SN/T 2206.14-2017
基本信息
标准号： SN/T 2206.14-2017
中文名称：化妆品微生物检验方法 第14部分:腐生葡萄球菌
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
下载格式：.zip .pdf
下载大小：6090034
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 2206.14-2017.Determination of microbiologies in cosmetics-Part 14 :Sta phylococcus sa prophyticus.
1范围
SN/T 2206.14规定了化妆品中腐生葡萄球菌的定性检测方法。
SN/T 2206.14适用于化妆品中腐生葡萄球菌的定性检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 7918.1化妆品 微生物标准检验方法总则
SN/T 1193基因检验实验室技术要求
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1腐生葡萄球菌Staph .sa parophytics
葡萄球菌属的一种,革兰氏阳性，血琼脂上呈橙色或灰白色，无溶血，血浆凝固酶阴性,尿素酶阳性，发酵葡萄糖、麦芽糖、蕈糖、松二糖,不发酵乳糖和甘露糖
4试剂和材料
4.1 试剂
除另有规定的外,试剂为分析纯或生化试剂,水为灭菌双蒸水,符合GB/T6682中一级水的规格。
4.1.1 0.85%生理盐水。
4.1.2 SCDLP液体培养基(见附录A的A.1)。
4.1.3血 琼脂平板(见A.2)。
4.1.4 腐生葡萄球菌定位显色培养基(见A.3)
4.1.5胰蛋白 胨大豆琼脂培养基(TSA)(见A.4)。
4.1.6生化反应试剂。
1范围
SN/T 2206.14规定了化妆品中腐生葡萄球菌的定性检测方法。
SN/T 2206.14适用于化妆品中腐生葡萄球菌的定性检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 7918.1化妆品 微生物标准检验方法总则
SN/T 1193基因检验实验室技术要求
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1腐生葡萄球菌Staph .sa parophytics
葡萄球菌属的一种,革兰氏阳性，血琼脂上呈橙色或灰白色，无溶血，血浆凝固酶阴性,尿素酶阳性，发酵葡萄糖、麦芽糖、蕈糖、松二糖,不发酵乳糖和甘露糖
4试剂和材料
4.1 试剂
除另有规定的外,试剂为分析纯或生化试剂,水为灭菌双蒸水,符合GB/T6682中一级水的规格。
4.1.1 0.85%生理盐水。
4.1.2 SCDLP液体培养基(见附录A的A.1)。
4.1.3血 琼脂平板(见A.2)。
4.1.4 腐生葡萄球菌定位显色培养基(见A.3)
4.1.5胰蛋白 胨大豆琼脂培养基(TSA)(见A.4)。
4.1.6生化反应试剂。
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2206.14—2017
化妆品微生物检验方法
第14部分：腐生葡萄球菌
Determination of microbiologies in cosmetics-Part14:Staphylococcussaprophyticus2017-05-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-12-01实施
SN/T2206《化妆品微生物检验方法》分为14个部分：第1部分：沙门氏菌；
第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌；第3部分：肺炎克雷伯氏菌：
第4部分：链球菌；
