SN/T 4850-2017
基本信息
标准号： SN/T 4850-2017
中文名称：出口食品中草铵膦及其代谢物残留量的测定液相色谱质谱/质谱法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 出口 食品 代谢物 残留量 测定 色谱 质谱 质谱法
标准分类号
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相关单位信息
标准简介
SN/T 4850-2017.Determination of glufosinate -ammonium and metabolites residues in export food-Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method.
1范围
SN/T 4850规定了出口食品中草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦,3-(甲基膦基)丙酸残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。
SN/T 4850适用于茶叶稻谷、大豆、玉米、柑橘、苹果、桃、葡萄、香蕉、木瓜、番茄、胡萝卜、马铃薯、洋葱、开心果、菜籽油中草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦、3-(甲基膦基)丙酸残留量的检测和确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版木(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
样品中的草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦、3- (甲基膦基)内酸用水提取,经二氯甲烷和C18固相萃取小柱净化，用液相色谱-质谱/质谱法,电喷雾负离子模式电离(ESI-),基质外标法定量。
4试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为二次超纯水。
4.1 乙腈:色谱纯。
4.2无水乙酸铵: 色谱纯。
4.3氨水:25% ，色谱纯。
4.4二氯甲烷,色谱纯。
5仪器和设备
5.1液相色 谱串联质谱仪:配有电喷雾(ESI)离子源。
5.2 粉碎机。
5.3组织捣碎机。
5.4 涡旋振荡器。
5.5 高速离心机,转速不低于12 000 r/ min.
5.6 固相萃取装置。
5.7 超声清洗器。
5.8分析天平:感量0.1mg和0.01g.
1范围
SN/T 4850规定了出口食品中草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦,3-(甲基膦基)丙酸残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。
SN/T 4850适用于茶叶稻谷、大豆、玉米、柑橘、苹果、桃、葡萄、香蕉、木瓜、番茄、胡萝卜、马铃薯、洋葱、开心果、菜籽油中草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦、3-(甲基膦基)丙酸残留量的检测和确证。
2规范性引用文件
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
样品中的草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦、3- (甲基膦基)内酸用水提取,经二氯甲烷和C18固相萃取小柱净化，用液相色谱-质谱/质谱法,电喷雾负离子模式电离(ESI-),基质外标法定量。
4试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为二次超纯水。
4.1 乙腈:色谱纯。
4.2无水乙酸铵: 色谱纯。
4.3氨水:25% ，色谱纯。
4.4二氯甲烷,色谱纯。
5仪器和设备
5.1液相色 谱串联质谱仪:配有电喷雾(ESI)离子源。
5.2 粉碎机。
5.3组织捣碎机。
5.4 涡旋振荡器。
5.5 高速离心机,转速不低于12 000 r/ min.
5.6 固相萃取装置。
5.7 超声清洗器。
5.8分析天平:感量0.1mg和0.01g.
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4850-2017
出口食品中草铵膦及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of glufosinate-ammonium and metabolites residues in exportfood-Liquidchromatography-tandemmassspectrometrymethod2017-07-21发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2018-03-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草，SN/T4850—2017
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国泉州出人境检验检疫局综合技术服务中心、中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国江西出入境检验检疫局、福建省高建发茶叶有限公司、泉州市洛江泉岩茶业有限公司、福建农林大学。木标准主要起草人：黄伙水、韦航、翁城武、邹强、林永辉、刘正才、林春滢、荣杰峰、李亦军、孙威江、杨方。
