SN/T 3425-2012
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标准简介
SN/T 3425-2012.Detection and identification of Did ymella ligulicola (K.F. Baker,Dimock &
L.H.Davis)von Arx.
1范围
SN/T 3425规定了植物检疫中菊花花枯病病菌Didymella ligulicola (K. F. Baker, Dimock&L. H.Davis) von Arx的检疫鉴定方法。
SN/T 3425适用于来自所有菊花花枯病菌发生国家或地区菊花切花、植株中的菊花花枯病病菌的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T 1157进出境植物苗木检疫规程
SN/T 1386 进出境切花检疫规程
SN/T1538.1培养基制备指南第1部分:实验室培养基制备质量保证通则
3原理
3.1分类地位
英文名: Ray( flower) blight of chrysanthemum
学名:Didymella ligulicola (K. F. Baker ,Dimock&.L. H. Davis)von Arx
异名:Didymella chrysanthemi(Tassi)Garibaldi&.Gullino;Mycosphaerella ligulicola Baker,Dimock & Dauis
无性型:Ascochyta chrysanthemi F. L. Stevens
菊花花枯病菌属于真菌界Fungi,子囊菌亚门Ascomycota 、腔菌纲Loculoascomycetes. 座囊菌目Dothidealesc、亚隔孢壳属Didymella。其他信息参见附录A。
3.2 检疫鉴定依据
根据菊花花枯病菌在寄主上的为害症状.形态学特性作为鉴定依据(参见附录B.附录C、附录D)。
L.H.Davis)von Arx.
1范围
SN/T 3425规定了植物检疫中菊花花枯病病菌Didymella ligulicola (K. F. Baker, Dimock&L. H.Davis) von Arx的检疫鉴定方法。
SN/T 3425适用于来自所有菊花花枯病菌发生国家或地区菊花切花、植株中的菊花花枯病病菌的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T 1157进出境植物苗木检疫规程
SN/T 1386 进出境切花检疫规程
SN/T1538.1培养基制备指南第1部分:实验室培养基制备质量保证通则
3原理
3.1分类地位
英文名: Ray( flower) blight of chrysanthemum
学名:Didymella ligulicola (K. F. Baker ,Dimock&.L. H. Davis)von Arx
异名:Didymella chrysanthemi(Tassi)Garibaldi&.Gullino;Mycosphaerella ligulicola Baker,Dimock & Dauis
无性型:Ascochyta chrysanthemi F. L. Stevens
菊花花枯病菌属于真菌界Fungi,子囊菌亚门Ascomycota 、腔菌纲Loculoascomycetes. 座囊菌目Dothidealesc、亚隔孢壳属Didymella。其他信息参见附录A。
3.2 检疫鉴定依据
根据菊花花枯病菌在寄主上的为害症状.形态学特性作为鉴定依据(参见附录B.附录C、附录D)。
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3425—2012
菊花花枯病菌检疫鉴定方法
Detection and identification of Did ymella ligulicola (K. F. Baker,Dimock &L. H. Davis)von Arx
2012-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2013-07-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T3425—2012