第5部分：肠球菌：
第6部分：破伤风梭菌：
第7部分：蛋白免疫印迹法检测疯牛病病原：第8部分：白色念珠菌；
第9部分：胆汁酸耐受革兰氏阴性杆菌：第10部分：金黄色葡萄球菌PCR法；第11部分：金黄色葡萄球菌多重实时荧光PCR法：第12部分：绿脓杆菌PCR法：
第13部分：嗜麦芽窄食单胞菌；第14部分：腐生葡萄球菌。
本部分为SN/T2206的第14部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T2206.14—2017
本部分起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局。
本部分主要起草人：石建华，王毅谦，李晓虹翰慧萍、祝长青邵景东蒋原。1范围
化妆品微生物检验方法
第14部分：腐生葡萄球菌
SN/T2206的本部分规定了化妆品中腐生葡萄球菌的定性检测方法。本部分适用于化妆品中腐生葡萄球菌的定性检测2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。SN/T2206.14—2017
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T7918.1
化妆品微生物标准检验方法总
SN/T1193基因检验实验室技术要求3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
腐生葡萄球菌
Staph.saparoph ytics
葡萄球菌属的一种，革兰氏阳性，血琼脂上呈橙色或灰白色，无溶血，血浆凝固酶阴性，尿素酶阳性，发酵葡萄糖、麦芽糖、草糖、松二糖，不发酵乳糖和甘露糖4试剂和材料
4.1试剂
除另有规定的外，试剂为分析纯或生化试剂，水为灭菌双蒸水，符合GB/T6682中一级水的规格。4.1.10.85%生理盐水。
SCDLP液体培养基（见附录A的A.1）。血琼脂平板（见A.2）。
腐生葡萄球菌定位显色培养基（见A.3）胰蛋白陈大豆琼脂培养基（TSA)（见A.4）。生化反应试剂
VITEK全自动微生物鉴定系统GP测试卡。注：VITEK、GP测试卡是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的唯一认可。如果其他等效产品具有相同的效果，也可使用等效产品。TaqDNA聚合酶。
dNTP:dATP、dTTP,dCTP,dGTP。
DNA提取试剂：称取0.1gchelex100粉末，加人100mL灭菌蒸馏水中，摇匀即可。1
SN/T2206.14—2017
4.1.1110XPCR缓冲液：200mmol/LTris-HCl(pH8.4），20ommol/L氯化钾（KCl)，15mmol/L氯化镁（MgCl）。
4.1.12引物和探针：
上游引物：5-TGAAGCTGTTTTTGGTAGCGA-3”下游引物：5-AGTTCCTGGTTTAGCACCTTCA-3”TaqMan探针：5-TCGCAAAGATGTTGCTTGTCACACA-3探针5'端由FAM标记，3端由TAMRA标记4.2材料
刻度吸管：2.0mL和10.0mL，分刻度0.1mL。4.2.1
4.2.2三角瓶：150mL，250mL。
4.2.3培养Ⅲl：90mm。
4.2.4普通光学显微镜（1000×）及载玻片。4.2.5
1.5mL离心管。www.bzxz.net
仪器和设备
天平：感量0.1g。
均质器：转速1000r/min以上。
恒温培养箱：36℃士1℃。
5.4恒温水浴锅。
VITEK全自动微生物鉴定系统或类似设备\。实时荧光PCR仪。
离心机：最大转速13000r/min以上。微量移液器：10μL，100μL，200μL，1000μL。低温冰箱：-20℃~4℃。
检验程序
化妆品中腐生葡萄球菌检验方法是通过增菌、分离纯化、生化鉴定或增菌后进行实时荧光PCR检测，对化妆品中可能存在的腐生葡萄球菌进行定性检验。具体检验程序见图1。