1范围
出口食品中草铵麟及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
SN/T4850—2017
本标准规定了出口食品中草铵及其代谢物N-乙酰基草铵膦、3-（甲基麟基）丙酸残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。
本标准适用于茶叶、稻谷、大豆、玉米、柑橘、苹果、桃、葡萄、香蕉、木瓜、番茄、胡萝下、马铃薯、洋葱、开心果、菜籽油中草铵麟及其代谢物N-乙酰基草铵麟、3-（甲基麟基）丙酸残留量的检测和确证。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
样品中的草铵麟及其代谢物N-乙酰基草铵麟、3-（甲基基）内酸用水提取，经二氯甲烷和C1s固相萃取小柱净化，用液相色谱-质谱/质谱法，电喷雾负离子模式电离（ESI-），基质外标法定量。4试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次超纯水。4.1乙腈：色谱纯。
4.2无水乙酸铵：色谱纯。
4.3氨水：25%，色谱纯。
4.4二氯甲烷，色谱纯。
4.5乙酸铵水溶液（1mmol/L，pH=11）：准确称取0.07708g的无水乙酸铵溶解于适量水中，用氨水调节pH=11,用水定容至1000mL。4.6草铵麟标准物质（Glufosinateammonium，GLU，CAS号：77182-82-2，分子式；C,HisN,O,P）：纯度≥97.5%。
4.7N-乙酰基草铵膦标准物质（N-Acetyl-glufosinate，NAGCAS号：73634-73-8，分子式：CH.NO,P）：纯度≥98.5%。
4.83-（甲基膦基）丙酸标准物质（3-methylphosphinicopropionicacid，MPP，CAS号：15090-23-0，分子式：C,H，O,P)：纯度≥98.0%。4.9草铵膦、N-乙酰基草铵麟（NAG）、3-（甲基麟基）丙酸（MPP）标准储备溶液（1.0mg/mL）：精确称取50mg的草铵麟和NAG、MPP标准品，用水溶解并定容至50mL，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中。低于5℃保存。
4.10草铵麟、N-乙酰基草铵麟（NAG）、3-（甲基麟基）丙酸（MPP）标准中间溶液（1.0μg/mL）：取一定1
SN/T4850—2017
量的草铵麟标准储备溶液（4.9），用水稀释成1.0μg/mL，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中，低于5℃保存。
4.11Cz固相萃取柱：500mg，6mL柱。使用前用5mL甲醇、5mL水活化。4.12滤膜：0.22μm，水相。
仪器和设备
液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源。粉碎机。
组织捣碎机。
涡旋振荡器。
高速离心机，转速不低于12000r/min。5.6
固相萃取装置。
超声清洗器
分析天平：感量0.1mg和0.01g。5.8
5.9pH计。
5.10移液器：1mL，5mL。
螺旋盖聚丙烯离心管：50mL。
圆孔筛：2.0mm。
6试样制备与保存
6.1试样制备
6.1.1茶叶和粮谷类
取有代表性样品约200g，用粉碎机粉碎并通过2.0mm圆孔筛，混匀，装人洁净容器内，密封并标识。
6.1.2水果蔬菜类
取有代表性样品500g，将可食部分切碎后（不可水洗），用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装人洁净容器内，密封并标识。
6.1.3植物油类
植物油类液体样品混匀备用。
6.2试样保存
水果、蔬菜类试样在一18℃保存。茶叶、谷物类试样、植物油类液体样品常温保存。7测定步骤
7.1待测样品溶液的制备
7.1.1样品提取
称取均质好的试样茶叶1g（精确至0.01g），植物油、谷物、水果蔬菜5g（精确至0.01g），置于2
SN/T4850—-2017
50mL具塞聚丙烯离心管中，移液器准确加人10mL水，10mL二氟甲烷，充分涡旋振荡10min，超声提取10min，以12000r/min离心5min，收集上清液，待净化。7.1.2样品净化
取样品提取液5mL加人已经活化了的Cs固相萃取柱中，弃去前3mL流出液，收集后2mL流出液，过0.22μm水相滤膜，滤液供液相色谱-质谱/质谱检测。7.2
基质混合标准工作溶液的制备
称取5个均质好的阴性样品茶叶1g（精确至0.01g），植物油、谷物、水果蔬菜5g（精确至0.01g），分别置于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入适量混合标准溶液，其余按照7.1步骤操作完成，制成草铵膦、N-乙酰基草铵膦、3-（甲基膦基）丙酸含量均为0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL的基质标准溶液。
7.3测定
液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：NH2P-502D柱，150mmX2.0mm，粒度5μm或相当者；a
柱温：35℃；
流速：0.25mL/min；
进样量：5uL
