SN/T 4778-2017
基本信息
标准号： SN/T 4778-2017
中文名称：出口花粉中链霉素和双氢链霉素的测定方法液相色谱-质谱/质谱法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 出口 链霉素 双氢 测定方法 色谱 质谱 质谱法
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 4778-2017.Determination of streptomycin and dihydrostreptomycin in pollen for export-LC-MS/MS method.
1范围
SN/T 4778规定了出口花粉中链霉素和双氢链霉素的液相色谱质谱/质谱法测定方法。
SN/T 4778适用于出口松花粉、玉米花粉、茶花粉、葵花粉、油菜花粉和杂花粉等中链霉素和双氢链霉素的测定和确证。
2规范性文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
样品中的链霉素和双氢链霉素经提取溶液提取,三氯甲烷沉淀样品中的蛋白质,清液过C18小柱净化后用液相色谱-质谱/质谱法测定。外标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂,水采用GB/T6682中规定的一级水。
4.1 甲醇:高效液相色谱级。
4.2磷酸。
4.3叔丁 基甲基醚。
4.4甲酸:高效液相色谱级。
4.5正已烷。
4.6三氯甲烷。
5仪器和设备
5.1 液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI)。
5.2 分析天平:感量分别为0.01 g和0.01 mg.
5.3 高速离心机:8 000 r/min。
5.4 超声振荡器。
5.5 涡旋混合器。
5.6 氮吹仪。
5.7 具塞塑料离心管:50 mL.
5.8 SPE固相萃取装置。
1范围
SN/T 4778规定了出口花粉中链霉素和双氢链霉素的液相色谱质谱/质谱法测定方法。
SN/T 4778适用于出口松花粉、玉米花粉、茶花粉、葵花粉、油菜花粉和杂花粉等中链霉素和双氢链霉素的测定和确证。
2规范性文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
样品中的链霉素和双氢链霉素经提取溶液提取,三氯甲烷沉淀样品中的蛋白质,清液过C18小柱净化后用液相色谱-质谱/质谱法测定。外标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂,水采用GB/T6682中规定的一级水。
4.1 甲醇:高效液相色谱级。
4.2磷酸。
4.3叔丁 基甲基醚。
4.4甲酸:高效液相色谱级。
4.5正已烷。
4.6三氯甲烷。
5仪器和设备
5.1 液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI)。
5.2 分析天平:感量分别为0.01 g和0.01 mg.
5.3 高速离心机:8 000 r/min。
5.4 超声振荡器。
5.5 涡旋混合器。
5.6 氮吹仪。
5.7 具塞塑料离心管:50 mL.
5.8 SPE固相萃取装置。
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4778—2017
出口花粉中链霉素和双氢链霉素的测定方法液相色谱-质谱/质谱法
Determination of streptomycin and dihydrostreptomycin in pollenfor export-LC-MS/MSmethod
2017-05-12发布
2017-12-01实施
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。SN/T4778—2017
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局本标准主要起草人：黄娟、刘艳、柳菌、李静静、姜珊、陈惠兰、殷耀、张晓燕、丁涛。1范围
出口花粉中链霉素和双氢链霉素的测定方法液相色谱-质谱/质谱法
SN/T4778—2017
本标准规定了出口花粉中链霉素和双氢链霉素的液相色谱质谱/质谱法测定方法本标准适用于出口松花粉、玉米花粉、茶花粉、葵花粉、油菜花粉和杂花粉等中链霉素和双氢链霉素的测定和确证。
2规范性文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
样品中的链霉素和双氢链霉素经提取溶液提取，三氯甲烷沉淀样品中的蛋白质，清液过Cis小柱净化后用液相色谱-质谱/质谱法测定。外标法定量4试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水采用GB/T6682中规定的一级水。4.1甲醇：高效液相色谱级。
