SN/T 1121-2002.Determination of benzoic acid ,sorbic acid and parabens in Chinese traditional medicine preparation-Liquid chromatographic method.
1范围
SN/T 1121规定了中药合剂、糖浆剂的抽样、制样方法,以及中药合剂、糖浆剂中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯的液相色谱法测定方法。
SN/T 1121适用于中药合剂、糖浆剂中苯甲酸、山梨酸对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯的检验。
2抽样和制样
2.1检验批
以不超过5000件为一检验批。
每一检验批应以同一生产批次的产品划分。
2.2抽样方法
2.2.1 100件以下最低抽取3件;101~1 000件最低抽取5件;1 000件以上最低抽取7件。
2.2.2 按2.2.1规定的数量随机抽取。逐件开启,每件取出1瓶。瓶装中药合剂、糖浆剂,每批抽样不得小于3瓶(每瓶以500 mL计),平均供试样品的量一般不少于实验室所需3倍数。
2.3试样的制备
将取回的样品充分混合,分取500 ml作为试样,均分成两份,装人洁净的容器内,密封标明标记。
2.4试样的保存
将试样于室温下保存。
注:在抽样和制样的操作过程中.必须防止样品受到污染。
3测定方法
3.1方法提要
在酸性条件下用乙醚提取试样中的防腐剂,提取液浓缩后分为苯甲酸、山梨酸和对羟基酯类两部分分别进行测试,液相色谱二极管阵列或紫外检测器外标法定量。
3.2试剂和材料
除另有规定外,试剂均为分析纯,水为蒸馏水。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1121-2002
中药制剂中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类防腐剂的检验方法
液相色谱法
Determination of benzoic acid,sorbic acid and parabensinChinesetraditional medicinepreparationLiquid chromatographic method2002-08-02发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2003-01-01实施
本标准中的测定方法是参考国内有关文献，经研究、改进和验证后制定的。本标准附录A为资料性的附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准负责起草单位：中华人民共和国广州出人境检验检疫局。本标准主要起草人：刘青、林峰、蔡纯、梁伟大。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。SN/T1121-2002
1范围
中药制剂中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类防腐剂的检验方法液相色谱法SN/T1121—2002
本标准规定了中药合剂、糖浆剂的抽样、制样方法，以及中药合剂、糖浆剂中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯的液相色谱法测定方法。本标准适用于中药合剂、糖浆剂中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯的检验。2抽样和制样
2.1检验批
以不超过5000件为一检验批。
每一检验批应以同一生产批次的产品划分。2.2抽样方法
2.2.1100件以下最低抽取3件；101~1000件最低抽取5件；1000件以上最低抽取7件。2.2.2按2.2.1规定的数量随机抽取。逐件开启，每件取出1瓶。瓶装中药合剂、糖浆剂，每批抽样不得小于3瓶（每瓶以500mL计），平均供试样品的量一般不少于实验室所需3倍数。2.3试样的制备
将取回的样品充分混合，分取500mL作为试样，均分成两份，装人洁净的容器内，密封标明标记。
2.4试样的保存
将试样于室温下保存。
注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染。3测定方法
3.1方法提要
在酸性条件下用乙醚提取试样中的防腐剂，提取液浓缩后分为苯甲酸、山梨酸和对羟基酯类两部分分别进行测试，液相色谱二极管阵列或紫外检测器外标法定量。3.2试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。3.2.1甲醇：液相色谱纯。
3.2.2乙醚：无水乙醚。
3.2.3乙酸铵水溶液：0.02mol/L。3.2.4盐酸水溶液：6mol/L。
3.2.5苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯标准品：纯度≥98%。3.2.6标准溶液：准确称取适量的防腐剂标准品，用甲醇配成为1.0mg/mL的标准储备溶液，根据需要再用甲醇稀释，配成适当浓度的标准工作溶液。1
SN/T1121--2002
3.3仪器和色谱条件
3.3.1高效液相色谱仪：配二极管阵列或紫外检测器。3.3.2分液漏斗：50mL。
3.3.3容量瓶：50mL。
3.3.4带刻度的离心试管：5.0mL。3.3.5水浴锅：可调温。
3.4测试步骤
3.4.1样品处理
称取1.0g（准确至0.001g）试样于50mL分液漏斗中，加25mL水，混匀后加人0.2mL6mol/L盐酸水溶液，用2×20mL无水乙醚提取两次，合并提取液于容量瓶中，用乙醛定容至50.0mL并混匀。静置片刻后，准确移取5.0mL提取液于带刻度的离心试管中，在40℃水浴上蒸发至近干，用甲醇定容至2.0mL，溶液经0.45um滤膜过滤后供液相色谱分析。3.4.2测定
3.4.2.1色谱条件
a）色谱柱：SUPELCODiscoveryCia柱，150mm×4.6mm（内径），粒度5μm，或相当者；b）测定波长：苯甲酸、山梨酸：230nm；对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯：254nm；c）柱温：40℃；
d）流动相：苯甲酸、山梨酸：0.02mo1/L乙酸铵水溶液-甲醇（体积比，98+2)；对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯：0.02mo1/L甲醇-乙酸铵水溶液（体积比，70+30）；e）流速：1.0mL/min;
f）进样体积：20μL。
3.4.2.2测定方法
