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SN/T 1048-2002

基本信息

标准号: SN/T 1048-2002

中文名称:进出口粮食、饲料大麦品种鉴定蛋白质电泳分析法

标准类别:商检行业标准(SN)

标准状态:现行

出版语种:简体中文

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相关标签: 进出口 粮食 饲料 大麦 品种鉴定 蛋白质

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标准简介

SN/T 1048-2002.Cereals and feedstuffs for import and export-Identification for barley variety-Method of protein electrophoresis.
1范围
SN/T 1048规定了进出口大麦品种鉴定的方法。
SN/T 1048适用于进出口大麦品种的鉴定。
2引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
SN/T 0798--1999进出口粮油饲料检验检验名 词术语
SN/T 0800. 1-1999进出口 粮油饲料检验抽样和制样 方法
3定义
除按照SN/T 0798中的定义执行外,本标准还采用下列定义。
3.1品种variety
在长期自然选择 下生长的或经过人工培育出的作物的不同栽培种。
3.2品种鉴定 variety identification
用物理的或化学的方法区分作物的不同品种。
3.3 醇溶蛋白质hordeins
种子中溶解于醇类的、能用含有醇类的缓冲液提取的一组儲藏蛋白质。作物不同品种的种子内所含醇溶蛋白各组分不一样,各组分蛋白质受不同的基因所编码。
4抽样和制样
按照SN/T 0800.1中规定的方法执行。
5检验
5.1原理
大麦的醇溶蛋白通过垂直平板电泳能有效地分离,经银染后得到电泳图谱,各种大麦的醇溶蛋白电泳图谱是品种的固有特性,对其进行比较分析可以鉴定大麦品种。

