SN/T 4892-2017.Determination of residues and stable carbon isotope ratio of estradiol，testosterone and progesterone in foodstuff of animal origin for export.
1范围
SN/T 4892第一法液相色谱串联质谱法规定了动物源性食品中睾酮、孕酮、a-雌二醇、β-雌二醇残留量的高效液相色谱串联质谱测定和确证方法。第二法气相色谱/燃烧炉/同位素比值质谱法规定了动物源性食品中雌二醇、睾酮和孕酮的稳定碳同位索比值测定的气相色谱!燃烧炉/同位素比值质谱方法。
SN/T 4892第一法液相色谱串联质谱法适用于动物源性食品牛肉、牛奶、鸡肉中睾酮、孕酮、雌二醇残留量的测定。第二法气相色谱/燃烧炉/同位素比值质谱法适用于动物源性食品牛肉、牛奶、鸡肉中残留雌二醇、睾酮和孕酮(残留水平>10 pg/kg)的稳定碳同位素比值的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法原理
对于动物源食品中的激素,用β葡糖苷醛甙酶芳基硫酸酯酶在乙酸铵缓冲液中酶解,加人氯化钠，以乙酸乙酯和乙腈提取。样品提取液以QuEChERS吸附剂净化.浓缩后以高效液相色谱-质谱/质谱仪测定,内标法或外标法定量。
4试剂材料
除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 乙腈:色谱纯。
4.2甲酸:色谱纯。
4.3冰乙酸， 色谱级。
4.4 乙酸铵:色谱纯。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4892-2017
出口动物源性食品中雌二醇、睾酮和孕酮残留量及稳定碳同位素比值的测定Determination of residues and stable carbon isotope ratio of estradiol,testosteroneandprogesteroneinfoodstuffofanimaloriginforexport2017-08-29发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2018-04-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。SN/T4892—2017
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：深圳市检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：肖陈贵、岳振峰、赵超敏、康海宁、肖锋、林黎、张毅、韩瑞阳、侯乐锡1
1范围
出口动物源性食品中雌二醇、睾酮和孕酮残留量及稳定碳同位素比值的测定SN/T4892--2017
本标准第一法液相色谱串联质谱法规定了动物源性食品中睾酮、孕酮、α-雌二醇、β-雌二醇残留量的高效液相色谱串联质谱测定和确证方法。第二法气相色谱/燃烧炉/同位素比值质谱法规定了动物源性食品中雌二醇、睾酮和孕酮的稳定碳同位素比值测定的气相色谱/燃烧炉/同位素比值质谱方法。本标准第一法液相色谱串联质谱法适用于动物源性食品牛肉、牛奶、鸡肉中睾酮、孕酮、雌二醇残留量的测定。第二法气相色谱/燃烧炉/同位素比值质谱法适用于动物源性食品牛肉、牛奶、鸡肉中残留二醇、睾酮和孕酮（残留水平>10pg/kg）的稳定碳同位素比值的测定。规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用手本文件GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法第一法液相色谱串联质谱法
3方法原理
对于动物源食品中的激素，用β-葡糖苷醛武酶-芳基硫酸酯酶在乙酸铵缓冲液中酶解，加入氯化钠，以乙酸乙酯和乙腈提取。样品提取液以QuEChERS吸附剂净化.浓缩后以高效液相色谱-质谱/质谱仪测定，内标法或外标法定量。