本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、浙江大学、中华人民共和国杭州出入境检验检疫局、中华人民共和国舟山出人境检验检疫局。本标准主要起草人：陈吴健、张明哲、帅江冰、楼兵干、吴蓉、吴志毅、杨赛军、林晓佳。1范围
菊花花枯病菌检疫鉴定方法
SN/T3425—2012
本标准规定了植物检疫中菊花花枯病病菌DidymellaLigulicola（K.F.Baker，Dimock&L.HDavis）vonArx的检疫鉴定方法。本标准适用于来自所有菊花花枯病菌发生国家或地区菊花切花、植株中的菊花花枯病病菌的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T1157进出境植物苗木检疫规程SN/T1386进出境切花检疫规程
SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则3原理
3.1分类地位
英文名：Ray(flower)blightofchrysanthemum学名：Didymellaligulicola(K.F.Baker,Dimock&L.H.Davis)vonArx异名:Didymella chrysanthemi（Tassi)Garibaldi &Gullino,Mycosphaerella ligulicola BakerDimock&Dauis
无性型：AscochytachrysanthemiF.L.Stevens菊花花枯病菌属于真菌界Fungi，子囊菌亚门Ascomycota、腔菌纲Loculoascomycetes、座囊菌目Dothidealesc.亚隔孢壳属Didymella。其他信息参见附录A。3.2检疫鉴定依据
根据菊花花枯病菌在寄主上的为害症状、形态学特性作为鉴定依据（参见附录B、附录C、附录D)。3.3近似种
形态学特征与甜瓜蔓枯病菌Didymellabryoniae较为近似（参见附录E）。4设备用具
仪器设备
体视显微镜，生物显微镜，电子天平（感量0.01g），高压灭菌器，超净工作台生物培养箱（带荧光灯）SN/T3425--2012
4.2实验用具
标签、定性滤纸、样品袋、保鲜袋、手持放大镜、镊子、解部刀、酒精灯、接种针、培养Ⅲ（直径：9.0cm）、烧杯（500mL）、量筒（500ml）、三角瓶（250mL）、载玻片、盖玻片、微量移液器（可调式范围：2.5μ1000μ）、移液器枪头（10μ100μ1000μ)。5试剂和培养基下载标准就来标准下载网
5.1试剂
1%NaCIO溶液、无水乙醇70乙醇、无菌双蒸水。5.2培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA)（参见附录D了。配制培养基时，按照SN/T1538.1的要求。6抽样
口岸查验进境菊花时，按照SN/T:386、SN7T1137对来自疫区的菊花切花、植株进行抽样与取样。
7检验方法
7.1现场检测
在光线充足的场所，肉眼或借助放木镜仔细检查菊花的花瓣上有无斑点、有无出现“半边花”；叶片有无扭曲或出现不规则黑褐色叶斑；病部是否有黑色纤头状分生孢于器，将有以上症状的可疑切花或植株挑出，进一步作实验室检验标注品名、数量、生产国及取样地点、取样人和取样日期等样品信息。7.2实验室检测
分离培养性状和形态学观察：联病健交界的织织数块（大小约/mm×5mm），用1%NaC1O）进行表面消毒3min，无菌水冲洗3次置于PDA平板上，于o℃～25℃黑暗下培养，待菌落出现后观察菌落的形态、颜色、大小及子实体等培养性状显微镜检分生孢子的形态特征，将与疑似分离物转到PDA平板上纯化，保存备用。
8鉴定特征
8.1症状特征
菊花植株的所有部分，包括根，都能被侵染，但是花和插条最容易被侵染。插条，通常是顶芽先被侵染，随后向下侵染整株植株。未开的花苞，苞片和茎组织颜色变暗。在叶片上，引起不规则的黑褐色叶斑，2cm～3cm宽。在茎上，症状通常出现在靠近病叶的、有伤口的或者插条基部等部位。花上的症状：侵染后，花瓣出现斑点，开始时只侵染花冠的一侧，表现为畸形（只有半边花）。在浅色的花瓣上呈红色斑点，在深色的花瓣上，呈褐色。随后侵染快速发展，被侵染的小花粘连在起，花冠完全腐烂。病菌向下侵染花梗，造成组织变黑变弱，引起花朵枯菱调谢。在田间病组织上产生大量针头状的分生孢子器，尤其花瓣上更多。初呈琥珀色，后成熟变黑色，很易发现。2
