SN/T 4890-2017.Determination of curcuminoids in foodstuffs for export-HPLC method and HPLC-MS/MS method.
1范围
SN/T 4890规定了出口食品中姜黄素的高效液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱测定方法。
SN/T 4890适用于果冻、巧克力制品、碳酸饮料、麦片、冰淇淋、调制乳粉、调味糖浆、粉圆、复合调味料、酥炸粉、腌渍的蔬菜、方便面饼、膨化食品等食品中姜黄素总量的测定和确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分 析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1食品添加剂姜黄turmeric
姜科姜黄属植物原料或其粗提取产物，为粉状或油膏状,其中的姜黄素总含量较低,三种姜黄素的含量水平近似。
3.2食品添加剂姜黄素curcumins
姜科姜黄属植物粗提取产物,再经物理方法精制而得,为结晶状，姜黄素总含量较高,其中Cur I的含量相对偏高。
4方法提要
采用甲醇-水溶液提取试样中的姜黄素，提取液直接过滤后测定,对于杂质干扰严重或含量较低的食品样品需要用聚酰胺固相萃取柱富集和净化，洗脱液氮气吹干定容。用高效液相色谱仪,DAD或UV-vis检测器测定,外标法峰面积定量。
5试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
5.1 甲醇:液相色谱级。
5.2乙 腈:液相色谱级。
5.3甲酸:液相色谱级。
5.4氨水 :36%,分析纯。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4890—2017
出口食品中姜黄素的测定
高效液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱法Determination of curcuminoids in foodstuffs for export-HPLCmethodandHPLC-MS/MSmethoo2017-08-29发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2018-04-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草言
SN/T4890-—2017
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口本标准起草单位：中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、中华人民共和国陕西出人境检验检疫局。
本标准主要起草人：陈鹭平、方恩华、徐敦明、林立毅、林建忠、洪煜琛、王鹭骁、孙婷、黎翠玉。1范围
出口食品中姜黄素的测定
高效液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱法SN/T4890-2017
本标准规定了出口食品中姜黄素的高效液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于果冻、巧克力制品、碳酸饮料、麦片、冰淇淋、调制乳粉、调味糖浆、粉圆、复合调味料、酥炸粉、腌渍的蔬菜、方便面饼、膨化食品等食品中姜黄素总量的测定和确证。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
姜黄素类化合物curcuminoids
姜黄素类化合物，亦称“姜黄色素”或“总姜黄素”，化学结构上因携带甲氧基“CH，O-”个数不同而分为三种化合物。包括姜黄素（Curcumin）、脱甲氧基姜黄素（Demethoxycurcumin）、双脱甲氧基姜黄素（Bisdemethoxycurcumin），其含量之和称为姜黄素总含量（mg/kg）。3.2
食品添加剂姜黄
turmeric
姜科姜黄属植物原料或其粗提取产物，为粉状或油膏状，其中的姜黄素总含量较低，三种姜黄素的含量水平近似。
食品添加剂姜黄素
curcumins
姜科姜黄属植物粗提取产物，再经物理方法精制而得，为结晶状，姜黄素总含量较高，其中CurI的含量相对偏高。
高效液相色谱法
第一法
4方法提要
采用甲醇-水溶液提取试样中的姜黄素，提取液直接过滤后测定，对于杂质干扰严重或含量较低的食品样品需要用聚酰胺固相萃取柱富集和净化，洗脱液氮气吹干定容。用高效液相色谱仪，DAD或UV-vis检测器测定，外标法峰面积定量。1
SN/T4890--2017
5试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。5.1
甲醇：液相色谱级。
5.2乙腈：液相色谱级。
5.3甲酸：液相色谱级。
氨水：36%，分析纯。
2%氨化甲醇溶液：量取2mL氨水（5.4），用甲醇（5.1）溶解并定容至100mL，混匀。5.6
0.1%甲酸水溶液：量取1mL甲酸（5.3），加水溶解并定容至1.000mL，混匀。5.7
0.1%甲酸乙腈溶液：量取1mL甲酸（5.3），加乙腈溶解并定容至1000mL，混勺。提取溶剂：甲醇-水（7十3，体积比），量取700mL甲醇（5.1）和300mL水，混匀。5.8