2磷酸。
叔丁基甲基醚。
甲酸：高效液相色谱级。
5正已烷。
三氯甲烷。
乙酸铵：CH,CO,NH.，高效液相色谱级。庚烷磺酸钠(C,HisSO,Na)。
磷酸钠[NaPO·（H2O)]。
4.10提取溶液：准确称取10.1g庚烷磺酸钠（4.8），4.1g磷酸钠（4.9），用水溶解并转移至1000mL容量瓶中，加5mL磷酸（4.2），用水定容至刻度。4.11叔丁基甲基醚-正已烷溶液（4十1，体积比）：准确量取400mL叔丁基甲基醚（4.3），加人100mL正已烷（4.5），混合均匀
4.12甲酸溶液（5%，体积比）：准确量取5mL甲酸（4.4），加入至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。
4.130.02mol/L乙酸铵溶液：准确称取1.54g乙酸铵（4.7），用水溶解并转移至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。
SN/T4778-2017
4.14甲醇水溶液（3+7体积比）：准确量取300mL甲醇，加入700mL水，混合均匀4.15链霉素标准品[StreptomycinSulfate，（C2HaN,Oiz）2（H,SO,）3.CASNo：3810-74-0]纯度大于或等于98%
4.16双氢链霉素标准品[DihydrostreptomycinSesquisulfateHydrate，（CaHaN,Oia）2·（H,SO,）a，CASNo：5490-27-7纯度大手或等于99%4.17：标准储备液：分别准确称取适量的链霉素、双氢链霉素标准品，用甲醇水溶液（4.14）配制成浓度为1mg/mL的标准储备溶液。0℃~4℃保存3混合标准中间溶液：分别准确移取一定体积的链霉素、双氢链霉素标准储备液（4.17），用甲醇水4.18
溶液（4.14）稀释为10μg/mL.0℃~4℃保存。4.19混合标准工作液：准确移取一定体积的混合标准中间溶液（4.18），用甲醇水溶液（4.14）稀释成1.0μg/mL，现用现配。
4.20Cls小柱：500mg.3mL，或相当者。4.21街
微孔滤膜：水相，0.45μm
仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI)。5.2分析天平：感量分别为0.01g和0.01mg。5.3高速离心机：8000r/min。
5.4超声振荡器。
5.5涡旋混合器。
5.6氮吹仪。
5.7具塞塑料离心管：50mL。
5.8SPE固相萃取装置。
6试样制备和保存
取有代表性的样品约500g，用磨碎机全部磨碎并通过20目筛，混勾，均分成两份作为试样，分别装人洁净的容器内，密封，标明标记，于常温下保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7分析步骤
7.1样品处理
7.1.1提取
称取2g试样（精确到0.01g）置于50mL具塞塑料离心管中，加人提取溶液（4.10）20mL，三氯甲烷3mL，于涡旋混匀器上混合3min，混合均匀后置于超声振荡器中超声15min，8000r/min高速离心5min。取上层清液收集于塑料离心管中，供净化用7.1.2净化
将Cls小柱（预先用5mL甲醇，5mL水活化）连接于20mL塑料针筒下，将样液以1滴/s2滴/s的流速全部通过Cls小柱，在样液在小柱上还剩约2mL左右时，加入5mL水以1滴/s2滴/s的流速2
SN/T4778—2017
淋洗小柱，直至空气流经小柱，弃去流出液。去除针筒，加压抽干约3min后加3ml叔丁基甲基醚-正已烷溶液（4.11）以1滴/s~2滴/s的流速淋洗小柱，弃去流出液，加压抽干约5min后加人5mL甲醇以1滴/s的流速洗脱于10mL试管中。该洗脱液于45℃下氮气吹干，加人0.02mol/L乙酸铵溶液1.0mL溶解残渣，充分涡旋混合后过0.45μm水相滤膜（4.21），供液相色谱-质谱/质谱仪测定。7.1.3基质标准溶液的制备
称取5份约2g阴性试样（精确至0.01g）置于50mL具塞塑料离心管中，分别加人标准品工作液（4.19）10μL、20L50#L、100μL、200μL，余下操作同7.1.1~7.1.27.2测定
液相色谱条件
液相色谱条件如下：
色谱柱：ProtemixWCX-NP5柱，2.1mmX100mm.5um或相当者；a）
流动相：5%甲酸溶液（4.12）、0.02mol/1.乙酸铵溶液（4.13）和甲醇，梯度洗脱；梯度参见附录A中表A.1
流速：350μL/min；
进样量：25μL；
柱温：35℃。
2质谱条件
质谱条件如下：
离子化模式：电喷雾正离子模式（ESI+）；a)
质谱扫描方式：多反应监测（MRM）：其他参考质谱条件参见附录B中的表B.1。c
7.2.3液相色谱-质谱/质谱测定
7.2.3.1定性测定