4试剂材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.12
乙腈：色谱纯。
甲酸：色谱纯。
冰乙酸，色谱级。
乙酸铵：色谱纯。
4.5N-丙基乙二胺吸附剂（PSA），40μm～60μm粒径范围，100A平均孔径4.6十八烷基键合硅胶吸附剂（C18-封端），40μm~60μm粒径范围，60A平均孔径。4.7无水硫酸镁，分析纯，500℃灼烧4h，置于干燥器中备用。4.8
β葡糖苷醛酶-芳基硫酸酯酶，含β盐酸葡萄糖醛试酶134600U/mL,芳基硫酸酯酶5200U/mL。乙酸铵缓冲溶液：溶解7.7g乙酸铵（4.4）于480mL水中，用冰乙酸（4.3）调节溶液pH值到5.2，以水定容至500mL。
SN/T4892-—2017
QuEChERS吸附剂：准确称取100mgPSA（4.5）、40mgC18（4.6）和400mg无水硫酸镁（4.7），4.10
储存于25mL具螺旋盖聚丙烯离心管中，旋紧管盖，置于干燥箱内备用，4.11标准物质：睾酮、孕酮、17B-雌二醇、17α-雌二醇标准物质的纯度均≥99%，参见附录A表A,1。4.122,34-C13-睾酮、D9-孕酮、D2-β-雌二醇标准物质的纯度均≥95%。4.13标准贮备液：准确称取10.0mg按其纯度折算为100%质量的各个化合物的标准物质（4.11），甲醇溶解定容至10.0mL，溶液浓度相当于100.0mg/L，一30℃冷冻保存，有效期为12个月4.14标准中间溶液：准确吸取1.0mL各标准贮备溶液（4.13），以甲醇稀释并定容于100mL棕色容量瓶，浓度相当于1.0mg/L，4℃冷藏保存，有效期为6个月。4.15空白基质溶液：选取不含待测物的样品，按照7.1和7.2步骤操作，得到空白基质溶液4.16基质混合标准溶液：根据需要用空白基质溶液（4.15）稀释标准中间溶液（4.14）成适合浓度的混合标准工作溶液，现配现用。
4.17内标贮备液：准确称取10.0mg按其纯度折算为100%质量的内标标准物质（4.12），以甲醇溶解并定容于10mL棕色容量瓶，浓度相当于100.0mg/L，一30℃冷冻保存，有效期为12个月。4.18内标中间溶液：准确吸取1mL各内标贮备溶液（4.17)，以甲醇稀释并定容于100mL棕色容量瓶，浓度相当于1.0mg/L，4℃冷藏保存，有效期为6个月。4.19内标工作液：根据需要用空白基质溶液（4.15）稀释内标中间溶液（4.18）成合适浓度的标准内标工作溶液，现配现用。
微孔滤膜：0.22μm，水相和有机相型。5
仪器和设备
高效液相色谱四级杆质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。电子分析天平：感量0.1mg，0.01g。5.2
减压旋转蒸发仪。
旋涡混合器。
高速冷冻离心机：最大转速为10000r/min。5.6
微量移液器：量程10L~100μL，100μL~1000L。5.7
pH计。
螺旋盖聚丙烯离心试管，50mL。组织捣碎机。
恒温水浴振荡器。
平板振荡器。
试样制备与保存
6.1牛肉、鸡肉
取代表性样品1000g，应尽量避免取脂肪部分，用组织捣碎机充分粉碎均勾，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于一18℃保存。6.2牛奶
取代表性样品1000mL，充分摇匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于4℃保存。
测定步骤
样品提取
7.1.1酶解
SN/T4892—2017
称取试样2g（精确到0.01g），置于50mL具螺旋盖聚丙烯离心管中，准确加入20uL内标工作液（4.19），加人8mL乙酸铵缓冲液（4.9），在均质器中高速均质30s，加人30Lβ葡糖苷醛试酶-芳基硫酸酯酶（4.8），涡旋混匀30s，37℃振荡温育12h。7.1.2提取
