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SN/T 3427-2012

基本信息

标准号: SN/T 3427-2012

中文名称:山茶花腐病菌检疫鉴定方法

标准类别:商检行业标准(SN)

标准状态:现行

出版语种:简体中文

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相关标签: 病菌 检疫 鉴定 方法

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标准简介

SN/T 3427-2012.Detection and identification of Ciborinia camelliae Kohn.
1范围
SN/T 3427规定了山茶花腐病菌的检疫和鉴定方法。
SN/T 3427适用于山茶(Camellia spp. )上山茶花腐病菌(Ciborinia camelliae Kohn) 的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T1157进出境植物苗木检疫规程
3原理
3.1分类地位
学名:Ciborinia camelliae L. M. Kohn 1979
异名:Sclerotinia camelliae Hara 1919
英文名:Camellia flower blight
中文名:山茶花腐病菌。异名:山茶菌核病菌。
山茶花腐病菌属真菌界(Fungi),子囊菌门Ascomycota),子囊\菌纲( Ascomycetes),柔膜菌目(Helotiales) ,核盘菌科( Sclerotinfaceae),叶杯菌属(Cibgriia)。山茶花腐病菌通常只侵染山茶属(Camellia spp.)植物的花。地理分布和寄主参见附录A。

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标准内容

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T34272012
山茶花腐病菌检疫鉴定方法
Detection and identification of Ciborinia camelliae Kohn2012-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2013-07-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T3427-2012
本标准起草单位:中华人民共和国宁波出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本标准主要起草人:张建成、张慧丽、郑炜、杨翠云、厉艳、封立平、陈先锋。1范围
山茶花腐病菌检疫鉴定方法
本标准规定了山茶花腐病菌的检疫和鉴定方法。SN/T3427—2012
本标准适用于山茶(Camelliaspp.)上山茶花腐病菌(CiboriniacamelliaeKohn)的检疫鉴定。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T1157进出境植物苗木检疫规程3原理
3.1分类地位
学名:CiboriniacamelliaeL.M.Kohn1979异名:Sclerotinia camelliae Hara1919英文名:Camelliaflowerblight中文名:山茶花腐病菌。异名:山茶菌核病菌。山茶花腐病菌属真菌界(Fungi),子囊菌门(Ascomycota),子囊菌纲(Ascomycetes),柔膜菌目(Helotiales),核盘菌科(Sclerotiniaceae),叶杯菌属(Ciborinia)。(Camellia spp.)植物的花。地理分布和寄主参见附录3.2检疫鉴定依据
山茶花腐病菌通常只侵染山茶属以山茶花腐病菌在寄主植物上的症状特征以及菌核、产抱瓶梗和小型分生孢子的形态特征为鉴定依据。
4仪器设备
冰箱、解剖镜(最低10×)、生物显微镜(40X~800X×)、恒温光照培养箱、高压蒸汽灭菌锅、接种针、镊子、酒精灯、玻璃盒或塑料盒、纸巾或滤纸、喷雾器、培养血(直径90mm~100mm)、手术剪、手术刀、标签、载玻片、盖玻片等。
5试剂和培养基
70%(体积分数)乙醇、次氯酸钠、纯乳酸(可添加0.5%甲基蓝)、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)。6抽样
口岸查验进境山茶属植物时,按照SN/T1157对山茶属苗木进行抽样与取样。1
SN/T3427—2012
7检验方法
7.1现场检验
重点检查样品的花,观察样品的花是否有符合8.1疑似症状特征,采集那些变褐、变干或任何可疑症状的花,花尽可能的多(至少5朵)。进一步作实验室检验。标注品名、数量、生产国及取样地点、取样人和取样日期等样品信息。
7.2实验室检验
7.2.1寄主病原物观察
观察花瓣上是否有病斑、菌核、分生孢子座,花基部是否形成白色环状菌丝体。7.2.2显微观察