流动相：流动相A：1mmol/L乙酸铵水溶液（pH=11）（4.5），流动相B：乙腈。推荐梯度洗脱程序见表1，不同仪器洗脱条件可能不同。表1
流动相梯度洗脱程序表
梯度时间/min
质谱/质谱参考条件
质谱/质谱参考条件如下：
离子源：电喷雾离子源（ESI）：b）
扫描方式：负离子模式扫描；
监测模式：多反应监测（MRM）；流动相A/%
流动相B（乙睛）/%
雾化气、干燥气、碰撞气均为高纯氮气：使用前应调节气体流量以使质谱灵敏度达到检测要d）
求，详细条件参见附录A；
喷雾电压、雾化气压力、干燥气温度、干燥气流速、源内碎裂电压、碰撞能量应优化至最优灵敏度，参考条件和定性离子对、定量离子参见附录A。3
SN/T4850-—2017
7.3.3定量测定
按照确定的液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和基质标准工作溶液，响应值应在仪器检测的线性范围内，以色谱峰面积外标法定量。在上述色谱条件下草铵麟及其代谢物N-乙酰基草铵麟、3-（甲基麟基）丙酸的参考保留时间分别为6.06min、6.18min和6.23min，标准溶液的多反应监测（MRM)色谱图参见附录B中图B.1。
7.3.4定性测定
在相同实验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准工作溶液的保留时间偏差在士2.5%之内；且在扣除背景后的样液图谱中，所选择的离子对均出现，各定性离子对的相对丰度与浓度接近的标准溶液谱图中离子的相对丰度相比，其偏差不超过表2规定的范围，则可确定为样品中存在对应的被测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
7.4空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。7.5结果计算和表述
>20~50
>10~20
用色谱数据处理软件或按式（1）计算样品中草铵麟及代谢物残留量。计算结果需扣除空白值。exV
mx1000
式中：
X样品中被测组分的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C
（1）
一从基质标准工作曲线上得到的上机溶液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；样品提取溶液体积，单位为毫升（mL）；试样称取质量，单位为克（g）。8测定低限和回收率
8.1测定低限
本方法草铵麟及具代谢物N-乙酰基草铵麟、3-（甲基麟基）丙酸的测定低限：茶叶为0.1mg/kg，稻谷、大豆、玉米、柑橘、苹果、桃、葡萄、香蕉、木瓜、番茄、胡萝卜、马铃薯、洋葱、开心果、菜籽油为0.05mg/kg。8.2回收率
本方法样品的添加浓度及回收率试验数据参见附录C中表C.1。质谱参考参数如下：
干燥气温度：300℃；
干燥气流速：10L/min；
雾化气压力：0.31MPa（45psi）：电喷雾电压：-4500V；
鞘流气温度：350℃；
鞘流气流速：12L/min；
喷嘴电压：-1000V；
附录A
（资料性附录）
质谱参考参数\
定性离子对、定量离子对、源内碎裂电压、碰撞能量见表A,1。表A1
草铵麟
N-乙酰基草铵麟
3-(甲基膦基)丙酸
SN/T4850-2017
草铵膦及代谢物的定性离子对、定量离子对、源内碎裂电压、碰撞能量定量离子对m/z
180/95
222/136
151/133
定性离子对推/2
180/95;180/85
222/136;222/59
151/133;151/107
源内碎裂电压/V
碰撞能量/V
1）非商业性声明：附录A所列参考质谐条件是在AgilentHPLC-QQQ6460型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。5
SN/T4850—2017
附录B
（资料性附录）
草铵膦、N-乙酰基草铵麟和3-（甲基麟基）丙酸标准品的多反应监测（MRM）色谱图草铵麟、N-乙酰基草铵膦和3-（甲基麟基）丙酸标准品的多反应监测（MRM)色谱图，见图B.1。X105
-ESITICMRM
说明：
CID**(**->**)GLU+NAG+MPP.d
-FSIMRMFrag=120.0VCID@**(222.10001->59.00000)GLU+NAG+MPP.d2
ESIMRMFrag=120.0VCID@**(222.10001->136.00000)GLU+NAG+MPP.d2
[email protected](180.00000->85.00000)GLU+NAG+MPP.d2
[email protected](180.00000->95.00000)GLU+NAG+MPP.d2
-ESIMRMFrag=110.0VCID@**(151.00000->107.00000)GLU+NAG+MPP.d2
-ESIMRMFrag=110.0VCM@+*(151.00000->133.00000)GLU+NAG+MPP.d2
Countsvs.AcquisitionTime/min8
从上至下依次为：TIC总离子流图：N-乙酰基草铵麟：222/59，222/136草铵麟：180/85180/953-（甲基麟基）丙酸：151/107，151/133子对的MRM图。图B.1
草铵麟、N-乙酰基草铵麟和3-（甲基麟基）丙酸标准品的多反应监测（MRM）色谱图附录C
（资料性附录）
SN/T4850—2017
草铵麟及代谢物N-乙酰基草铵麟和3-（甲基麟基）丙酸样品加标回收率草铵麟及代谢物N-乙酰基草铵麟和3-（甲基麟基）丙酸的添加浓度和回收率试验数据，见表C.1。样品添加草铵膦及代谢物N-乙酰基草铵麟和3-（甲基膦基）丙酸的浓度表C.1