取出样品静置至温度降至室温。加人5.0g无水氯化钠、5mL乙酸乙酯和5mL乙（4.1），涡旋混匀1min后，在4℃、9500r/min离心5min，收集上清液于另一50mL离心管。剩余部分重新加人10mL乙溶液，旋紧螺旋盖，室温下平置于水平振荡器，振荡提取10min，在4℃、9500r/min离心5min，吸取上清液层溶液，合并两次提取有机相，待净化。7.2净化
将上述样品提取液涡旋1min，静置后移取其中10mL至另一15mL离心管。一次性将QuEChERS吸附剂（4.10）加人样品提取液中，旋紧螺旋盖，高速涡旋1min，在4℃、9500r/min离心5min。吸取所有有机相溶液，40℃氮气吹至近干。加人乙-水溶液（2：8）溶解残渣并定容于1.0mL，涡旋混合1min，过0.22μm滤膜（4.20）。滤液供液相色谱-质谱/质谱仪测定。7.3测定
液相色谱条件如下：
色谱柱：XDB-Cna柱，100mm×2.1mm（内径），粒径3.0μm或相当者a)
流动相：A：水；B：乙。
流速：250μL/min。
柱温：35℃。
进样量：10μL。
梯度洗脱程序见表1。
表1液相色谱梯度洗脱程序表
时间/min
7.4质谱条件
质谱条件如下：
SN/T4892-2017
离子源：电喷雾ESI，正/负离子模式b）
扫描方式：多反应监测MRM（锁定保留时间）。雾化气压力（GS1）、气帘气压力（CUR）、辅助气电压（GS2）均为高纯氮气或其他合适气体：使用前应调节各气体流量以及离子源温度（TEM）使质谱灵敏度达到检测要求，质谱等详细条件参见附录B表B.1。
电喷雾电压（IS）、碰撞电压（CE）、去簇电压（DP）、碰撞室人口电压（EP）、碰撞室出口电压d)
（CXP）应优化至最佳灵敏度。监测离子对和定量离子等详细仪器条件参见附录B表B.1。7.5
液相色谱-质谱/质谱测定
每个试样分别在正、负离子模式下进行测定。根据试样中被测物的药物含量，选取响应值相近的混合标准工作液（4.16）同时进行分析。混合标准工作液和待测液中各种药物的响应值均应在仪器线性响应范围内。如果含量超过标准曲线范围，应用甲醇：水（1：9，体积比）稀释到合适浓度后分析。在上述仪器条件下，4种化合物的MRM重构离子流色谱图参见附录C图C.1，参考保留时间参见附录B表B.1。
6空白实验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行8结果计算和表述
8.1定性标准
保留时间
待测样品中化合物色谱峰的保留时间与标准溶液相比变化范围应在士2.5%之内。8.1.2定量离子、定性离子及子离子丰度比每种化合物的质谱定性离子必须出现，至少应包括一个母离子和两个子离子，而且同一检测批次对同一化合物，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其允许偏差不超过表2规定的范围。
表2定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
定量结果与表述
>20%~50%
>10%~20%
≤10%
采用标准曲线法定量，按式（1）或仪器数据处理系统计算所有化合物的残留含量，计算结果需扣除空白值。
式中：
X=cXV1000
X试样中待测组分的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；...
c——待测组分响应值在标准曲线上计算得到的浓度，单位为微克每升（ug/L）；4
.（1)
V-样品定容体积，单位为毫升（mL）；m
样品称样量，单位为克（g）。
9测定低限和回收率
9.1测定低限
SN/T4892—2017
本方法的测定低限如下：睾酮和孕酮为0.5μg/kg：17β-雌二醇和17α-雌二醇为1.0μg/kg9.2回收率
在3个添加浓度下，本方法在牛肉、牛奶、鸡肉中4种激素的平均回收率实验数据参见附录D。气相色谱/燃烧炉/同位素比值质谱法第二法
10方法原理
