SN/T 0684-2011.Determiantion of oxfendazole , fenbendazole , febantel and oxfendazole sulphone residues in meat and meat products for export-HPLC-MS/MS method.
1范围
SN/T 0684规定了出口肉及肉制品中奥芬哒唑、芬苯哒唑、苯硫胍和奥芬哒唑砜残留量的测定方法。
SN/T 0684适用于牛肉、猪肝、午餐肉中奥芬哒唑.芬苯哒唑、苯硫胍和奥芬哒唑砜残留量的检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样以盐酸乙腈混合溶液提取、正己烷脱脂离心,吸取部分下层溶液并调节pH值到8~9,再用乙酸乙酯提取，旋转蒸干后,用液相色谱-串联质谱仪测定,内标法定量。
4试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1正已烷。
4.2异丙醇。
4.3甲醇:色谱纯。
4.4乙腈:色谱纯。
4.5乙酸乙酯: 色谱纯。
4.625%氨水。
4.7， N,N-二甲基甲酰胺:色谱纯。
4.8 N,N-二甲基甲酰胺~甲醇混合溶液:水-N,N-二甲基甲酰胺~甲醇溶液(7+2+1,体积比)。
4.9浓盐酸:36%,密度为1.18g/L.

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T0684-2011
代替SN0684-1997
出口肉及肉制品中奥芬哒唑、芬苯哒唑、苯硫胍及奥芬哒唑残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法
Determiantion of oxfendazole,fenbendazole,febantel and oxfendazole sulphoneresidues in meat and meat productsfor export-HPLC-MS/MS method2011-09-09发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
数码防伪
2012-04-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。SN/T0684-—2011
本标准代替SN0684—1997《出口肉及肉制品中奥芬哒唑残留量检验方法》。与SN0684-1997相比主要修改如下：
对标准的名称进行了修改；
增加了检测项目，除奥芬哒唑外，还包括了芬苯哒唑、苯硫胍及奥芬哒唑砜；检测方法由液相色谱法改为液相色谱-质谱/质谱法；修改了奥芬哒唑检验结果的表述，奥芬哒唑、芬苯哒唑、苯硫胍的检验结果均以可能被氧化成奥芬哒唑矾的可萃取残留总量计。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：郭德华、邓晓军、韩丽、盛永刚、伊雄海、赵善贞。本标准于1997年首次发布，本次为第一次修订。1范围
出口肉及肉制品中奥芬哒唑、芬苯哒唑、苯硫胍及奥芬哒唑砜残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法
SN/T 0684—2011
本标准规定了出口肉及肉制品中奥芬哒唑、芬苯哒唑、苯硫胍和奥芬哒唑砜残留量的测定方法。本标准适用于牛肉、猪肝、午餐肉中奥芬哒唑、芬苯哒唑、苯硫胍和奥芬哒唑砜残留量的检测。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
试样以盐酸乙睛混合溶液提取、正已烷脱脂离心，吸取部分下层溶液并调节pH值到8～9，再用乙酸乙酯提取，旋转蒸干后，用液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。4试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1正已烷。
4.2异丙醇。
4.3甲醇：色谱纯。
4.4乙腈：色谱纯。
4.5乙酸乙酯：色谱纯。
4.625%氨水。
4.7N,N-二甲基甲酰胺：色谱纯。4.8N，N-二甲基甲酰胺-甲醇混合溶液：水-N，N-二甲基甲酰胺-甲醇溶液（7十2十1，体积比）。4.9浓盐酸：36%，密度为1.18g/L。4.101moL/L盐酸：量取浓盐酸83mL，加水稀释至1000mL4.110.75mol/L盐酸乙腈溶液：乙睛-1mol/L盐酸溶液（1+3，体积比）。4.12标准品：奥芬哒唑（oxfendazole，CAS号53716-50-0）芬苯哒唑（fenbendazole，CAS号43210-67-9），奥芬哒唑（oxfendazolesulphone，CAS号54029-20-8），苯硫（febantel，CAS号58306-30-2），纯度均大于99%。