及回收率试验数据（n=6）
样品基质
添加物质
草铵膦
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵膦
N-乙酰基
草铵麟
3-(甲基膦
基)丙酸
添加水平
回收率范围
67.5~99.6
65.5~88.6
80.7~105.3此内容来自标准下载网
66.5~98.6
69.7~95.6
77.5~99.6
65.5~88.6
68.5~96.6
样品基质
添加物质
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基麟
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基胖
基)丙酸
添加水平
回收率范围
72.6~95.3
72.5~93.6
65.5~99.8
65.7~89.6
66.8~98.1
69.2~98.6
77.3~99.2
SN/T4850-2017
样品基质
添加物质
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
添加水平
表C.1（续）
回收率范围
67.5~89.9
69.5~96.9
68.5~98.6
69.1~97.6
79.5~99.1
65.4~88.9
68.9~97.6
72.4~95.8
72.5~95.7
样品基质
开心果
胡萝卜
马铃薯
添加物质
3-（甲基麟
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵膦
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基麟
基)丙酸
添加水平
回收率范围
69.5~99.3
65.5~88.6
72.9~98.7
73.9~98.7
67.5~99.6
65.5~88.6
66.5~98.6
样品基质
马铃薯
添加物质
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
添加水平
表C.1（续）
回收率范围
77.5~99.6
69.5~99.3
样品基质
菜籽油
添加物质
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
SN/T4850—2017
添加水平
回收率范围
66.5~89.6
77.5~95.9
77.5~98.3
79.5~95.8
SN/T4850—2017
Foreword
The standard is drafted according to GB/T1.1-2009 principleSome parts of the standard may have relationship with some patents.The release dapartment havenoresponsibilitytorecognizethesepatents,This standard was proposed by and is under the charge of the Certification and Accreditation Admin-istrationofthePeople'sRepublicofChina.This standard was drafted by Comprehensive Technology Service Centre of Quanzhou Entry-Exit Inspection and Quanratine Bureauof the Peole's Republic of China,Fujian Entry-Exit Inspection andQuanratine Bureau of the Peole's Republic of China,Jiangxi Entry-Exit Inspection and Quanratine Bu-reauof thePeole'sRepublicof China,FujianprovinceKOHKIONHUA'stea co.,LTD,QuanzhouLuojiang Quanyantea industryco.,LTD,FujianAgricultureandForestryUniversity.The main drafters of this standard are Huang Huoshui,Wei Hang,Weng Chengwu,Zou Qiang,LinYonghui,LiuZhengcai,LinChunying,RongJiefeng,Li Yijun,SunWeijiang,YangFang10
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出口食品中草铵膦及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of glufosinate-ammonium and metabolites residues in exportfood-Liquidchromatography-tandemmassspectrometrymethod2017-07-21发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2018-03-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草，SN/T4850—2017