根据样液中防腐剂的含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中防腐剂的响应值均应在仪器检测的线性范围内。在选定的分析条件下，对标准工作溶液和测定样液等体积交叉进行试验，苯甲酸、山梨酸的保留时间分别约为5.7min、8.1min，对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯的保留时间分别约为4.4min、5.5min、7.8min、12.3min。标准品色谱图参见附录A中图A.1、A.2。3.5空白试验
除不加试样外，按上述测定步骤进行。3.6结果计算和表达
用色谱管理系统处理数据或按式(1)计算：X=AXcXV
式中：X—-试样中防腐剂的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A一一试样中防腐剂的峰面积，单位为平方毫米(mm2)；A，一标准工作液中防腐剂的峰面积，单位为平方毫米（mm）；c—一标准工作液中防腐剂浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL)；m一一最终样液中所代表的试样量，单位为克(g)。注：计算结果需扣除空白值。
4测定低限、回收率
4.1测定低限
本方法中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯的测定低限均为1.00mg/kg。2
（1）
4.2回收率
4.2.1苯甲酸、山梨酸回收率
在1.00mg/kg~3000mg/kg范围内，苯甲酸的回收率为91.0%~103%；在1.00mg/kg~3000mg/kg范围内，山梨酸的回收率为91.7%~104%。4.2.2对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯SN/T 1121-2002
在1.00mg/kg500mg/kg范围内，对羟基苯甲酸甲酯的回收率为92.0%~104%；在1.00mg/kg~500mg/kg范围内，对羟基苯甲酸乙酯的回收率为91.0%~102%；在1.00mg/kg~500mg/kg范围内，对羟基苯甲酸丙酯的回收率为91.0%~98.8%；在1.00mg/kg~500mg/kg范围内，对羟基苯甲酸丁酯的回收率为92.6%~99.6%。3
SN/T1121—2002
1——苯甲酸；
2——山梨酸。
1—-对羟基苯甲酸甲酯；
2—对羟基苯甲酸乙酯；
3——对羟基苯甲酸丙酯
4——对羟基苯甲酸丁酯。
附录A
（资料性附录）
标准品色谱图
苯甲酸、山梨酸标准溶液色谱图9e9'g
2对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯标准溶液色谱图图A.2
Foreword
SN/T1121—2002
The method for determination of this standard was drafted by referring to relevant domestic andforeign literatures through research,modificationand verification.AnnexAofthis standardisan informativeannex.This standard was proposed and administrated by National Regulatory Commission for Certifica+tion and Accreditation.www.bzxz.net
This standards wad drafted by Guangzhou Entry-Exit Inspection and Quarantine of the Peoples Re-public of China
The main drafters of this standard are Liu qing,Lin Feng,Cai Chun,Liang Weida.This standard is a professional standard of entry-exit inspection and quarantine promulgated forthe firsttime.
Note:This Englishversion,a translation from the Chinesetextis solelyforguidance5
SN/T1121—2002
Determination of benzoic acid,sorbic acid and parabensin Chinese traditional medicine misture and julep-Liquid chromatographic method1Scope
This standard specifies the methods of sampling,sample preparation and determination of benzoicacid,sorbic acid and parabens in Chinese traditional medicine misture and julep by liquid chro-matographicmethod.
The standard is applicable to the determination of benzoic acid,sorbic acid and parabens in Chi-nesetraditional medicinemisture and julepfor export.2 Samplingand samplepreparation2.1 Inspection lot
EachInspectionlotshouldnotexceed5ooopackagesTheproduct inan inspection should beof the same productionbatch2.2 Samplingmethod
2.2.1 For 100 packages,take 3 packages at least;between 101~1 000 packages at least;above1 000 packages,take 10 packages at least.2.2.2 Take the packages inside.according to the number specified in 2.2.1 at random andopened one by one.From each package,take one bottle.The bottled samples taken back will notless than 3 bottles each lot(as 5oo mL).The number of them should be three times of that of thetestsample.