SN/T3425—2012
花和叶片的症状容易和灰葡萄孢引起的灰霉病相混淆，插条的腐烂症状很像灰葡萄孢或腐霉引起的症状，菊花花枯病引起的叶斑，边缘清晰，中间部位具特殊光泽。8.2病菌的培养性状
病原真菌在PDA培养基上，能在很广的温度范围内生长。15℃～27℃都能生长良好，最高温度是30℃，最适温度24℃，在6℃下还能生长。在室温下培养4d，菌落直径达2.7cm，菌丝密集，绒状。菌落下层后转橙红色，中心部分呈黑褐色。菌落边缘不整齐，越向中心菌丝层越紧密，絮状，分生孢子器就在中心区形成，形成最适温度为26℃；接种后25℃下3d，20℃下5d形成分生孢子器；子囊壳形成最适温度为20℃，培养7d可形成，24℃以上不形成。（参见图B.1）8.3病菌形态特征
分生孢子器，埋生于寄主表皮以下，用15倍放大镜观察可见，壁薄，球形，大小有两种：在花瓣上的小（72μm～180μm），聚生；在茎和叶上的大（111m～325m），散生。分生孢子以液滴状或短柱形渗出，无色，具油滴，无隔（10%～40%）或有隔（66%～90%）；通常1个隔，偶而多个隔：卵形至圆柱形，常呈不规则形：无隔孢子大小为（6μm>22μm）×（25um~8μm），多数为（8.5μm~13μm）×(3.5μm~5.5μm）；有隔孢子大小为（9μm23um）×（3μm6.5μm），多数为（13μm~15.5μm）×(4μm~5μm)。
成熟的子囊壳比分生孢子器更突出，接近寄主表皮，球形，直径96um224um，具由2～3层厚壁细胞组成黑褐色的外层，顶部有乳突状孔口空腔基部有聚集的拟薄壁组织，上面着生大量子囊，拟侧丝长，包埋全部子囊，并在子囊壳顶部聚集。子囊倒棍棒形基部明显收缩，看似有柄，（49um～81um）×（8μm～10μm）。每个子囊内含8个子囊孢子，无色到灰色，长椭圆形或纺锤形，双胞，上胞在隔膜上方膨大，下胞则较窄，尖锐，大小为（12m~16μm）×（4.u中~6μm）（参见图B.2）。8.4致病性实验
接种10d后，花和叶片即可形成典型的菊花花枯病症状，从病部可分离获得纯菌株，其菌落特征、分生孢子形态大小与供试接种菌株一致。9结果判定
根据菊花花枯病菌（D.ligulicola)的鉴定特征对病菌分离物进行综合判定，如病菌的症状学特征、形态学特征、致病性实验结果与第7章各项鉴定指标吻合，则可鉴定为菊花花枯病菌Didymellaligulicola(K.F.Baker,Dimock&.L.H.Davis)vonArx。10样品和资料的保存
10.1样品的保存
样品经标注菌株来源、寄主、分离时间、鉴定人后置于4℃冰箱保存；菊花花枯病菌（D.ligulicota）纯分离物标注后，菌株在含20%甘油的冻存管中于一80℃保存，或将菌株转接在PDA斜面上培养，待菌丝体长满斜面后，置于4℃下保存，并定期（180d)转管。对鉴定为菊花花枯病菌（D.ligulicola）的样品至少应保存6个月，以备复核谈判和仲裁，样品保存期满后，需经无害化处理。
SN/T3425—2012
2检验资料的保存
妥善保存检验资料，以备复验、谈判和仲裁。检验报告必须注明检验日期、方法、结果等，并有检验人签名；检验图片包括症状、病菌等。A.1分布
亚洲：日本（本州）、以色列。附录A
（资料性附录）
菊花花枯病菌的分布和寄主
SN/T3425—2012
欧洲：比利时、丹麦、芬兰、法国、德国、爱尔兰、以色列、意大利、卢森堡、摩尔多瓦、荷兰、挪威、罗马尼亚、英国、南斯拉夫。
大洋洲：新西兰、澳大利亚、巴布亚新几内亚。美洲：加拿大、美国、墨西哥。非洲：突尼斯、肯尼亚、马拉维、坦桑尼亚、津巴布韦。A.2寄主范围
主要侵害菊科植物Dendranthemaspp.，主要是D.morifolium。除侵染菊花外，人工接种试验表明还可侵染菊苣Cichoriumintybus、莴苣Lactuca satiua L.、洋蓟Gomphrena globosa、金光菊Rudbeckiahirta、百日草Zinniaelegans、向日葵Helianthusannuns、大丽菊Dahliapinnata等。SN/T3425--2012
说明：
附录B
（资料性附录）
菊花花枯病菌的形态特征图
图B.1菊花花枯病菌的PDA上菌落形态（25℃，15d)78
于囊及子囊孢子：
分生孢子。
880080