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国泉州出人境检验检疫局综合技术服务中心、中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国江西出入境检验检疫局、福建省高建发茶叶有限公司、泉州市洛江泉岩茶业有限公司、福建农林大学。木标准主要起草人：黄伙水、韦航、翁城武、邹强、林永辉、刘正才、林春滢、荣杰峰、李亦军、孙威江、杨方。
1范围
出口食品中草铵麟及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
SN/T4850—2017
本标准规定了出口食品中草铵及其代谢物N-乙酰基草铵膦、3-（甲基麟基）丙酸残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。
本标准适用于茶叶、稻谷、大豆、玉米、柑橘、苹果、桃、葡萄、香蕉、木瓜、番茄、胡萝下、马铃薯、洋葱、开心果、菜籽油中草铵麟及其代谢物N-乙酰基草铵麟、3-（甲基麟基）丙酸残留量的检测和确证。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
样品中的草铵麟及其代谢物N-乙酰基草铵麟、3-（甲基基）内酸用水提取，经二氯甲烷和C1s固相萃取小柱净化，用液相色谱-质谱/质谱法，电喷雾负离子模式电离（ESI-），基质外标法定量。4试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次超纯水。4.1乙腈：色谱纯。
4.2无水乙酸铵：色谱纯。
4.3氨水：25%，色谱纯。
4.4二氯甲烷，色谱纯。
4.5乙酸铵水溶液（1mmol/L，pH=11）：准确称取0.07708g的无水乙酸铵溶解于适量水中，用氨水调节pH=11,用水定容至1000mL。4.6草铵麟标准物质（Glufosinateammonium，GLU，CAS号：77182-82-2，分子式；C,HisN,O,P）：纯度≥97.5%。
4.7N-乙酰基草铵膦标准物质（N-Acetyl-glufosinate，NAGCAS号：73634-73-8，分子式：CH.NO,P）：纯度≥98.5%。
4.83-（甲基膦基）丙酸标准物质（3-methylphosphinicopropionicacid，MPP，CAS号：15090-23-0，分子式：C,H，O,P)：纯度≥98.0%。4.9草铵膦、N-乙酰基草铵麟（NAG）、3-（甲基麟基）丙酸（MPP）标准储备溶液（1.0mg/mL）：精确称取50mg的草铵麟和NAG、MPP标准品，用水溶解并定容至50mL，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中。低于5℃保存。
4.10草铵麟、N-乙酰基草铵麟（NAG）、3-（甲基麟基）丙酸（MPP）标准中间溶液（1.0μg/mL）：取一定1
SN/T4850—2017
量的草铵麟标准储备溶液（4.9），用水稀释成1.0μg/mL，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中，低于5℃保存。
4.11Cz固相萃取柱：500mg，6mL柱。使用前用5mL甲醇、5mL水活化。4.12滤膜：0.22μm，水相。
仪器和设备
液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源。粉碎机。
组织捣碎机。
涡旋振荡器。
高速离心机，转速不低于12000r/min。5.6
固相萃取装置。
超声清洗器
分析天平：感量0.1mg和0.01g。5.8
5.9pH计。
5.10移液器：1mL，5mL。
螺旋盖聚丙烯离心管：50mL。
圆孔筛：2.0mm。
6试样制备与保存
6.1试样制备
6.1.1茶叶和粮谷类
取有代表性样品约200g，用粉碎机粉碎并通过2.0mm圆孔筛，混匀，装人洁净容器内，密封并标识。
6.1.2水果蔬菜类
取有代表性样品500g，将可食部分切碎后（不可水洗），用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装人洁净容器内，密封并标识。
6.1.3植物油类
植物油类液体样品混匀备用。
6.2试样保存
水果、蔬菜类试样在一18℃保存。茶叶、谷物类试样、植物油类液体样品常温保存。7测定步骤
7.1待测样品溶液的制备
7.1.1样品提取
称取均质好的试样茶叶1g（精确至0.01g），植物油、谷物、水果蔬菜5g（精确至0.01g），置于2
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50mL具塞聚丙烯离心管中，移液器准确加人10mL水，10mL二氟甲烷，充分涡旋振荡10min，超声提取10min，以12000r/min离心5min，收集上清液，待净化。7.1.2样品净化
取样品提取液5mL加人已经活化了的Cs固相萃取柱中，弃去前3mL流出液，收集后2mL流出液，过0.22μm水相滤膜，滤液供液相色谱-质谱/质谱检测。7.2
基质混合标准工作溶液的制备
称取5个均质好的阴性样品茶叶1g（精确至0.01g），植物油、谷物、水果蔬菜5g（精确至0.01g），分别置于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入适量混合标准溶液，其余按照7.1步骤操作完成，制成草铵膦、N-乙酰基草铵膦、3-（甲基膦基）丙酸含量均为0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL的基质标准溶液。