在上述色谱-质谱条件下，如果样品中检测的色谱峰保留时间与相应的标准品相差在土2.5%以内，并且在扣除背景后所选择的两对离子对与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，其相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，则可判定样品中存在对应的待测物。表1定性确证时相对离子丰度的最大允许误差相对离子丰度（%基峰）
允许的相对误差
7.2.3.2定量测定
>20%~50%
>10%~20%
《10%
采用基质提取标准曲线测定样液中的被测物的含量。样品中被测物量应在标准曲线范围之内，如果含量超出标准曲线范围，应适当稀释至标准曲线范围之内进行检测。标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图参见附录C中的图C.1。3
SN/T4778—2017
空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算和表述
采用外标法定量，用色谱数据处理机或按式（1）计算样品中待测物残留量，计算结果需扣除空白值：A·c.V
式中：
X试样中待测物残留量，单位为纳克每克（ng/g）；样液中待测物的峰面积；
-标准工作溶液中待测物的峰面积；-标准工作溶液中待测物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V
样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；m
最终样液代表的试样量，单位为克（g)。9测定低限与回收率
测定低限
本方法的测定低限为10μg/kg。9.2
回收率
（1）
本标准方法分别以松花粉、玉米花粉、茶花粉、葵花粉、油菜花粉、杂花粉为空白样品基质，进行3个浓度水平的添加回收试验，每个浓度水平进行6次重复实验，测得各种基质链霉素和双氢链霉素的回收率范围参见附录D。
液相色谱梯度洗脱程序见表A,1。附录A
（资料性附录）
液相色谱梯度洗脱程序
时间/min
流速/（μL/min)
液相色谱梯度洗脱程序
甲醇/%
0.02mol/L乙酸铵/%
SN/T4778-2017
5%甲酸/%
SN/T4778—2017
质谱条件如下：
电离方式：ESI+；
毛细管电压：2.5kV；
毛细管温度：350℃；
加热源温度：500℃；
气帘气：氮气.0.06MPa：
辅助气：氮气，5.0L/h；
附录B
（资料性附录）
质谱仪器参考条件”
碰撞气：氩气.o.2Pa1.5mTor)：定性离子对、定量离子对、碰撞能量见表B.1。表B.1
测定物质
链霉素
双氢链霉素
为定量离子对。
多反应监测条件
母离子（m/z）
子离子（m/z）
碰撞能量/eVWww.bzxZ.net
非商业性声明：附录B所列参考质谱条件是在ThermoVantage液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型1
号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。附录C
（资料性附录）
标准溶液多反应监测(MRM)离子色谱图链霉素和双氢链霉素多反应监测（MRM）离子色谱图见图C.1。1003
时间/min
SN/T4778—2017
链霉素、双氢链霉素基质标准溶液的多反应监测（MRM）离子色谱图5.0
SN/T4778—2017
回收率见表D.1。
松花粉
玉米花粉
茶花粉
葵花粉
油菜花粉
杂花粉
附录D
（资料性附录）
回收率
链素（STR）和双氢链霉素（DHS）实验回收率结果添加浓度
μg/kg
82.5~95.2
87.5~96.5
80.6~100.2
76.4~93.7
83.2~102.0
77.5~99.4
71.0~97.0
95.4~104.8
70.5~84.4
70.0~89.5
77.6~98.6
65.8~80.2
74.4~89.0
82.4112.0
80.0~107.5
91.8~110.2
回收率范围
73.3~90.5
82.5~106.0
81.8~105.6
85.4~101.8
74.1~90.9
74.0~97.5
87.2~106.4
72.0~90.2
69.5~89.0
71.8~89.8
67.4~88.2
67.5~89.5
71.6~90.0
89.2~110.5
92.0107.5
93.2~105.4
Foreword
ThisstandardwasdraftedonthebasisoftherequirementofGB/T1.1-2009SN/T4778—2017
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document maybe the subjectof patent rights.The document issuing organization shall not be held responsible for identifying anyorallsuchpatentrights.
