗选择枝条的韧皮部约2.0g·用无菌水冲洗干净2
SN/T3088-2012
阳性对照样品：取被非洲柑桔黄龙病菌感染的柑桔叶脉约2.0，用无菌水冲洗干净。阴性对照样品：取健康的柑桔叶脉约2.0g，用无菌水冲洗干净。6.2样品核酸的提取
将准备好的检测样品和对照样品各0.5g，用蒸馏水冲洗干净，再用灭菌水冲洗2次，放人经液氮预冷的研钵中.加人液氨研磨至粉末状，加人2.0mL65C预热的CTAB抽提缓冲液·将混合液转移到灭菌的2.0mLEppendorf管中。65C水浴1h，每隔10min轻摇一次.12000r/min离心15min.取上清液，加人等体积的苯/三氯甲烷/异戊醇（25：241）混勾，12000r/min离心10min，取上清液，加人等体积的异丙醇，一20℃放置30min，12000r/min离心10min，弃去上清液，保留沉淀，加人600μL75%乙醇洗涤基因组DNA，12000r/min离心5min.弃去上清液，保留沉淀，加人600μL95%乙醇洗涤基因组DNA，12000r/min离心
溶解DNA
6.3PCR扩增
6.3.1扩增引物（引自Hocquelletetal.，1999）上游引物A2：5-TATAAAGGTTO
下游引物J5：5-ACAAAAGC
6.3.2PCR扩增体系和程序
LAAATAG
ACGAACAA-3
PCR扩增体系（25μL）中各成分依次为XPCR级冲液（M加人适量的灭菌水或TE缓冲液
ce).MgClz2.5mmol/L,dNTPsbzxZ.net
200μmol/L上游引物A20.2μmol/L，下游引物J50.2umol/L，TagDNA聚合酶1.0U.模板DNA1.0μL，灭菌水补足总体积至25L柑桔感病叶脉材
性对照，健康叶脉样品核酸做阴性对品核酸做用
照，超纯水做空白对照。扩增程序为72℃延伸10min。
6.3.3琼脂糖凝胶电泳
用2.0%琼脂糖凝胶进行电EB
6.3.4PCR扩增结果评定
30s.72℃.1min重复35个循环；
杂色，胶成像系统观察
电泳成像结果，如果阳性对照
照和检测样品核
无669bp的预期条带，则判定检测结果为用性：品核酸均无预期条带，则判定检测结果为明7
结果判定
质期条带，而阴性对照和空白对照出现69bp的
现预期条带而阴性对照、空白对照和检测样性对照出
根据PCR扩增结果，如果阳性对照样品和待测样品出现669bp的预期条带，阴性对照样品和空白对照无669bp的预期条带出现，则判定测试样品669bp的预期条带.检测样品、阴性对照样品和空白对照不含有非洲柑桔黄龙病菌。
8样本保存和复核
吉黄龙病菌：如果阳性对照样品出现bp的预期条带出现.则判定测试样品中样品保存6个月，发现非洲柑桔黄龙病的样品保存1年。柑桔接穗经液氮处理后在一20℃条件下保存，检测的原始记录照片，文档按有关规定做好登记，标识和存档，以备必要时复核3
SN/T3088—2012
地理分布
附录A
（资料性附录
非洲柑桔黄龙病菌相关信息
非洲柑桔黄龙病是柑桔上的一种毁灭性细菌病害·为我国进境植物检疫性有害生物，主要分布于南非、津巴布韦、马拉维、布隆迪、肯尼亚、索马里、埃塞俄比亚、喀麦隆、也门、留尼汪、毛里求斯。我国未见发生的报道。
A.2寄主植物
主要危害柑桔属（Citrus spp.）、积属（Poncirus spp.）和金柑属（Fortunellaspp.）。包括桔橙，柠檬、柚、四季桔、柑、茶枝柑、甜橙等。A,3对抗生素的敏感性
对四环素族抗菌素及青霉素敏感。A.4在电镜下观察到的形态
在电镜下看到其形态多为椭圆形或短杆状（见图A，1），大小为（30nm~600nm）×（500nm~1400mm），细胞壁厚度为25mm~30hm，革兰氏染色阴性甜橙叶片筛管中的柑桔黄龙病菌高倍放大的柑精黄龙病菌
电子显微镜下的柑桔黄龙病菌形态（引自Bove，2006）图A1
A,5柑桔黄龙病菌的危害症状
SN/T3088-2012
柑桔感染该病后（见图A.2），可致畸形，树势衰弱，果实苦涩。发病柑桔树一般在3年5年内丧失结果能力·直至枯死，严重时甚至毁灭整个柑桔园。其典型症状为黄梢和斑驳。发病初期·病树部分新梢叶片不转绿而呈均勾黄化：叶片从主、侧脉附近或叶片基部边缘出现黄绿相间的斑驳，后期叶片均匀黄化、失去光泽，叶脉柄肿大，木栓化，硬脆而易脱落，果实小而呈畸形。柑桔黄龙病菌在叶片上引起的症状b）剖开的感染柑桔黄龙病菌的果实感染柑桔黄龙病菌的果实外观