7.3测定
液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：NH2P-502D柱，150mmX2.0mm，粒度5μm或相当者；a
柱温：35℃；
流速：0.25mL/min；
进样量：5uL
流动相：流动相A：1mmol/L乙酸铵水溶液（pH=11）（4.5），流动相B：乙腈。推荐梯度洗脱程序见表1，不同仪器洗脱条件可能不同。表1
流动相梯度洗脱程序表
梯度时间/min
质谱/质谱参考条件
质谱/质谱参考条件如下：
离子源：电喷雾离子源（ESI）：b）
扫描方式：负离子模式扫描；
监测模式：多反应监测（MRM）；流动相A/%
流动相B（乙睛）/%
雾化气、干燥气、碰撞气均为高纯氮气：使用前应调节气体流量以使质谱灵敏度达到检测要d）
求，详细条件参见附录A；
喷雾电压、雾化气压力、干燥气温度、干燥气流速、源内碎裂电压、碰撞能量应优化至最优灵敏度，参考条件和定性离子对、定量离子参见附录A。3
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7.3.3定量测定
按照确定的液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和基质标准工作溶液，响应值应在仪器检测的线性范围内，以色谱峰面积外标法定量。在上述色谱条件下草铵麟及其代谢物N-乙酰基草铵麟、3-（甲基麟基）丙酸的参考保留时间分别为6.06min、6.18min和6.23min，标准溶液的多反应监测（MRM)色谱图参见附录B中图B.1。
7.3.4定性测定
在相同实验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准工作溶液的保留时间偏差在士2.5%之内；且在扣除背景后的样液图谱中，所选择的离子对均出现，各定性离子对的相对丰度与浓度接近的标准溶液谱图中离子的相对丰度相比，其偏差不超过表2规定的范围，则可确定为样品中存在对应的被测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
7.4空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。7.5结果计算和表述
>20~50
>10~20
用色谱数据处理软件或按式（1）计算样品中草铵麟及代谢物残留量。计算结果需扣除空白值。exV
mx1000
式中：
X样品中被测组分的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C
（1）
一从基质标准工作曲线上得到的上机溶液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；样品提取溶液体积，单位为毫升（mL）；试样称取质量，单位为克（g）。8测定低限和回收率
8.1测定低限
本方法草铵麟及具代谢物N-乙酰基草铵麟、3-（甲基麟基）丙酸的测定低限：茶叶为0.1mg/kg，稻谷、大豆、玉米、柑橘、苹果、桃、葡萄、香蕉、木瓜、番茄、胡萝卜、马铃薯、洋葱、开心果、菜籽油为0.05mg/kg。8.2回收率
本方法样品的添加浓度及回收率试验数据参见附录C中表C.1。质谱参考参数如下：
干燥气温度：300℃；
干燥气流速：10L/min；
雾化气压力：0.31MPa（45psi）：电喷雾电压：-4500V；
鞘流气温度：350℃；
鞘流气流速：12L/min；
喷嘴电压：-1000V；
附录A
（资料性附录）
质谱参考参数\
定性离子对、定量离子对、源内碎裂电压、碰撞能量见表A,1。表A1
草铵麟
N-乙酰基草铵麟
3-(甲基膦基)丙酸
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草铵膦及代谢物的定性离子对、定量离子对、源内碎裂电压、碰撞能量定量离子对m/z
180/95
222/136
151/133
定性离子对推/2
180/95;180/85
222/136;222/59
151/133;151/107
源内碎裂电压/V
碰撞能量/V
1）非商业性声明：附录A所列参考质谐条件是在AgilentHPLC-QQQ6460型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。5
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附录B
（资料性附录）
草铵膦、N-乙酰基草铵麟和3-（甲基麟基）丙酸标准品的多反应监测（MRM）色谱图草铵麟、N-乙酰基草铵膦和3-（甲基麟基）丙酸标准品的多反应监测（MRM)色谱图，见图B.1。X105
-ESITICMRM
说明：
CID**(**->**)GLU+NAG+MPP.d
-FSIMRMFrag=120.0VCID@**(222.10001->59.00000)GLU+NAG+MPP.d2
ESIMRMFrag=120.0VCID@**(222.10001->136.00000)GLU+NAG+MPP.d2
[email protected](180.00000->85.00000)GLU+NAG+MPP.d2
[email protected](180.00000->95.00000)GLU+NAG+MPP.d2
-ESIMRMFrag=110.0VCID@**(151.00000->107.00000)GLU+NAG+MPP.d2
-ESIMRMFrag=110.0VCM@+*(151.00000->133.00000)GLU+NAG+MPP.d2
