SN/T 1135.8-2009.Quarantine identification of Phoma exigua var. foveata.
1范围
SN/T 1135.8规定了马铃薯坏疽病菌的检疫鉴定方法。
SN/T 1135.8适用于所有进境马铃薯薯块携带的马铃礱坏疽病菌的检疫鉴定。
2原理
2.1分类地位
马铃薯坏疽病菌(Phoma exigua var. foveala)的分类为真菌界Fungi, 无性型真菌Anamor phic fungi ,孔穴茎点霉。
2.2寄主
主要寄主为马铃薯。在安第斯山地区还危害昆诺藜(Chenopodium quinoa )和野生马铃薯。
2.3鉴定原理
该病原菌的危害症状.分离培养特性以及形态特征是检疫鉴定的主要依据。
3仪器设备、用具及试剂
3.1 仪器设备及用具
电子天平(感盘1/10 000 g)、解剖镜、显微镜、超净工作台、温控培养箱、高压灭菌锅、低温冰箱、普通冰箱镊子、量筒、培养皿等。
3.2试剂
无水乙醇、次氛酸钠、氨水、麦芽糖琼脂培养基(参见附录A)等。
4检验方法
4.1 症状观察
观察马铃薯薯块是否有病斑及菌丝线.分生孢子器等。
4.2分离培养
取有马铃礱坏疽病可疑症状的薯块,切开并在其病健交界处取样,切成4mm×4mm小块,0.5%的次氯酸钠表面消毒5 min,无菌水冲洗三遍,置于2%(质量浓度)麦芽琼脂培养基(MA)平板上,每皿放置5块~6块;或在无菌状态下直接挑取菌丝置于2%麦芽琼脂培养基上,20℃~22℃黑暗条件下培养。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1135.8—2009
马铃薯坏疽病菌检疫鉴定方法
Quarantine identification of Phoma exigua var. foveata2009-09-02发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2010-03-16实施
本标准的附录A、附录B均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T1135.8—2009
本标准由中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局负责起草。
本标准主要起草人：刘伟、王秀芬、于恒纯、王有福、姜丽、彭金火。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1范围
马铃薯坏疽病菌检疫鉴定方法
本标准规定了马铃薯坏疽病菌的检疫鉴定方法。本标推适用于所有进境马铃薯薯块捞带的马铃薯坏疽病菌的检疫鉴定。2原理
2.1分类地位
SN/T1135.8—2009
马铃薯坏殖病菌（Phomaerigua var.foueata）的分类为真菌界Fungi，无性型真菌Anamorphidfungi，孔穴茎点霉。
2.2寄主
主要寄主为马铃警。在安第斯山地区还危害昆诺藜（Chenopodium quinoa）和野生马铃薯。2.3鉴定原理
该病原菌的危害症状、分离培养特性以及形态特征是检疫鉴定的主要依据。3仪器设备、用具及试剂
3.1仪器设备及用具
电子天平（感量1/10000g）、解剖镜、显微镜、超净工作台、温控培养箱、高压灭菌锅、低温冰箱、普通冰箱、锻子、量简、培养皿等。3.2试剂
无水乙醇、次氯酸钠、氨水、麦芽糖琼脂培养基(参见附录A)等。4检验方法
4.1症状观察
观察马铃薯薯块是否有病斑及菌丝线、分生孢子器等。4.2分离培养
取有马铃薯坏疽病可疑症状的薯块，切开并在其病健交界处取样，切成4mmX4mm小块，0.5%的次氯酸钠表面消毒5min，无菌水冲洗三遍，置于2%（质量浓度）麦芽琼脂培养基（MA）平板上，每Ⅲ放置5块～6块：或在无菌状态下直接挑取菌丝于2%麦芽琼脂培养基上，20℃～22℃黑暗条件下培养。
4.3病原菌形态及特性观察
观察马铃薯坏疽病菌的器孢子大小、形态及菌落特性。5鉴定特征
5.1症状
马铃薯坏疽病菌在马铃薯块茎上的症状为暗色凹陷小病斑，常不超过拇指大小。病斑皱缩容易剥离，留下一个干空腔。干空腔常扩展，产生带有灰色或暗褐色到紫色的菌丝线，并产生分生孢子器。小茎点霉变种(P.eriguavar.erigua)在马铃薯薯块上可产生与马铃薯坏疽病菌相同的症状，该菌为弱寄生菌，可以用培养特征进行区别。由Fusariumspp.引起的干腐病通常产生比较平整的同心轮纹病斑，病斑表面经常可见白色、粉白SN/T1135.8—2009
色或蓝紫色的真菌垫。
5.2形态特征
马铃薯坏疽病菌的器孢子在大小和形态上是变化的，但通常是单胞、卵形、透明：大小为4μMm一6.5μmx2μm~3μm。
5.3培养特征
用2%麦芽琼脂培养基20℃～22℃黑暗恒温培养。3d后，马铃薯坏疽病菌（P.eziguavar.foue-ata)产生灰白色的垫状菌落，此后多数菌落的中心从苍白色变为微黄褐色，菌落边缘规则。10d后产生特有的、可扩散的葱醒色素。在酸性条件下，葱醒色素呈黄色，在碱性条件下呈红色（如将培养物暴露在挥发性的氨水上部，几秒钟后培养物即可变成红色）。在2%麦芽琼脂培养基上培养时，小基点辑变种（P.eriguavar.ejgua）与马铃碧坏疽病菌易于区别：P.ezigua var.foueala的菌落皇放射状，色花白至微黄，有可扩散性的葱醒色素产生：P.ezigua不产生可扩散性的葱醒色素。
var.ezigua的菌落呈同心轮纹（参见附录B），颜色为橄榄灰色到白色，当小茎点舞变种P.eriguavar.erigua和马铃薯坏疽病菌接种于同一平板麦芽培养基时，在菌落的交界处会产生一个紫罗兰线。在生长于麦芽培养基中心的，P.erigua var.erigua周围接种待鉴定菌，经培养后如果在两菌交界处产生紫罗兰线，可判定马铃薯坏疽病菌的存在。6结果判定
符合5.1的症状、5.2形态以及5.3培养鉴定特性则判定该病菌为冯铃薯坏疽病菌。7样品保存
7.1菌种保存
制作2%麦芽琼脂斜面培养基，把纯化的菌落接种到斜面培养基上，置于冰箱中4℃保存，以备谈判、仲裁使用。
7.2样品保存
保存样品应按品种分别存放经登记和经手人签字居置冰箱冷藏保存2个月。马铃薯坏疽病菌样品至少需保存6个月，同时保留电子图片，以备复验、谈判和仲裁。。保存期满后，灭菌处理。
（资料性附录）
麦芽琼脂培养基配制
麦芽琼脂培养基（MA）组分（或采用市售麦芽琼脂培养基）：麦芽抽提物（Maltextract)20.0g真菌蛋白陈（MycologicalPeptone）5.0g琼脂（Agar)15.0g
配制方法：溶解煮沸各种成分，蒸馏水定容至1L，121℃高压灭菌15min。SN/T1135.8—2009
SN/T1135.8—2009
附录B
（资料性附录）
菌落形态图Www.bzxZ.net
a）phomaeriguavar.erigua.菌落带有环层b）phonaeriguavar.outata，培养物没有环层图B.1马铃薯坏疽病菌在麦芽琼脂培养基上的菌落区别特征（photographsbyG.Little）书号：155066·2-20145
SN/T1135.8-2009
定价：
SELL/NS
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