试样用乙腈提取，经CI8、Si和NH，固相萃取小柱净化，以半制备液相色谱浓缩纯化，以气相色谱质谱定性定量，以气相色谱/燃烧炉/同位素比值质谱测定稳定碳同位素比值（13C值）。11试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。甲醇：色谱纯。
11.2乙腈：色谱纯。
11.3乙酸乙酯：色谱纯。
11.4环己烷：色谱纯。
11.5正已烷：色谱纯。
11.6吡啶：色谱纯。
异丙醇：色谱纯。
冰乙酸。
乙酸钠。
乙酸酐。
氯化钠。
氯化锌。
β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶（≥100000units/mL)。乙酸钠溶液（0.2mol/L，pH5.2）：称取16.41g乙酸钠，加900mL水溶解，冰乙酸调节pH值至5.2，转移至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。11.15
甲醇-水溶液（10+90）：量取10mL甲醇和90mL水，混匀。正已烷-乙酸乙酯溶液（85+15）：量取85mL正已烷和15mL乙酸乙酯，混匀。正已烷-乙酸乙酯溶液（25+75）：量取25mL正已烧和75mL乙酸乙酯，混匀。乙酸乙酯-甲醇溶液（80+20）：量取80mL乙酸乙酯和20mL甲醇，混匀。乙酸乙酯-水溶液（25+0.68）：量取25mL乙酸乙酯和0.68mL水，混勺。乙腈水溶液（70+30）：量取70mL乙和30mL水，混匀。SN/T4892—2017
11.21标准贮备液（500mg/L）：准确称取睾酮、孕酮和雌二醇标准品5mg于不同的10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，一30℃冷冻保存，保存期为12个月。11.22标准使用液（100mg/L）：准确吸取2mL各标准储备液（500mg/L）于10mL具塞离心管中，于40℃用氮气浓缩至干，加人1mL乙-水溶液（70十30）溶解，转移至10mL容量瓶中，用乙睛-水溶液（70十30）定容至刻度，供半制备高效液相色谱检测用。保存期为6个月。11.23睾酮和雌二醇标准衍生物使用液（50mg/L）：准确吸取1mL标准储备液（500mg/L）于10mL具塞离心管中，于40℃用氮气浓缩至干，依次加人1mL乙酸酐和1mL吡啶，涡旋30s，置于恒温干燥箱70℃衍生50min，取出冷却至室温，于40℃用氮气浓缩至干，用1mL环已烷溶解，转移至10mL容量瓶中，用环已烷定容至刻度，供GC/C/IRMS检测用。临用现配。11.24孕酮标准衍生物使用液（50mg/L）：准确吸取1mL标准储备液（500mg/L）于10mL具塞离心管中，于40℃用氮气浓缩至干，用1mL环已烷溶解，转移至10mL容量瓶中，用环己烷定容至刻度，供GC/C/IRMS检测用。临用现配
11.25睾酮衍生物、雌二醇衍生物和孕酮系列标准工作液：分别准确吸取0mL、0.02mL、0.04mL、0.1mL、0.4mL、1mL翠酮衍生物、雌二醇衍生物和孕酮使用液（50mg/L）于10mL容量瓶中，用环己烷定容至刻度，配制成浓度为0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、2mg/L、5mg/L的系列标准工作液，供GC-MS检测用。临用现配。11.26Cls固相萃取柱（500mg，6mL），或性能相当者。Si固相萃取柱（500mg，6mL），或性能相当者。11.27
NH，固相萃取柱（500mg，3mL），或性能相当者。11.29bZxz.net
微孔滤膜：0.22μm，有机相。
仪器和设备
12.1气相色谱/燃烧炉/同位素比值质谱仪：IsoPrime100同位素比值质谱仪和GC5燃烧/热解系统配置Agilent7980A型气相色谱。
12.2气相色谱质谱联用仪。
12.3半制备高效液相色谱：配有二极管阵列检测器（DAD）。12.4
分析天平：感量0.01g和0.00001g。12.5
组织捣碎机。
涡旋混合器。
往复式振荡器。
高速冷冻离心机。
氮气浓缩装置。
旋转蒸发仪。
水浴超声装置。
恒温干燥箱。
恒温摇床。