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标准内容

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1048--2002
进出口粮食、饲料
大麦品种鉴定
蛋白质电泳分析法wwW.bzxz.Net
Cereals and feedstuffs for import and export-Identification for barley variety-Method of protein electrophoresis2002-01-16发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2002-06-01实施
SN/T1048
3-2002
本标准是按照GB/T1.1-1993《标准化工作导则第1单元:标准的起草与表述规则第1部分:标准编写的基本规定》的要求进行编写的,其中测定方法参照国内外有关文献,经研究、改进和验证后而制定的。
本标准的附录A是提示的附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准负责起草单位:中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人:潘良文、陶军、关裕亮。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。1范围
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口粮食、饲料
大麦品种鉴定蛋白质电泳分析法Cereals and feedstuffs for import and export-Identification forbarley varietyMethod of protein electrophoresis本标准规定了进出口大麦品种鉴定的方法。本标准适用于进出口大麦品种的鉴定。2引用标准
SN/T1048—2002
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。SN/T0798--1999进出口粮油饲料检验检验名词术语SN/T0800.1一1999进出口粮油饲料检验抽样和制样方法3定义
除按照SN/T0798中的定义执行外,本标准还采用下列定义。3.1品种variety
在长期自然选择下生长的或经过人工培育出的作物的不同裁培种。3.2品种鉴定varietyidentification用物理的或化学的方法区分作物的不同品种。3.3醇溶蛋白质hordeins
种子中溶解于醇类的、能用含有醇类的缓冲液提取的一组储藏蛋白质。作物不同品种的种子内所含醇溶蛋白各组分不一样,各组分蛋白质受不同的基因所编码。4抽样和制样
按照SN/T0800.1中规定的方法执行。5检验
5.1原理
大麦的醇溶蛋白通过垂直平板电泳能有效地分离,经银染后得到电泳图谱,各种大麦的醇溶蛋白电泳图谱是品种的固有特性,对其进行比较分析可以鉴定大麦品种。5.2试剂
所有实验用试剂均为分析纯;除特别说明外,实验用水为蒸馏水或相应的去离子水。中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-01-16批准2002-06-01实施
5.2.150%丙醇缓冲液
SN/T1048—2002
称取0.50g三羟甲基氨基甲烷(Tris),加人25mL蒸馏水和50mL1-丙醇,用硼酸调至pH8.6,加水定容至100mL,在4℃下保存。5.2.2提取液
称取0.10g二硫代苏糖醇(DTT),加入50%丙醇缓冲液10mL,在4℃下保存。5.2.3含有乙烯吡啶的缓冲丙醇溶液吸取72.0μL4-乙烯吡啶,用50%丙醇缓冲液定容至5mL,储于一20℃保存,配制后当天使用。5.2.40.5%浪酚蓝溶液
称取0.50g溴酚蓝,加蒸馏水定容至100mL,在4℃下保存。5.2.5含有溴酚蓝的样品缓冲液
称取0.50gTris,40.0g甘油和2.0g十二烷基磺酸钠(SDS),加入30mL蒸馏水和4.0mL0.5%溴酚蓝溶液,用硼酸调至pH8.6,加水定容至100mL。5.2.6N,NN2,N-四甲基乙二胺(TEMED)5.2.725%丙烯酰胺溶液
称取61.25g丙烯酰胺,1.25gN,N2-亚甲双丙烯酰胺,用蒸馏水定容至250mL,用0.45μ硝基纤维素微孔膜过滤,在4℃下保存。注:丙烯酰胺和N,N\-亚甲双丙烯酰胺是神经毒素,在配制溶液、灌胶和染色过程中要带上防护手套。5.2.8分离胶缓冲液
称取60.55gTris,1.33gSDS,加入100mL蒸馏水,用盐酸(1+1)调至pH9.2,加水定容至200mL。
5.2.9浓缩胶缓冲液
称取15.14gTris,2.5gSDS,加人蒸馏水50mL,用盐酸(1+1)调至pH6.8,加水定容至100mL。5.2.101%过硫酸铵溶液
称取0.05g过硫酸铵,用蒸馏水定容至5.0mL,配制后当天使用。5.2.11上槽缓冲液
称取4.63gTris,1.0gSDS,加入300mL蒸馏水,用硼酸调至pH8.6,加水定容至1000mL。5.2.12下槽缓冲液
称取15.14gTris,加入200mL蒸馏水,用盐酸(1+1)调至pH9.2,加水定容至1000mL。5.2.13固定液
量取900mL乙醇,240mL冰乙酸,加人860mL蒸馏水。每次固定时取150mL固定液,加人75uL36%甲醛溶液。
5.2.1445%乙醇溶液
量取900mL乙醇,加人1100mL蒸馏水。5.2.15硫代硫酸钠溶液