4.13芬苯哒唑-d3标准品：甲酯位的3个H被D取代，纯度大于99%。标准储备液：分别称取适量奥芬哒唑、芬苯哒唑、奥芬哒唑、苯硫胍、芬苯哒唑-d3，用10mL4.14
SN/T0684—2011
N，N-二甲基甲酰胺溶解后，再用甲醇定为100μg/mL，0℃~4℃保存，有效期6个月。4.15标准工作溶液：根据需要，用乙腈-水溶液（2十8，体积比）将奥芬哒唑、芬苯哒唑、奥芬哒唑砜，苯硫胍标准储备液配成供液相色谱-申联质谱测定用的浓度为5μg/L、10μg/L.50μg/L、100μg/L200μg/L的混合标准工作溶液。其中同位素内标芬苯哒唑-d3浓度均为10.0μg/L，混合标准工作溶液使用前配制，
4.16滤膜：0.2μm，有机相。
5仪器和设备
液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源5.1
5.2均质器。
5.3pH计。免费标准下载网bzxz
涡旋振荡器。
离心机：4000r/min
旋转蒸发仪。
超声波水浴。
分析天平：感量0.1mg，0.01
试样制备与保存
制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化
可食部分约500g，用组织鹅碎机充分揭碎均勾，装入洁净容从所取全部样品中取出有代美
表性样品
器中，密封，并标明标记，于一187测定步骤
7.1提取和净化
陈存放
以下冷
称取5g样品（准确至0.01g）于50mL离心管中，加人10ml乙腈盐酸溶液（4.11）、3mL异丙醇和10mL正已烷，50ng芬苯哒唑-d3涡旋混匀J2min,14000r
/min速度高速匀质30s，以4000r/min离心5min，吸取下清液至50mL离心管中：再用10mL乙睛盐酸溶液按上述方法重复提取一次，合并下清液，并用水稀释到25mL，混勺。吸取上述溶液5mL到50mL离心管，用氨水调节pH值到8~9，再加入10mL乙酸乙酯，涡旋混匀3min，以4000r/min离心3min，收集上层溶液。再向离心管中加人1mL乙睛、5mL乙酸乙酯，重复上述操作。合并上层溶液，于40℃减压旋转蒸发至干。用1.0mLN，N-二甲基甲酰胺-甲醇混合溶液（4.8）溶解残渣，超声5min后过0.2μm滤膜，滤液供液相色谱-串联质谱测定。
7.2测定
7.2.1液相色谱-质谱/质谱条件
7.2.1.1色谱柱：SBCa柱，100mm×2.1mm（内径）,1.8μm或相当者。7.2.1.2流动相：A：0.1%甲酸水溶液，B：0.1%甲酸乙睛溶液：流速：0.3mL/min，梯度洗脱程序见表1。
梯度时间
柱温：35℃。
进样量：10μL
离子源：电喷雾ESI，正离子。
扫描方式：多反应监测MRM
其他参数条件参见附录
定量测定
梯度洗脱程序
流动相A
根据试样中被测物的药物含量，选取响应SN/T0684—2011
流动相B
准作液进行分析。标准工作液和待测液中药物的响应值均应在仪器线性响应范围内。如果含量超过标准曲线范围，应用乙睛-水（2十8）稀释到合适浓度后分析。在上述色谱条件下的待测药物的参考保留时间分别为：奥芬哒唑4.4min、奥芬哒唑4.9min、芬苯哒唑5.5min、苯硫肌7.2.3定性测定
omin，标准溶液的多反应监测
色图参见附录C
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工
是用相
品一致，定性离子对的相对丰度于最强离子
溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2表2
相对离子丰度
允许的相对偏差
7.3空白试验
作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准度的强度百分比表示，应当与浓度相当标准工作规定的范围，则可
判断样品中存在对应的被测物。离子丰度的最大允许偏差
定性确证时相对
>20%~50%
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。8计算结果与表述
结果计算
>10%~20%
用色谱数据处理机或按式（1）计算样品中待测药物残留量，计算结果需扣除空白值。≤10%
SN/T0684—2011
式中：
8.2表述
A,XAXmX1000
样品中待测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）：标准工作溶液中药物的浓度，单位为微克每升（rg/L)；样液中药物的峰面积；
标准工作溶液中内标物的峰面积；样液中内标物的峰面积：
标准工作溶液中药物的峰面积；试样质量，单位为克（g）。