This standard was proposed by and is under the charged of Certification and Accreditation Admini-station of the People's Republic of China.DraftingUnitsofthis standard:JiangsuImportandExportCommodity InspectionBureaus ofthePeople'sRepublicofChina
The maindrafters of this standardHuang Juan,Liu Yah,Liu Han,Li Jingjing,Jiang Shah,Chen Hui-lan,YinYao，ZhangXiaoyan，DingTao.9
SN/T4778-—2017
Determinationof streptomycinanddihydrostreptomycininpollenforexport-Lc-Ms/Msmethod1 Scope
The standard specifies the methods for determination of streptomycin and dihydrostreptomycin inpollenforexport-LC/MS/MSmethod.The standardis applicableto the determinationof streptomycinand dihydrostreptomycin in pollen pi-ni,corn pollen,camellia pollen,sunflowerpollen,rapepollen,bee pollen and soon for export.Quotednormativedocuments
The articles of the following documents have become the articles of this standard through the quota-tion. For the dated quoted documents,none of the revised contents (which does not include thecontent for correcting errors) or the revised editions after this standard is applicable to thisstandard. However,everybody who comes to an agreement through this standard is encouraged tostudy whether or not the latest editions of these documents can be used in this standard. For thequoted documents without date.theirlasted editions are applicable to this standard.GB/T6682Waterforanalytical laboratoryuse-Specificationandtestmethods3Principle
The streptomycin anddihydrostreptomycin wasextractedwithextraction solution,deproteinizedbychloroform,then cleaned upby aC18 solidphaseextraction cartridge.Theanalytes weredeterminedby high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry.External standards wereused to quantify.
4Reagents andmaterials
Unless otherwise specified,all the reagent used shouldbe analytical grade,“water\is thefirst gradewaterprescribedbyGB/T6682
4.1Methanol:HPLCgrade.
4.2 Phosphate acid.
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出口花粉中链霉素和双氢链霉素的测定方法液相色谱-质谱/质谱法
Determination of streptomycin and dihydrostreptomycin in pollenfor export-LC-MS/MSmethod
2017-05-12发布
2017-12-01实施
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。SN/T4778—2017
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局本标准主要起草人：黄娟、刘艳、柳菌、李静静、姜珊、陈惠兰、殷耀、张晓燕、丁涛。1范围
出口花粉中链霉素和双氢链霉素的测定方法液相色谱-质谱/质谱法
SN/T4778—2017
本标准规定了出口花粉中链霉素和双氢链霉素的液相色谱质谱/质谱法测定方法本标准适用于出口松花粉、玉米花粉、茶花粉、葵花粉、油菜花粉和杂花粉等中链霉素和双氢链霉素的测定和确证。
2规范性文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
样品中的链霉素和双氢链霉素经提取溶液提取，三氯甲烷沉淀样品中的蛋白质，清液过Cis小柱净化后用液相色谱-质谱/质谱法测定。外标法定量4试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水采用GB/T6682中规定的一级水。4.1甲醇：高效液相色谱级。
2磷酸。
叔丁基甲基醚。
甲酸：高效液相色谱级。
5正已烷。
三氯甲烷。
乙酸铵：CH,CO,NH.，高效液相色谱级。庚烷磺酸钠(C,HisSO,Na)。
磷酸钠[NaPO·（H2O)]。
4.10提取溶液：准确称取10.1g庚烷磺酸钠（4.8），4.1g磷酸钠（4.9），用水溶解并转移至1000mL容量瓶中，加5mL磷酸（4.2），用水定容至刻度。4.11叔丁基甲基醚-正已烷溶液（4十1，体积比）：准确量取400mL叔丁基甲基醚（4.3），加人100mL正已烷（4.5），混合均匀