1）VITEK是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本部分的使用者，并不表示对该产品的唯一认可。如果其他等效产品具有相同的效果，也可使用等效产品。2
7样品制备
检样10g或10mL制成
1:10样品稀释液
取10mL
90mLSCDLP增菌液
36℃±1℃培养18h~24h
血琼脂和腐生葡葡球菌定位显色培养基36±1℃培养18h~24h
染色镜检
VITEK生化鉴定或按表1进行生化试验报告结果
SN/T2206.14—2017
模板DNA提取
实时荧光PCR检测
图1化妆品中腐生葡萄球菌检验程序化妆品中不同类型的检样制备，参照GB/T7918.1进行制样。8操作步骤
8.1平板培养法
8.1.1增菌
取1：10样品稀释液10mL接种到90mLSCDLP液体培养基中，置36℃土1℃培养18h~24h。8.1.2分离培养
取上述培养液，划线接种于血琼脂平板和腐生葡萄球菌定位显色培养基上，置36℃土1℃培养18h～24h。在血琼脂平板上腐生葡萄球菌菌落大多呈橙色，少数白色，光滑湿润。在腐生葡萄球菌定位显色培养基上腐生葡萄球菌菌落特征按照显色培养基的说明书进行判定。8.1.3纯化
从血琼脂平板或腐生葡萄球菌定位显色培养基挑取至少5个或以上典型或可疑菌落，如果可疑菌落少于5个，则全部挑取，把挑取的可疑菌落纯化接种到胰蛋白陈大豆琼脂（TSA）培养基，36℃土1℃培养18h~24h。
8.1.4染色镜检
用TSA培养基上的纯培养物做革兰氏染色镜检。腐生葡萄球菌应为革兰氏染色阳性，葡萄样球3
SN/T2206.14—2017
菌，无芽孢，无荚膜，直径大小约为1.0μm~1.5μm。8.1.5生化鉴定
用VITEK生化鉴定系统进行生化鉴定，或按表1进行生化试验。腐生葡萄球菌主要生化特性
溶血性
血浆凝固酶
甘露醇
葡萄糖
麦芽糖
尿素酶
甘露糖
松二糖
腐生葡萄球菌
橙色/白色
注：“+”≥90%阳性，“-”≥90%阴性8.1.6结果报告
”迟缓阳性
金黄色葡萄球菌
表皮葡萄球菌
，报告每10g或10mL样品中检出或未检出腐生葡葡球菌。综合平板菌落形态和生化鉴定结果，实时荧光PCR法
检样的增菌和分离
参照平板培养法进行。
8.2.2模板DNA的制备
取8.1.1中培养的增菌液1mL，加到1.5mL无菌离心管中，8000r/min离心5min，吸弃上清；加入50μLDNA提取液（使用前室温解冻并充分混勾，快速吸取），沸水浴5min，12000r/min离心5min，取上清液以待检验（如不能及时检验，可将上清液于一20℃保存）。8.2.3实时荧光PCR检测
8.2.3.1PCR反应体系为25μL：10×PCR缓冲液2.5μL、引物对（10μmol/L）各1μL、探针（10μmol/L）0.5μL、dNTP(10μmol/L)1μL、TagDNA聚合酶（5U/μL)0.5μL、水16.5μL、模板DNA2μL8.2.3.2反应条件：37℃5min.95℃预变性5min95℃变性10s，60℃退火及延伸45s，同时收集FAM荧光信号，共进行40个循环。注：PCR反应参数可根据基因扩增仪型号的不同进行适当的调整。4
SN/T2206.14—2017
3检测过程中分别设阳性对照、阴性对照和空白对照。阳性对照为扩增片段的阳性克隆分子8.2.3.3
DNA或阳性菌株DNA，阴性对照为非阳性菌株DNA,空白对照为无菌水。8.2.4结果及判定
质控标准
空白对照：无扩增曲线，Ct≥40；阴性对照：无扩增曲线，Ct≥40；阳性对照：出现典型的扩增曲线，Ct<30，否则，试验视为无效结果判定和报告
Ct≥40，判定样品结果为阴性：报告未检出腐生葡萄球菌；Ct<35.0，判定样品结果为阳性可疑结果；-35.0检验过程中防止交叉污染的措施按照SN/T1193的规定执行。5
SN/T2206.14—2017
SCDLP液体培养基
A.1.1成分
酪蛋白陈
大豆蛋白陈
氯化钠
磷酸氢二钾
葡萄糖
卵磷脂