5.9淋洗溶剂：5%甲醇水（体积比），量取5mL甲醇（5.1）和95mL水，混匀5.10姜黄素（以下简称CurI）标准物质：Curcumin，CaH2O，CAS号：458-37-7，纯度98%。标准物质详细信息见附录A中表A.1。5.11脱甲氧基姜黄素（以下简称CurI）标准物质：Demethoxycurcumin，C2HiOs，CAS号：22608-11-3，纯度≥98%。
2双脱甲氧基姜黄素（以下简称CurIl）标准物质：Bidemethoxycurcumin，CgHiO，CAS号：5.12
24939-16-0，纯度≥98%。
5.13标准储备液：准确称取适量的（精确至0.1mg）三种姜黄色素标准物质，混合后用甲醇溶解定容至50mL，以CurICurⅡ和CurⅢ分别计，溶液浓度各自相当于200mg/L。0℃~4℃避光保存，6个月内含量稳定。
5.14标准工作溶液：吸取适量标准储备液（5.13），用提取溶剂（5.8），配成0.500mg/L，1.00mg/L，10.0mg/L，20.0mg/L，100mg/L的标准工作溶液，临用前配制，0℃~4℃避光保存。5.15
AnpelcleanPA聚酰胺固相萃取柱或相当者：规格60omg，3mL。5.16亲水性聚四氟乙烯（PTFE）针式微孔滤膜或相当者：规格13mm，0.45μm6仪器与设备
高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器或配有UV-vis检测器，6.2
分析天平：感量0.01g和0.1mg。6.3
均质器，转速不小于15000r/min。6.4
离心机：转速不低于4500r/min。6.5
离心管：50mL塑料离心管。
氮吹仪。
7测定步骤
7.1试样制备与保存
在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化，取代表性样品约500g，用粉碎机充分粉碎，混勾，均匀性较好的液体样品不用均质直接取用。试样均分为两份，装人洁净玻璃容器，密封，并标明标记。于4℃以下存放，2
7.2含干扰物质较少的食品（如面条等）直接提取SN/T4890-—2017
称取试样约2.5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人20mL甲醇-水（5.8），在均质器上均质提取1min后，将试样提取液全部转人25mL容量瓶中，用甲醇-水（5.8）定容到25mL，混匀后转移到另外干净离心管中，以4000r/min离心2min后，直接取上清液过0.45μm亲水聚四氟乙烯（PTFE）针式滤膜，供仪器测定。
7.3含干扰物质较多的食品（如乳粉，冰淇淋、焙烤坚果等）需净化称取试样约2.5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入20mL甲醇-水（5.8），在均质器上均质提取1min后，将试样提取液全部转入25mL容量瓶中，用甲醇-水（5.8）定容到25mL，混匀后转移到另外干净离心管中，以4000r/min离心2min，取上清提取液2.5mL待净化。聚酰胺固相萃取柱使用前，依次用3mL甲醇、3mL水活化。将上清提取液2.5mL全部过柱，过滤速度不宜过快。上样完毕后，以2mL5%甲醇水（5.9）淋洗固相萃取柱，淋洗后抽干固相萃取柱。用1.0mL的2%氨化甲醇（5.5）洗脱并收集，洗脱液需尽快转移到氮吹仪，在40℃用氮气吹干后，用1.00mL甲醇（5.1）溶解定容，过0.45um亲水聚四氟乙烯（PTFE）针式滤膜，供仪器测定。7.4测定
液相色谱参考条件
色谱柱：CNW-AthenaC18-WP,120A，4.6mmx250mm，5μm，或相当者。7.4.1.1
流动相：A：0.1%甲酸水溶液（5.6），B：0.1%甲酸乙腈溶液（5.7），45+55（体积比）。洗脱方式：等度，18min。
柱温：25℃。
进样量：15。
流速：l.00mL/min。
检测器检测波长：420nm。
7.4.2色谱测定
定量测定：在仪器最佳工作条件下，对混合标准工作溶液进样测定，以待测物的浓度为横坐标，以待测物的峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线，按外标峰面积法，用标准工作曲线对待测样品进行定量，样品瓶中待测物的响应面积应在仪器测定的标准溶液线性范围内。如果初测结果高于线性范围上限的，复测时需将定容后的溶液适当稀释；如果初测结果在线性范围下限附近的，复测时在净化步骤中可以增加提取液过柱的体积，予以适当浓缩，使其在线性范围内。在上述色谱条件下，姜黄素的液相色谱图参见附录B中图B.1。
7.4.3空白试验
除不加试样外，均按上述步骤进行。8结果计算和表述
8.1三种姜黄素各自的含量
用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中待测着色剂含量。X,=(c/1000)×V
（m/1000）
..（1
SN/T4890-—2017
样品如有净化步骤，则按照式（2）计算试释中待测着色剂含量。(c/1 000) × V
(m/1000)XR
式中：
X，一试样中待测姜黄素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C