Countsvs.AcquisitionTime/min8
从上至下依次为：TIC总离子流图：N-乙酰基草铵麟：222/59，222/136草铵麟：180/85180/953-（甲基麟基）丙酸：151/107，151/133子对的MRM图。图B.1
草铵麟、N-乙酰基草铵麟和3-（甲基麟基）丙酸标准品的多反应监测（MRM）色谱图附录C
（资料性附录）
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草铵麟及代谢物N-乙酰基草铵麟和3-（甲基麟基）丙酸样品加标回收率草铵麟及代谢物N-乙酰基草铵麟和3-（甲基麟基）丙酸的添加浓度和回收率试验数据，见表C.1。样品添加草铵膦及代谢物N-乙酰基草铵麟和3-（甲基膦基）丙酸的浓度表C.1
及回收率试验数据（n=6）
样品基质
添加物质
草铵膦
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵膦
N-乙酰基
草铵麟
3-(甲基膦
基)丙酸
添加水平
回收率范围
67.5~99.6
65.5~88.6
80.7~105.3此内容来自标准下载网
66.5~98.6
69.7~95.6
77.5~99.6
65.5~88.6
68.5~96.6
样品基质
添加物质
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基麟
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基胖
基)丙酸
添加水平
回收率范围
72.6~95.3
72.5~93.6
65.5~99.8
65.7~89.6
66.8~98.1
69.2~98.6
77.3~99.2
SN/T4850-2017
样品基质
添加物质
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
添加水平
表C.1（续）
回收率范围
67.5~89.9
69.5~96.9
68.5~98.6
69.1~97.6
79.5~99.1
65.4~88.9
68.9~97.6
72.4~95.8
72.5~95.7
样品基质
开心果
胡萝卜
马铃薯
添加物质
3-（甲基麟
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵膦
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基麟
基)丙酸
添加水平
回收率范围
69.5~99.3
65.5~88.6
72.9~98.7
73.9~98.7
67.5~99.6
65.5~88.6
66.5~98.6
样品基质
马铃薯
添加物质
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
添加水平
表C.1（续）
回收率范围
77.5~99.6
69.5~99.3
样品基质
菜籽油
添加物质
3-（甲基膦
基)丙酸
草铵麟
N-乙酰基
草铵麟
3-（甲基膦
基)丙酸
SN/T4850—2017
添加水平
回收率范围
66.5~89.6
77.5~95.9
77.5~98.3
79.5~95.8
SN/T4850—2017
Foreword
The standard is drafted according to GB/T1.1-2009 principleSome parts of the standard may have relationship with some patents.The release dapartment havenoresponsibilitytorecognizethesepatents,This standard was proposed by and is under the charge of the Certification and Accreditation Admin-istrationofthePeople'sRepublicofChina.This standard was drafted by Comprehensive Technology Service Centre of Quanzhou Entry-Exit Inspection and Quanratine Bureauof the Peole's Republic of China,Fujian Entry-Exit Inspection andQuanratine Bureau of the Peole's Republic of China,Jiangxi Entry-Exit Inspection and Quanratine Bu-reauof thePeole'sRepublicof China,FujianprovinceKOHKIONHUA'stea co.,LTD,QuanzhouLuojiang Quanyantea industryco.,LTD,FujianAgricultureandForestryUniversity.The main drafters of this standard are Huang Huoshui,Wei Hang,Weng Chengwu,Zou Qiang,LinYonghui,LiuZhengcai,LinChunying,RongJiefeng,Li Yijun,SunWeijiang,YangFang10
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