吐温-80
蒸馏水
A.1.2制法
1000mlL
附录A
（规范性附录）
培养基和试剂
将卵磷脂在400mL蒸馏水中加热至完全溶解，再将其他成分混合加人600mL蒸馏馅水中，加热完全溶解。将上述两种溶液混合后，充分搅拌均匀。调pH为7.27.3分装，121℃20min高压灭菌。注意振荡，使沉淀于底层的吐温一80充分混合，待冷却至室温使用。A.2
血琼脂培养基
A.2.1成分
蛋白陈
牛肉膏
氯化钠
蒸馏水
脱纤维羊血
A.2.2制法
1000mL
5mL~1oml
将各成分（琼脂和羊血除外）溶解于蒸馏水内，用氢氧化钠调节pH为7.2～7.4.加人琼脂，加热溶解，121℃20min高压灭菌后，冷却备用。临用前加热熔化琼脂，冷却至50℃，以无菌操作加人脱纤维羊血，充分摇匀，倾注平板。
3腐生葡萄球菌定位显色培养基
A.3.1成分
蛋白陈
牛肉膏
酵母膏
氯化钠
色素（特异成分）
蒸馏水
A.3.2制法
1000mL
SN/T2206.14—2017
按使用说明书水化及稀释，加热至100℃并搅拌至琼脂充分溶解，pH为6.8～7.2，冷却至45℃~50℃，倾注90mm无菌培养血，室温保存1d或2℃～8℃冰箱避光储存不超过4d。A.4
胰蛋白陈大豆琼脂培养基（TSA）A.4.1成分
胰蛋白陈
大豆陈
氯化钠
蒸馏水
A.4.2制法
1000mL
制法：除琼脂外，将其余成分溶解于蒸馏水中，pH为7.27.4，加人琼脂，加热溶解，分装试管，121℃20min高压灭菌后，冷却至45℃～50℃以无菌操作倾注平板备用。
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化妆品微生物检验方法
第14部分：腐生葡萄球菌
Determination of microbiologies in cosmetics-Part14:Staphylococcussaprophyticus2017-05-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-12-01实施
SN/T2206《化妆品微生物检验方法》分为14个部分：第1部分：沙门氏菌；
第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌；第3部分：肺炎克雷伯氏菌：
第4部分：链球菌；
第5部分：肠球菌：
第6部分：破伤风梭菌：
第7部分：蛋白免疫印迹法检测疯牛病病原：第8部分：白色念珠菌；
第9部分：胆汁酸耐受革兰氏阴性杆菌：第10部分：金黄色葡萄球菌PCR法；第11部分：金黄色葡萄球菌多重实时荧光PCR法：第12部分：绿脓杆菌PCR法：
第13部分：嗜麦芽窄食单胞菌；第14部分：腐生葡萄球菌。
本部分为SN/T2206的第14部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T2206.14—2017
本部分起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局。
本部分主要起草人：石建华，王毅谦，李晓虹翰慧萍、祝长青邵景东蒋原。1范围
化妆品微生物检验方法
第14部分：腐生葡萄球菌
SN/T2206的本部分规定了化妆品中腐生葡萄球菌的定性检测方法。本部分适用于化妆品中腐生葡萄球菌的定性检测2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。SN/T2206.14—2017
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T7918.1
化妆品微生物标准检验方法总
SN/T1193基因检验实验室技术要求3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
腐生葡萄球菌
Staph.saparoph ytics