基质混合标准工作液中待测着色剂的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；样液最终定容体积，单位为毫升（mL)：最终样液所代表的试样量，单位为克（g)；（2）
固相萃取柱净化中，分取体积比（如试样定容25mL后，分取2.5mL过柱，则R=1/10）。姜黄素总含量
姜黄素的总含量是三种姜黄素单体的含量之和，按式(3)计算。XCure =Xeuri +Xeurn +Xeurm
式中：
XcurlXcurlXcur
试样中CurI、Curl和CurⅢ的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；Xcur总
样品的姜黄素总含量，单位为毫克每千克（mg/kg）。9测定低限、回收率
测定低限
（3）)
以样品稀释10倍直接提取法计，高效液相色谱法对三种姜黄素的测定低限分别为10mg/kg。9.2回收率
在果冻、巧克力制品、碳酸饮料、麦片、冰淇淋、调制乳粉、调味糖浆、粉圆、复合调味料、酥炸粉、腌渍的蔬菜、方便面饼、膨化食品中添加姜黄素的浓度为10.0mg/kg~100mg/kg时，高效液相色谱法测定的回收率范围见表1。
高效液相色谱法测定不同基质中盖黄素的回收率范围基质
巧克力制品
碳酸饮料
化合物
10mg/kg
89.8105.6
89.6~102.0
89.0~102.6
85.2~100.4
85.0~101.8
89.0~100.1
88.5~105.6
87.5~102.3
88.3~100.7
添加浓度
20mg/kg
90.4~101.4
99.2~108.6
87.1~100.7
91.4~100.7
88.1~103.3
96.1~104.6
86.3~100.5
85.7~101.0
86.3~101.4
100mg/kg
98.3~101.4
96.4~101.1
96.3~101.1
96.0~100.5
96.2~101.6
98.5~101.0
95.9~100.7
96.1~101.2
98.8~101.4
冰淇淋
调制乳粉
调味糖浆
复合调味料
酥炸粉
腌渍的蔬菜
方便面饼
膨化食品
化合物
Cur II
Cur II
表1（续）
10mg/kg
95.0~112.0
85.6~101.2
95.0~110.0
92.4~109.6
90.4~104.8
85.8~101.1
88.1~100.2
84.9~100.6
86.9~101.1
88.4100.9
87.1~101.8
87.7~106.6
92.8~105.8
88.5~99.8
86.5~99.8
83.3~95.5
87.9~102.5
87.8~103.0
88.3~102.4
90.6~103.6
86.7~102.5
88.4~102.4
85.0~101.2
88.3~101.0
95.0~103.9
88.1~102.2
89.9~100.8
88.5~104.0
90.5~104.5
添加浓度
20mg/kg
91.6~101.2
86.4~100.4
87.1~100.0
87.5~100.1
90.6~100.8
85.0~101.8
92.4~100.0
90.1~102.9
92.9~101.9
93.0~100.6
87.9~101.6
91.2104.8
86.4~105.0
85.9~97.5
86.9101.0
86.8~98.6
86.1~98.6
89.3~101.8
92.6~102.0
90.2~103.5
94.8~103.7
86.4~100.7
89.1~100.6
85.0~102.9
88.6~102.6
90.4~104.0
94.2103.8
92.5~105.0
92.6~104.2
96.6~103.0
SN/T4890—2017
100mg/kg
97.0~101.4
99.2~104.2
97.0~101.0
97.1~101.1
98.1~102.9
96.2~100.9
95.5101.2
97.0~100.8
96.6~101.3
97.5~101.1
95.2~100.1
96.7~100.0
98.6~102.9
98.1~101.0
96.2~99.6
95.0~100.4
98.6~102.9
98.9~103.0
97.8~103.1
97.0~102.2
97.8~102.3
97.8~101.7
96.2~100.4
96.6~100.1
97.0~101.2
97.5~102.9
96.0~100.5
97.7102.4
95.5~100.1
SN/T4890—2017
方法提要
第二法液相色谱-质谱/质谱法
采用甲醇-水溶液提取试样中的姜黄素，提取液直接过滤后测定，对于杂质干扰严重或含量较低的食品样品需要用聚酰胺固相萃取柱富集和净化，洗脱液氮气吹干定容。用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法峰面积定量。
11试剂材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。甲醇：液相色谱级。
乙：液相色谱级。
甲酸：液相色谱级。
氨水：36%，分析纯。
2%氨化甲醇溶液：同5.5。
0.1%甲酸水溶液：同5.6。
0.1%甲酸乙腈溶液：同5.7。
提取溶剂：甲醇-水（7+3，体积比），同5.8。淋洗溶剂：5%甲醇水（体积比），同5.9。11.10