图B.2菊花花枯病菌的形态特征图（仿Sivinesan，A.1984）a）为害花症状
注：eppo.org。
附录C
（资料性附录）
菊花花枯病为害症状
图C.1菊花花枯病为害症状
SN/T3425-2012
b）为害茎秆症状
c）为害叶症状
SN/T3425—2012
附录D
（资料性附录）
马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA)的配制D.1马铃薯葡萄糖琼脂粉剂成分的每升含量马铃薯
葡萄糖
配制方法
称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水煮沸30min，用四层纱布过滤，滤液加人葡萄糖20g、琼脂18g，继续加热搅拌混匀，稍冷却后定容至1000mL，分装三角瓶，加塞、包扎，121℃高压灭菌20min。
分生孢子器
无隔分生孢子
有隔分生孢子
子囊孢子
附录E
（资料性附录）
D.ligulicola与D.bryoniae的形态学特征主要区别表E.1D.ligulicola与D.bryoniae的形态学特征主要区别D.ligulicola
72μm~180μm或
111μm~325μm
(6μm~22μm）×(2.5μm~8μm)(13μm~15.5μm)X(4μm5μm）
(49μm~81μm)×(8μm~10μm）(12μm~16μm)x(4μm~6μm)
主要侵害菊科植物Dendranthema spp.SN/T3425—2012
D.bryomiae
95μm~137.5μm
(5.3μm~10.5μm）×(2.8μm~5μm）(7.5μm~17μm)×(2.5μm~5.5μm）(27.9μm47.1μm）x(5.9μm9.9μm）(5.5μm~12.5μm）x(2μm~5μm）主要侵害哈密瓜、梨瓜、西葫芦、西瓜、籽西瓜等葫芦科植物
SN/T3425—2012
参考文献
[1JBlakeman,J.P.;Hadley,G.(1968) The pattern of asexual sporulation in Mycosphaerellaligulicola.Transactionsof theBritishMycological Society.5l.643-651.[2JBoerema,G.H.; Bollen, G.J.(1975) Conidiogenesis and conidial septation as differentiatingcriteria between Phoma and Ascochyta.Persoonia. 8,l11-144.[3]Boerema,G.H.;VanKesteren,H.A.(1974)[Some special fungal infections VI].Gewas.bescherming5.119-125.
[4] (Garibaldi,A.;Gullino,G.(1971)Brief notes on thepresence in Italy of ascochyta of chrys-anthemuml.AgricolturaItaliana.71.281-290.[5]Grouet,D.(1974)L'Ascpchvta du chrysantheme.Horticulture Franraise No.47,pp.3-9.[6]Hahn,W.,Schmatz,R.(19Bu Diagnosis and gontrol of Ascochyta disease of Chrysunuthem um].Nachrichtenblatt fur den Pflanzenschutz in der DDR.34.189-192[7] IMI (1993).Distribution Maps of Peunt DiseasesXo.406(edition3).CABInternationalWallingfordUK.
[8]McCoy,R.E.（1971）E
Cornell Unversity,Ithaca,USA.rfdemiology o
hrysanthemumAscochytablight.PhDThesis,[9]Nillsson,L.(1963)[Black rot(ascochyta rot)of chrysanthemumJ.Variskyddsnotiser.27,8-15.