葡萄球菌属的一种，革兰氏阳性，血琼脂上呈橙色或灰白色，无溶血，血浆凝固酶阴性，尿素酶阳性，发酵葡萄糖、麦芽糖、草糖、松二糖，不发酵乳糖和甘露糖4试剂和材料
4.1试剂
除另有规定的外，试剂为分析纯或生化试剂，水为灭菌双蒸水，符合GB/T6682中一级水的规格。4.1.10.85%生理盐水。
SCDLP液体培养基（见附录A的A.1）。血琼脂平板（见A.2）。
腐生葡萄球菌定位显色培养基（见A.3）胰蛋白陈大豆琼脂培养基（TSA)（见A.4）。生化反应试剂
VITEK全自动微生物鉴定系统GP测试卡。注：VITEK、GP测试卡是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的唯一认可。如果其他等效产品具有相同的效果，也可使用等效产品。TaqDNA聚合酶。
dNTP:dATP、dTTP,dCTP,dGTP。
DNA提取试剂：称取0.1gchelex100粉末，加人100mL灭菌蒸馏水中，摇匀即可。1
SN/T2206.14—2017
4.1.1110XPCR缓冲液：200mmol/LTris-HCl(pH8.4），20ommol/L氯化钾（KCl)，15mmol/L氯化镁（MgCl）。
4.1.12引物和探针：
上游引物：5-TGAAGCTGTTTTTGGTAGCGA-3”下游引物：5-AGTTCCTGGTTTAGCACCTTCA-3”TaqMan探针：5-TCGCAAAGATGTTGCTTGTCACACA-3探针5'端由FAM标记，3端由TAMRA标记4.2材料
刻度吸管：2.0mL和10.0mL，分刻度0.1mL。4.2.1
4.2.2三角瓶：150mL，250mL。
4.2.3培养Ⅲl：90mm。
4.2.4普通光学显微镜（1000×）及载玻片。4.2.5
1.5mL离心管。www.bzxz.net
仪器和设备
天平：感量0.1g。
均质器：转速1000r/min以上。
恒温培养箱：36℃士1℃。
5.4恒温水浴锅。
VITEK全自动微生物鉴定系统或类似设备\。实时荧光PCR仪。
离心机：最大转速13000r/min以上。微量移液器：10μL，100μL，200μL，1000μL。低温冰箱：-20℃~4℃。
检验程序
化妆品中腐生葡萄球菌检验方法是通过增菌、分离纯化、生化鉴定或增菌后进行实时荧光PCR检测，对化妆品中可能存在的腐生葡萄球菌进行定性检验。具体检验程序见图1。
1）VITEK是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本部分的使用者，并不表示对该产品的唯一认可。如果其他等效产品具有相同的效果，也可使用等效产品。2
7样品制备
检样10g或10mL制成
1:10样品稀释液
取10mL
90mLSCDLP增菌液
36℃±1℃培养18h~24h
血琼脂和腐生葡葡球菌定位显色培养基36±1℃培养18h~24h
染色镜检
VITEK生化鉴定或按表1进行生化试验报告结果
SN/T2206.14—2017
模板DNA提取
实时荧光PCR检测
图1化妆品中腐生葡萄球菌检验程序化妆品中不同类型的检样制备，参照GB/T7918.1进行制样。8操作步骤
8.1平板培养法
8.1.1增菌
取1：10样品稀释液10mL接种到90mLSCDLP液体培养基中，置36℃土1℃培养18h~24h。8.1.2分离培养
取上述培养液，划线接种于血琼脂平板和腐生葡萄球菌定位显色培养基上，置36℃土1℃培养18h～24h。在血琼脂平板上腐生葡萄球菌菌落大多呈橙色，少数白色，光滑湿润。在腐生葡萄球菌定位显色培养基上腐生葡萄球菌菌落特征按照显色培养基的说明书进行判定。8.1.3纯化
从血琼脂平板或腐生葡萄球菌定位显色培养基挑取至少5个或以上典型或可疑菌落，如果可疑菌落少于5个，则全部挑取，把挑取的可疑菌落纯化接种到胰蛋白陈大豆琼脂（TSA）培养基，36℃土1℃培养18h~24h。
8.1.4染色镜检
用TSA培养基上的纯培养物做革兰氏染色镜检。腐生葡萄球菌应为革兰氏染色阳性，葡萄样球3