姜黄素（以下简称CurI）标准物质：同5.10。标准物质详细信息见附录A中表A.1。脱甲氧基姜黄素（以下简称CurⅡ）标准物质：同5.11。双脱甲氧基姜黄素（以下简称CurⅢ）标准物质：同5.1211.13
3标准储备液：准确称取适量的（精确至0.1mg）三种姜黄色素标准物质，混合后用甲醇溶解定容至50mL，以CurI，CurⅡ和CurⅢ分别计，溶液浓度相当于200mg/L。0℃4℃避光保存，6个月内含量稳定。
11.14标准工作溶液：吸取适量标准储备液（11.13），用提取溶剂（11.8）配成0.05mg/L，0.10mg/L，1.00mg/L.2.00mg/L，10.0mg/L的标准工作溶液，临用前配制，0℃~4℃避光保存。11.15AnpelcleanPA聚酰胺固相萃取柱或相当者：规格60mg，3mL。11.16亲水性聚四氟乙烯（PTFE）针式微孔滤膜或相当者：规格13mm，0.45μm。12
仪器与设备
液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESD。12.2分析天平：感量0.01g和0.1mg。12.3
均质器，转速不小于15000r/min。12.4
离心机：转速不低于4500r/min。离心管：50mL塑料离心管。
氮吹仪。
13测定步骤
13.1试样制备与保存
在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化SN/T4890-—2017
取代表性样品约500g，用粉碎机充分粉碎，混匀，均匀性较好的液体样品不用均质直接取用。试样均分为两份，装入洁净玻璃容器，密封，并标明标记。于4℃以下存放。13.2脂肪含量较少的食品直接提取前处理同7.2。
13.3含干扰物质较多的食品（如乳粉，冰淇淋、焙烤坚果等）需净化前处理同7.3。
13.4测定
13.4.1液相色谱-质谱/质谱条件色谱柱：CNW-AthenaC18-WP，100A2.1mmX150mm，3μm，或相当者。13.4.1.1
流动相：A：0.1%甲酸水溶液（5.6），B：0.1%甲酸乙腈溶液（5.7），45+55（体积比）。洗脱方式：等度，12min。
柱温：25℃。
进样量：10pL。
离子源：电喷雾（ESI）。
扫描极性：正离子。
扫描方式：多反应监测（MRM）。其他质谱条件参见附录C。
色谱测定
定性测定
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，样品的质量色谱峰保留时间与标准品中对应的保留时间一致且样品中各组分定性离子的相对丰度与接近浓度的标准工作溶液中相应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对应的被测物表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
13.4.2.2定量测定
>20%~50%
>10%~20%
《10%
在仪器最佳工作条件下，对混合标准工作溶液进样测定，以待测物的浓度为横坐标，以待测物的峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线，按外标峰面积法，用标准工作曲线对待测样品进行定量，样品瓶中待测物的响应面积应在仪器测定的标准溶液线性范围内。如果初测结果高于线性范围上限的，复测时需7
SN/T4890—2017
将定容后的溶液适当稀释：如果初测结果在线性范围下限附近的，复测时在净化步骤中可以增加提取液过柱的体积，予以适当浓缩，使其在线性范围内。在上述色谱条件下，姜黄素的参考保留时间参见附录D中表D.1，姜黄素标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图参见附录D中图D.1。13.4.3空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。14结果计算和表达
14.1三种姜黄素各自的含量
用色谱数据处理机或按式（4）计算试样中待测着色剂含量。(c/1000)×V
(m/1000)
样品如有净化步骤，则按照式（5）计算试样中待测着色剂含量。(c;/1000)×V
(m/1000)×R
式中：
X-—试样中待测姜黄素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）：C
基质混合标准工作液中待测着色剂的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）：V—样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；最终样液所代表的试样量，单位为克（g）：m
.（4）
........(5)
R——固相萃取柱净化中，分取体积比（如试样定容25mL后，分取2.5mL过柱，则R=1/10）。14.2姜黄素总含量
姜黄素的总含量是三种姜黄素单体的含量之和，按式（6）计算。Xeara=Xearl +Xcarl +XCur
式中：
试样中CurI，CurIl和CurⅢ的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；XcurlXcurllXcur
Xcur总—样品的姜黄素总含量，单位为毫克每千克（mg/kg）。15测定低限、回收率
15.1测定低限
以样品稀释10倍直接提取法计，液相色谱-质谱/质谱法对三种姜黄素的测定低限分别为1.0mg/kg.