微量移液器：量程10μ~100，100μ1000。试样制备与保存
13.1牛肉、鸡肉
取代表性样品1000g，应尽量避免取脂肪部分，用组织捣碎机充分粉碎均匀，均分成两份，分别装6
人洁净容器中，密封，并标明标记，于一18℃保存。13.2牛奶
SN/T4892-2017
取代表性样品1000mL，充分摇匀，均分成两份，分别装人洁净容器中，密封，并标明标记，于4℃保存。
14测定步骤
14.1提取
准确称取试样100g（精确至0.01g）于500mL具塞离心管中，加入50mL乙酸钠溶液（0.2mol/L，pH5.2），混匀.加人0.3mLβ-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶，置于恒温摇床中37C酶解过夜。取出后冷却至室温，加入300mL乙睛，振荡提取20min，加入15g氯化钠，振荡混匀，于4C，6000r/min离心10min，乙睛层转人500mL旋转蒸发瓶中。残渣加人150mL乙重复提取1次，合并乙提取液于旋转蒸发瓶中，加入10mL异丙醇，40℃旋转蒸发至近干，用2.5mL×2甲醇清洗旋转蒸发瓶，转移至50mL具塞离心管中（已称取2gZnCl2在管中），加水稀释至50mL，搅拌至ZnClz溶解，于4℃，11000r/min离心5min，上清液迅速转入一洁净50mL离心管中，待净化14.2净化
依次用5mL甲醇和5mL水活化Cla固相萃取柱，将提取液全部过柱，5mL甲醇-水溶液（10+90）淋洗，抽干固相萃取柱，10mL甲醇洗脱，洗脱液于40℃用氮气浓缩至近干，用3mL正已烷-乙酸乙酯溶液（85十15）溶解残渣，涡旋30s。溶解液过Si固相萃取柱（使用前用6mL正已烷活化），3mL正已烷-乙酸乙酯溶液（85+15）淋洗，抽干固相萃取柱，10mL正已烷-乙酸乙酯溶液（25+75）洗脱，洗脱液于40℃用氮气浓缩至近于，用2mL乙酸乙酯-甲醇溶液（80+20）溶解残渣，涡旋30S。溶解液过NH2固相萃取柱［使用前依次用4mL乙酸乙酯-水溶液（25+0.68）和4mL乙酸乙酯-甲醇溶液（80+20）活化.收集流出液，用4mL乙酸乙酯-甲醇溶液（80+20）淋洗，合并收集流出液，于40℃用氮气浓缩至干，加入0.7mL乙睛溶解残渣，再加入0.3mL水，涡旋30s，过0.22μm微孔滤膜。全部粗提液经半制备液相色谱浓缩、纯化，分段接收目标分析物的馏分于馏分接收试管中，合并目标分析物的分段馏分于旋转蒸发瓶中，40℃旋转蒸发至近干，用1mL×2甲醇溶解残渣，转移至2mL样品瓶，于40℃用氮气浓缩至近干。
孕酮馏分残渣用0.2mL环已烷溶解，过0.22μm微孔滤膜，待进行GC/C/IRMS和GC-MS检测。睾酮和雌二醇馏分残渣依次加入0.1mL乙酸酐和0.1mL吡啶，涡旋30s，置于恒温干燥箱70℃衍生50min，取出冷却至室温，氮气吹干溶剂，用0.2ml环已烷溶解，过0.22μm微孔滤膜，待进行GC/C/IRMS和GC-MS检测。
15测定
15.1半制备液相色谱参考条件
半制备液相色谱参考条件如下：色谱柱：EclipseXDB-Cls柱（250mm×21.2mm，7m），或性能相当者。a
流动相：水和乙腈，梯度洗脱程序见表3。流速：15mL/min。6)
进样量：600mL
检测器：DAD，波长242nm和200nm。d)
SN/T4892—2017
时间/min
气相色谱-质谱参考条件
表3半制备液相色谱梯度洗脱程序水/%
气相色谱-质谱参考条件如下：
色谱柱：HP-5MS柱（30m×0.25mm×0.25μm）.或性能相当者。乙腈/%
升温程序：初始温度80℃.保持1min，以15℃/min升至250℃，保持2min，再以2℃/minb)
升至272℃，保持5min。
载气：高纯气，纯度≥99.999%，流速1ml/min。进样口温度：280℃。
进样量：2μL，不分流模式。
电离方式：电子轰击源（EI）。电离能量：70eV。
离子源温度：230℃。
传输线温度：280℃。
MS四级杆温度：150℃。
溶剂延迟时间：3min。
扫描质量范围：50u~400u。