SN/T2206.14—2017
菌，无芽孢，无荚膜，直径大小约为1.0μm~1.5μm。8.1.5生化鉴定
用VITEK生化鉴定系统进行生化鉴定，或按表1进行生化试验。腐生葡萄球菌主要生化特性
溶血性
血浆凝固酶
甘露醇
葡萄糖
麦芽糖
尿素酶
甘露糖
松二糖
腐生葡萄球菌
橙色/白色
注：“+”≥90%阳性，“-”≥90%阴性8.1.6结果报告
”迟缓阳性
金黄色葡萄球菌
表皮葡萄球菌
，报告每10g或10mL样品中检出或未检出腐生葡葡球菌。综合平板菌落形态和生化鉴定结果，实时荧光PCR法
检样的增菌和分离
参照平板培养法进行。
8.2.2模板DNA的制备
取8.1.1中培养的增菌液1mL，加到1.5mL无菌离心管中，8000r/min离心5min，吸弃上清；加入50μLDNA提取液（使用前室温解冻并充分混勾，快速吸取），沸水浴5min，12000r/min离心5min，取上清液以待检验（如不能及时检验，可将上清液于一20℃保存）。8.2.3实时荧光PCR检测
8.2.3.1PCR反应体系为25μL：10×PCR缓冲液2.5μL、引物对（10μmol/L）各1μL、探针（10μmol/L）0.5μL、dNTP(10μmol/L)1μL、TagDNA聚合酶（5U/μL)0.5μL、水16.5μL、模板DNA2μL8.2.3.2反应条件：37℃5min.95℃预变性5min95℃变性10s，60℃退火及延伸45s，同时收集FAM荧光信号，共进行40个循环。注：PCR反应参数可根据基因扩增仪型号的不同进行适当的调整。4
SN/T2206.14—2017
3检测过程中分别设阳性对照、阴性对照和空白对照。阳性对照为扩增片段的阳性克隆分子8.2.3.3
DNA或阳性菌株DNA，阴性对照为非阳性菌株DNA,空白对照为无菌水。8.2.4结果及判定
质控标准
空白对照：无扩增曲线，Ct≥40；阴性对照：无扩增曲线，Ct≥40；阳性对照：出现典型的扩增曲线，Ct<30，否则，试验视为无效结果判定和报告
Ct≥40，判定样品结果为阴性：报告未检出腐生葡萄球菌；Ct<35.0，判定样品结果为阳性可疑结果；-35.0
SN/T2206.14—2017
SCDLP液体培养基
A.1.1成分
酪蛋白陈
大豆蛋白陈
氯化钠
磷酸氢二钾
葡萄糖
卵磷脂
吐温-80
蒸馏水
A.1.2制法
1000mlL
附录A
（规范性附录）
培养基和试剂
将卵磷脂在400mL蒸馏水中加热至完全溶解，再将其他成分混合加人600mL蒸馏馅水中，加热完全溶解。将上述两种溶液混合后，充分搅拌均匀。调pH为7.27.3分装，121℃20min高压灭菌。注意振荡，使沉淀于底层的吐温一80充分混合，待冷却至室温使用。A.2
血琼脂培养基
A.2.1成分
蛋白陈
牛肉膏
氯化钠
蒸馏水
脱纤维羊血
A.2.2制法
1000mL
5mL~1oml
将各成分（琼脂和羊血除外）溶解于蒸馏水内，用氢氧化钠调节pH为7.2～7.4.加人琼脂，加热溶解，121℃20min高压灭菌后，冷却备用。临用前加热熔化琼脂，冷却至50℃，以无菌操作加人脱纤维羊血，充分摇匀，倾注平板。
3腐生葡萄球菌定位显色培养基
A.3.1成分
蛋白陈
牛肉膏
酵母膏
氯化钠
色素（特异成分）
蒸馏水
A.3.2制法
1000mL
SN/T2206.14—2017
按使用说明书水化及稀释，加热至100℃并搅拌至琼脂充分溶解，pH为6.8～7.2，冷却至45℃~50℃，倾注90mm无菌培养血，室温保存1d或2℃～8℃冰箱避光储存不超过4d。A.4
胰蛋白陈大豆琼脂培养基（TSA）A.4.1成分
胰蛋白陈
大豆陈
氯化钠
蒸馏水
A.4.2制法
1000mL
制法：除琼脂外，将其余成分溶解于蒸馏水中，pH为7.27.4，加人琼脂，加热溶解，分装试管，121℃20min高压灭菌后，冷却至45℃～50℃以无菌操作倾注平板备用。
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