潮湿时,花瓣上可产生褐色至黑色有光泽的液滴。解镜下挑取黑色液滴,以乳酸(可添加0.5%甲基蓝)为载浮剂,生物显微镜下(40×~800×)观察产孢瓶梗和分生孢子座。7.2.3保湿培养
选取无褐变或初侵染未腐烂的花和花瓣,根据样品的大小选择合适的培养皿或塑料盒,内置一层灭菌滤纸,滤纸上放置灭菌的毛巾或纸巾,加入无菌水,放人恒温恒湿光照培养箱中,22℃土3℃,12h光照培养,培养3d~4d后在解剖镜下观察,按照7.2.2中的描述挑取子实体,制片后在显微镜下观察。如果没有变化,继续保湿培养,并定期进行观察,培养3周仍无变化,则停止培养,植物材料经高压蒸汽灭菌处理。
7.2.4分离培养
取感病花瓣病健交界处组织数块,用1%NaOCI溶液表面消毒1min,无菌水冲洗3次,置于PDA平板上,于20℃~25℃、12h光照下培养。如无新感病组织可用,可用其他部位如花瓣基部的白色菌丝环或菌核代替花瓣分离。待菌落出现后观察菌落的形态、颜色、生长速率及子实体等培养性状,显微镜检分生孢子座、产孢细胞、分生孢子的形态特征,将疑似山茶花腐病菌的菌株转到新鲜PDA平板上纯化,保存备用。
8鉴定特征
8.1危害症状
主要症状是花瓣变褐和花坏死。首先在花瓣的基部,出现棕色小斑点,斑点逐步扩展,最后向上蔓延至整个花瓣(大约每天1cm),边缘腐烂。严重时,花维管束变黑,完全坏死,干腐,脱落(参见图B.1a和图B.1b)。但花的结构保持良好,即使整个枯萎的花经手挤压后花瓣不会脱落。环境湿润时,花瓣基部或中心产生褐色至黑色有光泽的小“液滴”,直径1mm,在显微镜下,可以看到产生大量分生孢子梗和链状分生孢子的分生孢子座。在长期受侵染的植株上,分生孢子座汇集形成粘性黑斑(参见图B.1c)。分生孢子座的出现可被用作确定性的诊断特征。在花受侵染的后期,将花倒置并移除尊片,可见围绕花瓣基部出现一个白色至灰白色毛毯状近似环状的不育菌丝,乍看像寄主的组织(参见图B.1d)。该环状菌丝体是该病害的一个典型特征。2
8.2菌核
SN/T3427—2012
感染后2周~4周,菌核开始在花瓣基部即花萼处形成,最初由一层密集的灰白色菌丝覆盖。成熟的菌核,黑色坚固,12mm×10mm×2mm,盘状、花瓣状,形状大小近似葡萄干。用手指揉搓花瓣基部,可以检测菌核为坚硬平坦的结构。菌核会在落叶堆中保持生长,花腐烂后的残余物常常与菌核粘附在一起呈环状。菌核在冬季结束时产生子囊孢子,子囊孢子侵染新花。8.3病菌的培养性状
菌落为白色毛毯状,表面菌丝以辐射状生长(参见图C.1),18℃下培养每周生长速率达到42mm。PDA培养基上培养1周后产生的分生孢子座,子座黑色、湿润、直径1mm,4周后形成水溶性黑色粘液。4周后,有些菌株可形成盘状凸起的菌核,直径5mm8mm,通常以环状出现于毯状菌丝层之下的琼脂表面。
8.4无性态
分生孢子座由膨大的中心细胞和在其上分枝的深褐色圆简状细胞簇生组成,圆简状细胞上产生产孢梗。产孢梗瓶梗状,透明至褐色,长6um,宽2μm~2.5um,每个带有突起的、深杯形囊领,此处产生小型分生孢子。小型分生孢子褐色,圆形至卵形,直径2.5μm~4μm,单核,包含一个大油球。有些孢子连接成短链,断裂时可见一个微小的基部附属物,在与前端孢子的连接处通常带有2条细毛。如果孢子保持链状,附属物随孢子的成熟而延长(参见图C.2)。8.5有性态
春季,菌核在土壤中萌发产生子囊盘,但子囊盘不作为鉴定的必要特征。子囊盘盘状,直径5mm~20mm,具柄,宽1mm~2mm,根据菌核在土壤中深度不同,长2mm~100mm。柄和盘表面具粉状菌绒,幼时米色至淡肉桂色,老熟变深。子囊盘最初为酒杯形,老熟变平坦。子囊含8个孢子,圆柱形,(120μm145um)×(6μm~10.5μm),子囊孢子倾斜锯齿状排列,透明,单胞,卵形至倒卵形,有油滴状斑点,(7.5μm12.5μm)×(4μm~6μm)(参见图C.3)。侧丝丝状,长不超过子囊,基部1μm~1.5μm宽,顶部稍膨胀。
9结果评定
如检出菌核,为害症状、病部特征符合8.1鉴定特征,可直接判定为山茶花腐病菌。如未检出菌核,病菌的培养性状和无性态特征符合8.3~8.4鉴定特征,判定为山茶花腐病菌。鉴定时,注意与引起山茶花腐烂的其他病原菌的区别(参见附录D)。10病材料的保存
带有环状菌丝体,分生孢子座和菌核的花朵,应妥善保存。山茶花腐病菌(Ciboriniacamelliae)纯分离物要标注菌株来源、寄主、分离时间、鉴定人,菌株在含20%甘油的冻存管中于80℃保存,或将菌株转接在PDA斜面上培养,待菌丝体张满斜面后,置于4℃下保存,并定期(180d)转管。保存期满后,需经灭菌处理。
SN/T3427-2012
A.1地理分布
亚洲:日本。
大洋洲:新西兰。
欧洲英国、意大利。
附录A
(资料性附录)
山茶花腐病菌的地理分布和寄主美洲:美国(加利福尼亚州、北卡罗来纳州、佛罗里达州、佐治亚州、路易斯安那州、俄勒冈州、南卡罗来纳州、德克萨斯州、乔治亚焰)A.2病菌的寄主
山茶花腐病菌通常只侵染茶(Camelnaspp.)植物的花,主要包括山茶花(Camelliajaponica)、茶梅(Camelliasasangua)和其他山茶属(Camellia spp.)观花植物。说明:
