SN/T 3425—2012 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 菊花花枯病菌检疫鉴定方法 Detection and Identification of Didymella ligulicola (K. F. Baker, Dimock & L. H. Davis) von Arx 2012-12-12发布 2013-07-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、浙江大学、中华人民共和国杭州出入境检验检疫局、中华人民共和国舟山出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：陈吴健、张明哲、帅江冰、楼兵干、吴蓉、吴志毅、杨赛军、林晓佳。 1 范围 菊花花枯病菌检疫鉴定方法。 本标准规定了植物检疫中菊花花枯病病菌 Didymella ligulicola（K. F. Baker，Dimock & L. H. Davis）von Arx 的检疫鉴定方法。 本标准适用于来自所有菊花花枯病菌发生国家或地区的菊花切花、植株中菊花花枯病病菌的检疫鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 SN/T 1157 进出境植物苗木检疫规程 SN/T 1386 进出境切花检疫规程 SN/T 1538.1 培养基制备指南 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则 3 原理 3.1 分类地位 英文名：Ray (flower) blight of chrysanthemum。 学名：Didymella ligulicola（K. F. Baker，Dimock & L. H. Davis）von Arx。 异名： Didymella chrysanthemi（Tassi）Garibaldi & Gullino； Mycosphaerella ligulicola Baker，Dimock & Davis。 无性型：Ascochyta chrysanthemi F. L. Stevens。 菊花花枯病菌属于真菌界（Fungi），子囊菌亚门（Ascomycota）、腔菌纲（Loculoascomycetes）、座囊菌目（Dothideales）、亚隔孢壳属（Didymella）。其他信息参见附录A。 3.2 检疫鉴定依据 根据菊花花枯病菌在寄主上的危害症状及其形态学特性作为鉴定依据（参见附录B、附录C、附录D）。 3.3 近似种 形态学特征与甜瓜蔓枯病菌 Didymella bryoniae 较为近似（参见附录E）。 4 设备用具 4.1 仪器设备 体视显微镜、生物显微镜、电子天平（感量0.01 g）、高压灭菌器、超净工作台、生物培养箱（带荧光灯）。 4.2 实验用具 标签、定性滤纸、样品袋、保鲜袋、手持放大镜、镊子、解剖刀、酒精灯、接种针、培养皿（直径9.0 cm）、烧杯（500 mL）、量筒（500 mL）、三角瓶（250 mL）、载玻片、盖玻片、微量移液器（可调范围2.5 μL～1000 μL）及相应移液器枪头（10 μL、100 μL、1000 μL）。 5 试剂和培养基 5.1 试剂 1% NaClO溶液、无水乙醇、70%乙醇、无菌双蒸水。 5.2 培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）（参见附录D）。配制培养基时应按照SN/T 1538.1的要求执行。 6 抽样 口岸查验进境菊花时，按照SN/T 1386、SN/T 1157对来自疫区的菊花切花和植株进行抽样与取样。 7 检验方法 7.1 现场检测 在光线充足的场所，采用肉眼或借助放大镜仔细检查菊花花瓣上是否有斑点、是否出现“半边花”；叶片是否扭曲或出现不规则黑褐色叶斑；病部是否有黑色针头状分生孢子器。 将具有上述症状的可疑切花或植株挑出，进一步进行实验室检验，并标注品名、数量、生产国、取样地点、取样人及取样日期等样品信息。 7.2 实验室检测 分离培养性状和形态学观察：切取病健交界处组织数块（约5 mm×5 mm），用1% NaClO溶液进行表面消毒3 min，无菌水冲洗3次后置于PDA平板上，在20 ℃～25 ℃黑暗条件下培养。 待菌落出现后，观察菌落的形态、颜色、大小及子实体等培养性状；显微镜下检查分生孢子的形态特征。将疑似分离物转接至PDA平板进行纯化培养，并保存备用。 8 鉴定特征 8.1 症状特征 菊花植株的所有部位，包括根部，均可被侵染，但花和插条最易受害。插条通常由顶芽首先被侵染，随后向下扩展至整株。 未开放的花蕾、苞片和茎组织受侵染后颜色变暗。叶片上形成不规则黑褐色叶斑，宽约2 cm～3 cm。茎部症状通常出现在靠近病叶、有伤口或插条基部等部位。 花部症状表现为花瓣出现斑点，初期通常仅侵染花冠的一侧。