选择离子监测（SIM)参见附录E。气相色谱/燃烧炉/同位素比值质谱参考条件气相色谱/燃烧炉/同位素比值质谱参考条件如下：a)
色谱柱：HP-5MS柱（30m×0.25mm×0.25um），或性能相当者。进样口温度：250℃。
检测器温度：200℃。
燃烧炉温度：850℃。
接口温度：350℃。
载气：高纯氨气，纯度≥99.999%，流速1mL/min。参考气：高纯二氧化碳，纯度≥99.999%。h)
升温程序：初始温度80℃，保持1min，以15℃/min升至250℃，保持2min，再以2℃/min升至272℃，保持5min，最后以2℃/min升至275℃，保持5min。i
进样量：5μL，不分流模式。
标准曲线的制作（用于气相色谱-质谱检测）15.4
将2L的系列标准工作液注人气相色谱质谱仪中，测得相应的峰面积。以系列混合标准工作液的浓度为横坐标，以化合物的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线8
15.5试样溶液测定
15.5.1气相色谱-质谱测定
SN/T4892—2017
将2μL的待测试样溶液注入气相色谱-质谱仪中，测得峰面积。以保留时间（偏差在土2.5%之内）和监测离子的相对丰度比（监测离子相对丰度的最大允许偏差见表4）定性。根据标准曲线得到待测试样溶液中睾酮衍生物、雌二醇衍生物和孕酮的浓度。表4监测离子相对丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
>20%~50%
2气相色谱/燃烧炉/同位素比值质谱测定15.5.2
>10%~20%
≤10%
将5L的待测试样衍生物溶液注入气相色谱中，经色谱分离流出物后，进人燃烧系统中被燃烧和还原，生成二氧化碳气体，二氧化碳气体进人同位素质谱仪进行C/12C的分析，以获得待测物的asc值。
16结果计算和表述
结果计算
试样雌二醇衍生物、睾酮衍生物、孕酮碳同位素比值分析结果以表示，它反映了样品的碳稳定同位素比值和国际碳酸盐标准物质PDB碳稳定同位素比值之间的相对差异，如式（2）：83c(%）
式中：
[(\C//2C)样-(\C/\2C)m
(C/C)PDB
（2）
试样中分析物和国际标准物质PDB之间同位素比的相对差异，以千分数表示（%）；
(13C/12C)品
试样中分析物的稳定碳同位素比；(C/12C)PDB
16.2结果表述
国际标准物质PDB中的稳定碳同位素比；Pee-DeeBelemnite，衡量C含量在自然中变化的主要参照物。组成元素为碳酸钙，来自于美国南卡罗来纳州PeeDee结构的白垩纪箭石属岩石，其C/C值为0.0112372。
以重复性条件下获得的3次独立测定结果的平均值表示，结果保留四位有效数字。16.3结果修正
由于睾酮和雌二醇在衍生化过程中会引入酰化试剂的碳原子，因此，使用式（3）修正以获得未衍生化的睾酮和雌二醇的C值：
13CDOAC81CDAd
1CDOH=CpOAc+2m
（3）
SN/T4892-2017
式中：
未衍生化的睾酮或雌二醇的8C值；uCpMe
睾酮衍生物或雌二醇衍生物的C值；CpAe
衍生试剂的8C值（乙酸酐3C=-26.47%）；睾酮或雌二醇含有的碳原子个数；睾酮或雌二醇中含有的待衍生化的羟基个数。17灵敏度与准确度
睾酮衍生物、雌二醇衍生物和孕酮进样质量应满足10ng~100ng（相当于样品溶液中浓度2mg/L~20mg/L)之间，以确保3C值的准确性和特异性，否则需增加试样处理量。根据实验室所使用的燃烧系统类型和质谱仪，其检测范围可以调整。18
精密度
对于每一个待测样，3次连续进样的标准偏差（SD）需小于0.5%。样品的最终结果为3次测定的平均值。如果偏差大于0.5%，需检测系统稳定性，并重复测定。系统稳定性
每次测样前，检测工作控制标准（孕酮标准）的C值，测定值与之前标定值的差值不得超过允许值0.5%。否则，检查色谱仪和质谱仪的设置，如有必要进行调整。10
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