样品中奥芬哒唑、芬苯哒唑和苯硫胍的残留量均以可能被氧化成奥芬哒唑砜的可萃取残留总量计，可提取的奥芬哒唑砜残留量=样品中苯硫胍残留量×0.74+样品中奥芬哒唑残留量×1.05十样品中芬苯哒唑残留量×1.11十样品中奥芬哒唑砜残留量。9
测定低限、回收率
测定低限（LOQ）
奥芬哒唑、芬苯哒唑、奥芬哒唑、苯硫胍测定低限均为10μg/kg。9.2回收率
添加回收率实验数据参见附录B。附录A
（资料性附录）
Agilent6410B液相色谱-四级杆串联质谱仪参数1)Agilent6410B液相色谱-四级杆串联质谱仪参数如下：a)
电离源：电喷雾正离子（ESI+）：离子源喷雾电源（IS）：3500V；离子源温度：350℃；
气流速（Gasflow）：11L/min：雾化气（Nebulizer）：276kPa(40psi)；电子倍增器电压（DeltaEMV)：600V：检测方法：多反应监测（MRM）。表A.1
多反应监测参数表
组分名称
奥芬哒唑
芬萃哒唑
奥芬哒唑
芬举哒唑-d3（内标）
母离子m/z
注：带”*”为定量离子对。
子离子
去簇电压
碰撞能量
SN/T0684—2011
色谐保留时间t
1）非商业性声明：附录A所列参数是在Agilent6410B质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器。5
SN/T0684—2011
午餐肉
附录B
（资料性附录）
添加回收率实验数据
奥芬哒唑砜
奥芬哒唑
芬苯哒唑
奥芬哒唑
苯硫胍
奥芬哒唑矾
添加回收率实验数据
添加浓度
10 μg/kg
100 g/kg
10pg/kg
50pg/kg
10.μg/kg
50ug/ke
100pμg/kg
10ng/kg
50μg/kg
1004g/
10 pμg/kg
100pμg
100ag/kg
lopg/k
100μg/kg
10μg/kg
50μg/kg
100μg/kg
10μg/kg
50μg/kg
100μg/kg
10μg/kg
50pg/kg
100μg/kg
回收率范围
79.0%96.0%
91.4%~101.6%
81.7%~102.5%
81.9%~107.0%
74.8%~98.2%
78.5%~102.5%
75.6%~106.0%
75.0%~99.0%
77.2%~94.5%
78.4%~102.0%
74.8%~99.2%
77.3%~98.7%
82.3%~102.0%
87.8%~105.2%
88.6%~103.6%
76.7~104.0%
76.8%~98.6%
77.5%~95.8%
78.8%~106.0%
73.2%~100.6%
75.7%~101.6%
75.4%~97.8%
75.0%~95.0%
76.3%~101.4%
81.9%~107.0%
85.8%~104.6%
83.7%~106.5%
78.8%~102.0%
76.8%~99.2%
83.6%~108.57%
午餐肉
芬苯哒唑
奥芬哒唑
表B.1（续）
添加浓度
10μg/kg
50μg/kg
100μg/kg
10μg/kg
50μg/kg
100μg/kg
SN/T 0684—2011
回收率范围
76.2%~98.6%
80.6%~99.2%
77.7%~101.4%
75.8%~105.0%
75.0%~100.6%
78.4%~104.2%
SN/T0684—2011
Foreword
ThisstandardwasdraftedbyGB/T1.1-2009The method of determination of this standard was an amendment of sN 0684-1997Thedeterminationmethodwas changedtoHPLC-MS/MSThe expression of result was changed to the extractable residue content of oxfendazole sulphone,which is the oxidization product of the oxfendazolefenbendazole,febantel.This standard was proposed by and is under the charged of the Certification and Accreditation Ad-ministration of thePeople's Republicof China.This standard was drafted by Shanghai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People'sRepublic of China.