附录B
(资料性附录)
山茶花腐病菌为害特征图
一花瓣变褐:受侵染后,先在花瓣的基部出现棕色小斑点,斑点逐步扩展,最后至整个花;b花坏死:花瓣的肋变黑,干腐,落花一花瓣上产生的分生孢子座:
d-白色环状菌丝体;
花瓣基部形成菌核。
注:引自LNPV-UMAF,2004。
图B.1花受害特征图
SN/T3427—2012
SN/T3427—2012
说明:
附录C
(资料性附录)
山茶花腐病菌培养性状和显微形态特征图在PDA培养基上的培养性状
a--—分生孢子座和产孢瓶梗(箭头示骤领):一小型分生孢子(箭头示基部附属物)。注:引自Kohn&Nagasawa,1984。图C.2产孢瓶梗和分生孢子座(10μm)6
说明:
a一菌核上产生的子毫盘(1cm)b-—子囊和子囊孢子(10μm)。
注:引自Kohn&Nagasawa,1984。图C.3子囊盘及子囊孢子
SN/T3427—2012
SN/T3427—2012
有性态
无性态
引起病害
感病花瓣表现
病组织上的菌丝
培养性状
附录D
(资料性附录)
引起山茶花腐的几种病原菌的主要区别引起山茶花腐的几种病原菌的主要区别表D.1
灰葡萄孢
Botryotinia fuckeliand
Botrytis cimerea
引起山茶花的腐烂
通常广泛并不规则地侵染花瓣,花瓣易碎,并提前凋落
菌丝体较粗,白色,通常因为带有大量分生孢子和分生孢子梗
而呈灰色
菌核产生在寄主表面,通常较
小,不局限于花基部产生,否会与花的组织结合
偶尔会产生透明的小型分生
不产生
核盘菌
Sclerotinia sclerotiorum
引起山茶花腐烂
花瓣易碎,并提前调落www.bzxz.net
菌丝体白色或微灰色,形态规律(有时簇状或团状),通常比
C.camelliae毯状的菌丝体茂盛
菌核较大较圆不平坦,且不会
在自然情况下与寄主组织结合
分生孢子是透明的,非棕色
依附于明显单独的菌核上从不
形成环状
山茶花腐病菌
Ciborinia cu melliae
Sclerotinia camelliae
引起山茶花腐病
先侵染基部再延伸至整个
花瓣。病花结构保持良好,
在操搓情况下也能保持
感架的植株花瓣基部周围
生长有白色毯状紧密的菌
丝,无孢子
菌核扁平葡萄干状,较大,
常联合成环状,可以与寄主
组织结合
分生孢子棕色,链状。产孢
瓶梗顶端具囊领
有时生长在环状的菌核上
参考文献
SN/T3427—2012
[1]OEPP/EPPO.Diagnostic protocols for regulated pests Ciboriniacamelliae[J].BulletinOEPP/EPPOBulletin.2003,33:257-264.[2] LNPV.Vegetal:camelia(Camellia spp.),detection de Ciborinia camelliae sur fleurs par ob-servation macroscopique ou observation microscopique ou mise en chambre humide et observationmicrosc opique[EB/OLJ, http://agriculture. gouv. fr/IMG/pdf/ML0519a_Ciborinia_camelliae. pdf.2010-05-25/2010-10-15.
[3]Kohn LM,Nagasawa E.A taxonomic reassessment of Sclerotinia camelliae Hara(-Ciborinia camelliae Kohn), with observations on flower blight of camellia in JapanJJ.TransactionsoftheMycologicalSocietyof Japan,1984,25:149-161.[4JTaylorCH,LongPG.Review of literatureon Camellia flowerblight caused by Ciboriniacamelliae[J].NewZealand journal of CropandHorticultural Science,2000,28:123-138.SN/T3427-2012
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
山茶花腐病菌检疫鉴定方法
SN/T3427—2012
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)总编室:(010)64275323
网址spc.net.cn
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16印张1字数20千字2013年7月第一版2013年7月第一次印刷印数1-1600
书号:155066·2-25277
定价18.00元
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