4.12甲酸溶液（5%，体积比）：准确量取5mL甲酸（4.4），加入至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。
4.130.02mol/L乙酸铵溶液：准确称取1.54g乙酸铵（4.7），用水溶解并转移至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。
SN/T4778-2017
4.14甲醇水溶液（3+7体积比）：准确量取300mL甲醇，加入700mL水，混合均匀4.15链霉素标准品[StreptomycinSulfate，（C2HaN,Oiz）2（H,SO,）3.CASNo：3810-74-0]纯度大于或等于98%
4.16双氢链霉素标准品[DihydrostreptomycinSesquisulfateHydrate，（CaHaN,Oia）2·（H,SO,）a，CASNo：5490-27-7纯度大手或等于99%4.17：标准储备液：分别准确称取适量的链霉素、双氢链霉素标准品，用甲醇水溶液（4.14）配制成浓度为1mg/mL的标准储备溶液。0℃~4℃保存3混合标准中间溶液：分别准确移取一定体积的链霉素、双氢链霉素标准储备液（4.17），用甲醇水4.18
溶液（4.14）稀释为10μg/mL.0℃~4℃保存。4.19混合标准工作液：准确移取一定体积的混合标准中间溶液（4.18），用甲醇水溶液（4.14）稀释成1.0μg/mL，现用现配。
4.20Cls小柱：500mg.3mL，或相当者。4.21街
微孔滤膜：水相，0.45μm
仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI)。5.2分析天平：感量分别为0.01g和0.01mg。5.3高速离心机：8000r/min。
5.4超声振荡器。
5.5涡旋混合器。
5.6氮吹仪。
5.7具塞塑料离心管：50mL。
5.8SPE固相萃取装置。
6试样制备和保存
取有代表性的样品约500g，用磨碎机全部磨碎并通过20目筛，混勾，均分成两份作为试样，分别装人洁净的容器内，密封，标明标记，于常温下保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7分析步骤
7.1样品处理
7.1.1提取
称取2g试样（精确到0.01g）置于50mL具塞塑料离心管中，加人提取溶液（4.10）20mL，三氯甲烷3mL，于涡旋混匀器上混合3min，混合均匀后置于超声振荡器中超声15min，8000r/min高速离心5min。取上层清液收集于塑料离心管中，供净化用7.1.2净化
将Cls小柱（预先用5mL甲醇，5mL水活化）连接于20mL塑料针筒下，将样液以1滴/s2滴/s的流速全部通过Cls小柱，在样液在小柱上还剩约2mL左右时，加入5mL水以1滴/s2滴/s的流速2
SN/T4778—2017
淋洗小柱，直至空气流经小柱，弃去流出液。去除针筒，加压抽干约3min后加3ml叔丁基甲基醚-正已烷溶液（4.11）以1滴/s~2滴/s的流速淋洗小柱，弃去流出液，加压抽干约5min后加人5mL甲醇以1滴/s的流速洗脱于10mL试管中。该洗脱液于45℃下氮气吹干，加人0.02mol/L乙酸铵溶液1.0mL溶解残渣，充分涡旋混合后过0.45μm水相滤膜（4.21），供液相色谱-质谱/质谱仪测定。7.1.3基质标准溶液的制备
称取5份约2g阴性试样（精确至0.01g）置于50mL具塞塑料离心管中，分别加人标准品工作液（4.19）10μL、20L50#L、100μL、200μL，余下操作同7.1.1~7.1.27.2测定
液相色谱条件
液相色谱条件如下：
色谱柱：ProtemixWCX-NP5柱，2.1mmX100mm.5um或相当者；a）
流动相：5%甲酸溶液（4.12）、0.02mol/1.乙酸铵溶液（4.13）和甲醇，梯度洗脱；梯度参见附录A中表A.1
流速：350μL/min；
进样量：25μL；
柱温：35℃。
2质谱条件
质谱条件如下：
离子化模式：电喷雾正离子模式（ESI+）；a)
质谱扫描方式：多反应监测（MRM）：其他参考质谱条件参见附录B中的表B.1。c
7.2.3液相色谱-质谱/质谱测定
7.2.3.1定性测定
在上述色谱-质谱条件下，如果样品中检测的色谱峰保留时间与相应的标准品相差在土2.5%以内，并且在扣除背景后所选择的两对离子对与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，其相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，则可判定样品中存在对应的待测物。表1定性确证时相对离子丰度的最大允许误差相对离子丰度（%基峰）
允许的相对误差
7.2.3.2定量测定
>20%~50%
>10%~20%
《10%
采用基质提取标准曲线测定样液中的被测物的含量。样品中被测物量应在标准曲线范围之内，如果含量超出标准曲线范围，应适当稀释至标准曲线范围之内进行检测。标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图参见附录C中的图C.1。3
SN/T4778—2017
空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算和表述
采用外标法定量，用色谱数据处理机或按式（1）计算样品中待测物残留量，计算结果需扣除空白值：A·c.V
式中：
X试样中待测物残留量，单位为纳克每克（ng/g）；样液中待测物的峰面积；
-标准工作溶液中待测物的峰面积；-标准工作溶液中待测物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V
样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；m
最终样液代表的试样量，单位为克（g)。9测定低限与回收率
测定低限
本方法的测定低限为10μg/kg。9.2
回收率
（1）
本标准方法分别以松花粉、玉米花粉、茶花粉、葵花粉、油菜花粉、杂花粉为空白样品基质，进行3个浓度水平的添加回收试验，每个浓度水平进行6次重复实验，测得各种基质链霉素和双氢链霉素的回收率范围参见附录D。
液相色谱梯度洗脱程序见表A,1。附录A
（资料性附录）
液相色谱梯度洗脱程序
时间/min
流速/（μL/min)
液相色谱梯度洗脱程序
甲醇/%
0.02mol/L乙酸铵/%