The standard was mainly drafted by Guo Dehua,Deng Xiaojun,Han Li,Sheng Yonggang,Yi XionghaiZhao Shanzhen.
This standard was a professional standard for entry-exit inspection and quarantine promulgated forthe first time in 1997,and this version is the first amendment.10
SN/T0684—2011
Determinationofoxfendazole,fenbenzazole,febantelandoxfendazolesulphoneresiduesinmeatandmeatproductsforexportHPLC-MS/MSmethodScope
The standard specifies the methods of sample preparation and determination of oxfendazole,fenben-dazole,febantel and oxfendazole sulphone in foodstuffs of meat and meat products.This standard is applicable to determination of oxfendazole,fenbendazole,febantel and oxfendazolesulphone residues inbeef.pork liverand luncheon meat.2Normativereferences
The following documents are necessary for this standard. For dated references,only dated editionsshall apply to this standard. For undated references,the latest edition of the normative document Cin-cludingsubsequentamendments)referredto applies.GB/T 6682 Water for analytical laboratory use-Specification and test methods3Principle
The oxfendazole,fenbendazolefebantel and oxfendazole sulphone residues derived from samples areextracted by the mixture of Hcl and acetonitrile,and degreased by n-hexane. After centrifuging,adjust the pH value of lower supernatant to 8~9,and then extract with ethyl acetate. The anyalytesare determined by HPLC-MS/MS,and quantified by isotope internal standard method.Reagentsandmaterials
Unless otherwise specified,all the reagent used should be analytical grade,water is deionized waterspecifiedby the standard GB/T6682.4.1n-hexane:HPLCgrade.
4.2Isopropanol:HPLCgrade.
SN/T0684—2011
4.3Methanol:HPLCgrade.
4.4 Acetonitrile.HPLC grade.4.5 Ethyl acetate:HPLC grade.4.625%ammonia.
4.7N,N'-dimethylformamide:HPLC grade.4.8H,o-NN'-dimethylformamidemethanol.7+2+1.V/V)4.9HCl36%densityof1.18g/L
4.101mol/LHCl.Mix83mL36%HClwithrwatertafinalvolumeof1000mL.4.11 o.75mol/LHCl-acetonitrileAcetonitrile-1mo/LHCl(1+3,V/V)4.12Standards.Oxfendazole.(cAs No..53716-50-0).Fenbendazole(CASNo.：43210-67-9),Oxfen
dazolesulphone,(CAsNo.:54029-20-8),Febantel(CASNo.:58306-30-2).Purity>99%4.13Fenbendazole-d3:Purity>994.14 Stock standard solution:elyweighappr
Accurate
oxfendazole sulphone and febantel.andformamide individually,and then dilutefenbendazole-
ppriate standard oxfendazole,fenbendazole3.thendissolve
them in 10mL N,N'-dimethyl-
mLwithmethanolandi theconcerntrationofthesesolu-o100
tions is 100 ug/mL.Store them refr geratTOC
4.15Working solutions.Torequireasuseful.ndazole,fenbendazole,oxfendazolesulphonealc.validforismonths.
xanddilutethe
e stock standard solutions of oxfen-febantel wit
acetonitrile-water (2+8)to five con-centration levels 5 μg/L,10 μg/L,50 μg/L,100 μg/L,200 μg/L and the concentration of internalstandard of fenbendazole-d3 is 1o.O μg/L, And the mixed standard working solutions are prepared be-fore use.
4.16Organicphasefilm:0.2um.
5Apparatus and equipment
5.1Liquidchromatograhycombinedwith electrosprayionizationmassspectrometry.12
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