称取0.10g硫代硫酸钠,加水500mL,配制后当天使用。5.2.16硝酸银溶液
称取0.60g硝酸银,加入225uL36%甲醛溶液,加水300mL,配制后当天使用。5.2.17碳酸钠溶液
称取18.0g碳酸钠,加水至300mL。5.2.18显影液
取硫代硫酸钠溶液6mL,加入150μL36%甲醛溶液和294mL碳酸钠溶液,显影前配制。5.2.19低分子量标准蛋白质溶液(40000~100000道尔顿)。5.3仪器设备
5.3.1垂直平板电泳系统。
SN/T1048-2002
5.3.2台式离心机最高转速16000r/min。5.3.3离心管通常使用1.5ml聚丙烯塑料离心管。5.3.4凝胶成像系统。
5.3.5水浴锅。
5.3.6微量加样器:0.5μ~2.5,2μL~20μl,10μ~100μ,200l1000L。5.4试验方法
5.4.1大麦醇溶蛋白质的提取
5.4.1.1取颗粒饱满、外观、色泽、气味正常的单粒大麦,将麦粒用滤纸包裹住,压碎麦粒至粉末状。5.4.1.2将粉碎的麦粒完全移入1.5mL的离心管内。5.4.1.3向离心管内加人500L提取溶液,振荡2min,在60C水浴中加热30min,8800r/min离心10min。
5.4.1.4取50μL的上清液于1.0mL的离心管内,同时加人含有乙烯吡啶的缓冲丙醇溶液,振荡1min,在60C水浴中加热15min。5.4.1.5加人100uL含有溴酚蓝的样品缓冲液,振荡1min。抽提液在室温下可保存2d~3d。5.4.2制备分离胶和浓缩胶
5.4.2.1制备分离胶
根据电泳平板的大小确定灌胶量,各种溶液的用量可按下列比例进行调整。取9.60mL25%丙烯酰胺溶液,7.18mL重蒸馏水,3.00mL分离胶缓冲液,抽气2min,加人24uLTEMED,最后加入224uL1%过硫酸铵溶液。将以上溶液充分混匀后迅速灌注到制胶模板中,灌注的分离胶溶液高度以距插入的梳子齿下方1cm处为宜,用双蒸水将分离胶溶液表面铺满,聚合1h。倒出分离胶表面的重蒸馏水,沥干;加人少量的浓缩胶缓冲液清洗分离胶表面,沥干。5.4.2.2制备浓缩胶
取2.40mL25%丙烯酰胺溶液,6.96mL重蒸馏水,400μL浓缩胶缓冲液,抽气2min,加人15μlTEMED和240μL1%过硫酸铵溶液,将以上溶液充分混匀。将样品梳插人模板中,将充分混勾的浓缩胶溶液加人分离胶上部的模板中,浓缩胶溶液聚合45min。5.4.3加样
待浓缩胶溶液聚合后,垂直向上移去样品梳,并用上槽缓冲液冲洗。分别向上槽和下槽中加入上槽缓冲液和下槽缓冲液。
用微量加样器加入低分子量标准蛋白质溶液,作为蛋白质的分子量标记;加人1.0大麦标准样品的提取液,作为对照。加1.0uL待测大麦样品提取液进行测试分析。靠近最旁边的两侧齿槽不加样品,以避免产生变形的蛋白条带。注:不同型号的电泳槽,所需加入的大麦醇溶蛋白的量有所不同,可通过试验确定最适加样量。5.4.4电泳
使用带有水浴的电泳槽进行电泳,水浴温度维持在20C左右,注意掌握电流、电压和电泳时间,不同型号的电泳仪所需的电压、电流和电泳时间不同,一般以每片凝胶90mA的恒定电流进行电泳,根据溴酚蓝的迁移来决定电泳时间。5.4.5电泳凝胶的固定与染色
5.4.5.1将电泳凝胶用固定液固定至少1h,用45%乙醇溶液洗2次,每次15min。用硫代硫酸钠溶液预处理1min。用蒸馏水洗3次,每次20s。5.4.5.2用硫酸银溶液浸泡15min,用蒸馏水洗2次,每次20s。用显影液显影约2min。用水洗2次,每次2min。
5.4.5.3用固定液浸泡10min,停止显影反应,将胶片储藏在45%乙醇溶液中。3
以上各操作均在脱色摇床上进行。SN/T1048—2002
5.4.6电泳图谱记录
将储于45%乙醇溶液中的电泳凝胶片,移入蒸馏水中,待凝胶片扩张至正常大小后,用凝胶成像系统或照相机记录电泳结果。
6结果处理与分析
6.1已知品种的鉴定
如果需鉴定已知品种名的大麦,则将该大麦的标准品种与待鉴定的大麦一起进行电泳测试分析。若电泳图谱完全一致,则待测品种即为该品种,反之,待测品种就不是该品种。如果没有标准品种作为对照,则采用6.2的方法进行鉴定(几个加拿大大麦品种的SDS-PAGE图谱见附录A)。6.2未知品种的鉴定
如果需鉴定未知品种名的大麦,则将待鉴定大麦的电泳图谱与所收集的大麦标准谱电泳图谱进行比较,若待测样品的电泳图谱与某一品种相一致,则待测品种即为该品种。97400道尔顿
66200道尔顿
43000道尔顿
SN/T1048—2002
附录A
(提示的附录)
几个大麦品种的SDS-PAGE图谱
1-Argyle;2-Klages;3--Manley:4--Stein;5—B1215:6—Harrington;7-ACOxbow图A1几个大麦品种的SDS-PAGE图谱5
SN/T1048-2002
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
进出口粮食、饲料
大麦品种鉴定蛋白质电泳分析法SN/T1048—2002
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码:100045
电话:6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16印张3/4字数12千字2002年5月第版2002年5月第一次印刷印数1-2000
书号:155066·2-14411定价10.00元网址bzcbs.com
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