2.3Samplepreparation
Mixall the samplestaken back thoroughly;take5oomLasthetest sample.Divide into two equalportions and place them in clean bottles,which is sealed and labeled.2.4Storageof thetestsample
Thetestsampleshouldbestoredatroomtemperature.SN/T1121—2002
Note:In the course of sampling and preparation of sample,precaution must be taken to avoid the contamination3Method ofdetermination
3.1Principle
Extract the preservatives with ether in acid condition,after concentration,the test solution is usedfor two tests,by HPLC equippedwith PDA or UV detector,one is the determination of benzoic acidand sorbic acid,another is that of parabens,using external standard method.3.2
Reagentsand materials
Unless otherwise specified,all reagents should be analytically pure.\Water\is distilled water.3.2.1Methanol:HPLCgrade.
3.2.2Ether:Dehydrated ether.3.2.3Aceticammoniumaqueoussolution:0.02mol/L.3.2.4Hydrochloric acid aqueous solution:6mol/L3.2.5
Benzoic acid,sorbic acid,methylphydroxybenzoate,ethylphydroxybenzoate,propylphydroxybenzoateand butylphydroxybenzoate standard:purity≥98%.3.2.6Standard soiution:Accuratelyweighan adequate amount ofantiseptic standard,dissolve inmethanol and prepare a solution of 1.0 mg/mL as the standard solution.Then,as required,diluteit with water to appropriate concentration to serve as the standard working solution.3.3 Instrument and apparatus3.3.1,High performance liquid chromatograph:Equippedwith PDAdetectorof UV detector.3.3.2Separatoryfunnel:50mL
Volumetricflask:50mL
Centrifugetube:5.0mL,graduated3.3.5Waterbath：Temperaturecontrolled3.4
Procedure
SN/T1121—2002
3.4.1Preparation
Weigh 1.0g test sample(Accurateto 0.001g)into 50mL separatoryfunnel,add 25mLwater.After mixing thoroughly,add o.2 mL 6 mol/L hydrochloric acid aqueous solution.Extract with 2x20 mL ether,combine the ether extract into a volumetric flask,add to 50.0 mL.Stewing for a moment,accurately transfer 5.0 mL extract to a graduated centrifuge tube,evaporate in a 40 waterbathtodryness,addexactly2.omLofmethanol.3.4.2Determination
3.4.2.1LC parameters
a)Column:SUPELcoDiscoveryC1s,150mmx4.6mm(i.d.),particlesize5μm,orequivalent：b)Wavelength:benzoicacidand sorbicacid:23onm;parabens:254 nm;
c)Oventemperature:40℃;
d)Mobile phase
Benzoic acid and sorbic acid:0.02mol/L acetic ammonium-Methanol(V/V,98 +2);Parabens:0.02mol/LMethanol-aceticammonium（V/V,70+30);e)Flowrare:1.0mL/min;
f)Injection volume:20μL,
3.4.2.2According to the approximate concentration ofthe preservatives in the sample solution,select the standard working solution with similar peak area to that of the sample solution.Thestandard working solution should be randomly injected in-between the injections of the sample solution of equal volume.The retention time of benzoic acid and sorbic acid is 5.7 min and8.1 min.The retention time of parabens are separately4.4min,5.5 min,7.8 min and 12.3min3.5Blank test
The operation of the blank test is the same as that of described in the method of determination,butwithoutadditionofsample.
3.6CalculationandexpressionofresultThe calculation of result is carried out by an Lc chromatography system or according to the formu-la(1):
where：
X-Content of preservative in the test sample,mg/kg;A-Peak area of preservative in the test solution,mm?;A-Peak area of preservative in the standard working solution,mm?;SN/T1121-2002
·（1)
cConcentration of preservative in the standard working solution,μg/mL;V-Final volume of test sample solution,mL;m-The corresponding mass of the test sample in the final solution,gNote:The biank value should be subtracted from the above result of calculation4 Limit of determination and recovery4.1Limitof determination
The limit of determination of this methodis 1.o0mg/kg4.2Recovery
4.2.1Recoveryofbenzoic acidand sorbic acidFortifyingconcentration1.00mg/kg~3000mg/kg;Therecoveryofbenzoicacid is91.0%~103%;Therecoveryof sorbic acid is91.7%~104%.4.2.2Recoveryofparabens
Fortifyingconcentration1.00mg/kg~500mg/kgTherecoveryofmethylphydroxybenzoateis92.0%~104%;The recoveryof ethylphydroxybenzoate is 91.0%~102%;Therecoveryof propylphydroxybenzoateis91.0%~98.8%;The recoveryofbutylphydroxybenzoateis92.6%~99.6%.9
SN/T1121—2002
1benzoicacid
2—sorbicacid.
AnnexA
（informative）
Chromatogram of the standard1
HPLC chromatogram of benzoic acid and sorbic acid standard80
1-methylphydroxybenzoate；
2ethylphydroxybenzoate；
3propylphydroxybenzoate;
4—-butylphydroxybenzoate.
FigA.2HPLC chromatogram oftheparabensstandard10
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