图A.2柑桔黄龙病菌在寄主上的危害症状（引自Bové.2006）SN/T3088—2012
附录B
(规范性附录）
CTAB抽提缓冲液的配制方法
2%CTAB(质量浓度）.100mmol/LTris-HCl(pH=8.0).1.4mol/L氯化钠.20mmol/LEDTA（pH=8.0），120℃湿热灭菌20min，室温保存。研磨植物材料之前加β-殖基乙醇至2%（体积分数）。参考文献
［17SN/T2071-2008亚洲柑桔黄龙病菌检疫鉴定方法SN/T3088—2012
[2] Bove J M. Invited review -Huanglongbing: a destructive.newly-emerging.century-old diseaseof citrus.Journal ofPlantPathology,2006,88.7~37.[3]Hocquellet A,Toorawa P.BoveJ M,et al, Detection and identification of the two Candidatus Liberobacter species associated with citrus huanglongbing by PCR amplification of ribosomal protein genesof theβoperon.Molecular and Cellular Probes.1999.13.373~379.[4] Jagoueix S.Bove J M,Garnier M. PCR detection of the two\Candidatus Liberobacter\species associated with greening disease of citrus. Molecular and Cell Probes,1996,10.43-50.[5] Li W.Lewy L.Hariung J S.Quantitative distribution of\Candidatus Liberibacter asiatieusin citrus plants with citrus huanglongbing.Phytopathology,2009,99.139~144.[6]
Li W.Hartung J S.Levy L. Evaluation of DNA amplification methods for improveddetection of \Candidatus Liberibacter species\ associated with citrus huanglongbing. Plant Disease,2007.91.51-58.
[7] Tatineni S,Sagaram U S,Gowda S,et al. In plant distribution of\Candidatus Liberibacterasiaticus\as revealed by polymerase chain reaction (PCR) and real-time PCR.Phytopathology,2oo8,98.592599
［8]胡浩。应用荧光定量PCR技术研究亚洲韧皮部杆菌在寄主体内的动态变化及分布，重庆：重庆大学生物工程学院.2007.
[9]鹿连明.范国成，胡秀荣等.田间柑橘植株不同部位黄龙病菌的PCR检测及发病原因分析.植物保护，2011.37(2)：45~49.
SN/T3088-2012
中华人民共和国出人境检验检
行业标准
非洲柑桔黄龙病菌检疫鉴定方法SN/T3088-2012
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010）64275323
网址spc.net.cn
中国标准出版社泰皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16
2012年10月第一版
印张0.75
字数14千字
2012年10月第一次印刷
印数1-1600
书号：155066-2-23986
定价18.00元
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