15.2回收率
在果冻、巧克力制品、碳酸饮料、麦片、冰淇淋、调制乳粉、调味糖浆、粉圆、复合调味料、酥炸粉、腌渍的蔬菜、方便面饼、膨化食品中添加姜黄素的浓度为1.0mg/kg~10.0mg/kg时，高效液相色谱质谱/质谱法测定的回收率范围见表3。8
巧克力制品
碳酸饮料
冰淇淋
调制乳粉
调味糖浆
复合调味料
酥炸粉
腌溃的蔬菜
SN/T4890—2017
高效液相色谱-质谱/质谱法测定不同基质中姜黄素的回收率范围化合物
89.8~105.6
89.6~113.2
84.4~101.8
85.2~102.4
95.0~109.9
81.9~102.5
82.6~102.5
86.7~102.9
88.3~100.7
85.6~102.6
85.6~105.6
87.3~101.6
79.6101.2
87.4104.8
92.6~101.1
88.1~101.2
84.6~100.6
86.9~101.1
88.4~100.9
87.1~101.8
87.7~106.6
85.2~105.8
89.2~101.2
90.0~102.2
92.2~101.2
89.9~101.3
87.9~102.5
85.2~103.0
88.3104.9
85.4103.6
86.7~106.5
88.4~104.6
85.0~102.6
添加浓度
92.4~104.4
95.1~108.6
95.1~108.7
94.9~105.3
93.2~103.3
91.6~104.6
92.6~102.9
90.0-102.3
86.3~100.7
90.9~100.3
90.2~100.8
78.7100.0
90.8102.5
85.6~100.8
94.3~102.3
93.2~100.8
90.1~102.9
92.9~101.9
93.0~100.6
87.9~101.6
88.0~104.8
86.4~105.0
91.0~101.6
86.9~101.0
89.5~100.1
88.0~103.9
86.4~101.8
92.6~102.0
90.1~103.5
94.8~103.7
85.9102.4
89.1104.5
85.0~102.9
10.0mg/kg
98.3~101.4
90.6~102.0
96.9~101.1
91.0~101.5
99.1~102.6
90.1~100.3
93.4100.7
91.5~103.2
90.8~100.5
92.0~100.2
91.7~100.2
92.0~100.1
92.2~100.8
90.1~101.7
89.8~100.9
94.9~100.3
87.0~100.8
87.3~100.2
90.0~100.2
95.2100.3
93.1~100.2
89.9~102.9
90.2~101.0
92.6~101.9
95.6~100.1免费标准bzxz.net
88.3~100.4
91.5~102.9
95.9~103.0
95.8~104.0
91.9~102.2
94.3~104.0
93.6101.7
92.0~100.4
SN/T4890—2017
方便面饼
膨化食品
化合物
CurⅢ
表3（续）
83.9~101.0
86.2~103.9
88.1102.2
89.9~100.8
88.5~104.0
85.5~104.5
添加浓度
88.6~102.6
90.4~104.0
94.2~103.8
92.5~105.0
92.6~104.2
86.6~103.0
10.0mg/kg
86.6~100.2
94.1~103.7
89.9~103.9
92.0~100.2
90.9~103.4
88.7~100.5
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