SN/T4778-2017
5%甲酸/%
SN/T4778—2017
质谱条件如下：
电离方式：ESI+；
毛细管电压：2.5kV；
毛细管温度：350℃；
加热源温度：500℃；
气帘气：氮气.0.06MPa：
辅助气：氮气，5.0L/h；
附录B
（资料性附录）
质谱仪器参考条件”
碰撞气：氩气.o.2Pa1.5mTor)：定性离子对、定量离子对、碰撞能量见表B.1。表B.1
测定物质
链霉素
双氢链霉素
为定量离子对。
多反应监测条件
母离子（m/z）
子离子（m/z）
碰撞能量/eVWww.bzxZ.net
非商业性声明：附录B所列参考质谱条件是在ThermoVantage液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型1
号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。附录C
（资料性附录）
标准溶液多反应监测(MRM)离子色谱图链霉素和双氢链霉素多反应监测（MRM）离子色谱图见图C.1。1003
时间/min
SN/T4778—2017
链霉素、双氢链霉素基质标准溶液的多反应监测（MRM）离子色谱图5.0
SN/T4778—2017
回收率见表D.1。
松花粉
玉米花粉
茶花粉
葵花粉
油菜花粉
杂花粉
附录D
（资料性附录）
回收率
链素（STR）和双氢链霉素（DHS）实验回收率结果添加浓度
μg/kg
82.5~95.2
87.5~96.5
80.6~100.2
76.4~93.7
83.2~102.0
77.5~99.4
71.0~97.0
95.4~104.8
70.5~84.4
70.0~89.5
77.6~98.6
65.8~80.2
74.4~89.0
82.4112.0
80.0~107.5
91.8~110.2
回收率范围
73.3~90.5
82.5~106.0
81.8~105.6
85.4~101.8
74.1~90.9
74.0~97.5
87.2~106.4
72.0~90.2
69.5~89.0
71.8~89.8
67.4~88.2
67.5~89.5
71.6~90.0
89.2~110.5
92.0107.5
93.2~105.4
Foreword
ThisstandardwasdraftedonthebasisoftherequirementofGB/T1.1-2009SN/T4778—2017
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The maindrafters of this standardHuang Juan,Liu Yah,Liu Han,Li Jingjing,Jiang Shah,Chen Hui-lan,YinYao，ZhangXiaoyan，DingTao.9
SN/T4778-—2017
Determinationof streptomycinanddihydrostreptomycininpollenforexport-Lc-Ms/Msmethod1 Scope
The standard specifies the methods for determination of streptomycin and dihydrostreptomycin inpollenforexport-LC/MS/MSmethod.The standardis applicableto the determinationof streptomycinand dihydrostreptomycin in pollen pi-ni,corn pollen,camellia pollen,sunflowerpollen,rapepollen,bee pollen and soon for export.Quotednormativedocuments
The articles of the following documents have become the articles of this standard through the quota-tion. For the dated quoted documents,none of the revised contents (which does not include thecontent for correcting errors) or the revised editions after this standard is applicable to thisstandard. However,everybody who comes to an agreement through this standard is encouraged tostudy whether or not the latest editions of these documents can be used in this standard. For thequoted documents without date.theirlasted editions are applicable to this standard.GB/T6682Waterforanalytical laboratoryuse-Specificationandtestmethods3Principle
The streptomycin anddihydrostreptomycin wasextractedwithextraction solution,deproteinizedbychloroform,then cleaned upby aC18 solidphaseextraction cartridge.Theanalytes weredeterminedby high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry.External standards wereused to quantify.
4Reagents andmaterials
Unless otherwise specified,all the reagent used shouldbe analytical grade,“water\is thefirst gradewaterprescribedbyGB/T6682
4.1Methanol:HPLCgrade.
4.2 Phosphate acid.
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