[1o]Punithalingam,E.(1980)Didymella chrysanthemi-CMI Descriptions of Pathogenic Fungi andBacteriaNo.662.CABInternational,Wairnk et Davis) v. Arx as a pathogen[11]Sauthoff,W.(1963)[Difymelld ligulfcola(Baker,Dimodof chrysanthemum inGermany].P[12]Stevens,F.L.(1907)
ytopatholog
i/cheZeitschrift.48,240-250
The chrysdnthetnu
[13]S.J.Pethybridge,J.BSh
ligulicola frompyrethrumand chrysanthAndF
tralasian Plant Pathology33(2),173-18110
Botarical Gazette.44,241-258.bligh
ships among isolates of PhomaanditsdetectionbyPCR.Aus-
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菊花花枯病菌检疫鉴定方法
Detection and identification of Did ymella ligulicola (K. F. Baker,Dimock &L. H. Davis)von Arx
2012-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2013-07-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T3425—2012
本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、浙江大学、中华人民共和国杭州出入境检验检疫局、中华人民共和国舟山出人境检验检疫局。本标准主要起草人：陈吴健、张明哲、帅江冰、楼兵干、吴蓉、吴志毅、杨赛军、林晓佳。1范围
菊花花枯病菌检疫鉴定方法
SN/T3425—2012
本标准规定了植物检疫中菊花花枯病病菌DidymellaLigulicola（K.F.Baker，Dimock&L.HDavis）vonArx的检疫鉴定方法。本标准适用于来自所有菊花花枯病菌发生国家或地区菊花切花、植株中的菊花花枯病病菌的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T1157进出境植物苗木检疫规程SN/T1386进出境切花检疫规程
SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则3原理
3.1分类地位
英文名：Ray(flower)blightofchrysanthemum学名：Didymellaligulicola(K.F.Baker,Dimock&L.H.Davis)vonArx异名:Didymella chrysanthemi（Tassi)Garibaldi &Gullino,Mycosphaerella ligulicola BakerDimock&Dauis
无性型：AscochytachrysanthemiF.L.Stevens菊花花枯病菌属于真菌界Fungi，子囊菌亚门Ascomycota、腔菌纲Loculoascomycetes、座囊菌目Dothidealesc.亚隔孢壳属Didymella。其他信息参见附录A。3.2检疫鉴定依据
根据菊花花枯病菌在寄主上的为害症状、形态学特性作为鉴定依据（参见附录B、附录C、附录D)。3.3近似种
形态学特征与甜瓜蔓枯病菌Didymellabryoniae较为近似（参见附录E）。4设备用具
仪器设备
体视显微镜，生物显微镜，电子天平（感量0.01g），高压灭菌器，超净工作台生物培养箱（带荧光灯）SN/T3425--2012
4.2实验用具
标签、定性滤纸、样品袋、保鲜袋、手持放大镜、镊子、解部刀、酒精灯、接种针、培养Ⅲ（直径：9.0cm）、烧杯（500mL）、量筒（500ml）、三角瓶（250mL）、载玻片、盖玻片、微量移液器（可调式范围：2.5μ1000μ）、移液器枪头（10μ100μ1000μ)。5试剂和培养基下载标准就来标准下载网
5.1试剂
1%NaCIO溶液、无水乙醇70乙醇、无菌双蒸水。5.2培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA)（参见附录D了。配制培养基时，按照SN/T1538.1的要求。6抽样
口岸查验进境菊花时，按照SN/T:386、SN7T1137对来自疫区的菊花切花、植株进行抽样与取样。
7检验方法
7.1现场检测
在光线充足的场所，肉眼或借助放木镜仔细检查菊花的花瓣上有无斑点、有无出现“半边花”；叶片有无扭曲或出现不规则黑褐色叶斑；病部是否有黑色纤头状分生孢于器，将有以上症状的可疑切花或植株挑出，进一步作实验室检验标注品名、数量、生产国及取样地点、取样人和取样日期等样品信息。7.2实验室检测
分离培养性状和形态学观察：联病健交界的织织数块（大小约/mm×5mm），用1%NaC1O）进行表面消毒3min，无菌水冲洗3次置于PDA平板上，于o℃～25℃黑暗下培养，待菌落出现后观察菌落的形态、颜色、大小及子实体等培养性状显微镜检分生孢子的形态特征，将与疑似分离物转到PDA平板上纯化，保存备用。
8鉴定特征
8.1症状特征
菊花植株的所有部分，包括根，都能被侵染，但是花和插条最容易被侵染。插条，通常是顶芽先被侵染，随后向下侵染整株植株。未开的花苞，苞片和茎组织颜色变暗。在叶片上，引起不规则的黑褐色叶斑，2cm～3cm宽。在茎上，症状通常出现在靠近病叶的、有伤口的或者插条基部等部位。花上的症状：侵染后，花瓣出现斑点，开始时只侵染花冠的一侧，表现为畸形（只有半边花）。在浅色的花瓣上呈红色斑点，在深色的花瓣上，呈褐色。随后侵染快速发展，被侵染的小花粘连在起，花冠完全腐烂。病菌向下侵染花梗，造成组织变黑变弱，引起花朵枯菱调谢。在田间病组织上产生大量针头状的分生孢子器，尤其花瓣上更多。初呈琥珀色，后成熟变黑色，很易发现。2
SN/T3425—2012
花和叶片的症状容易和灰葡萄孢引起的灰霉病相混淆，插条的腐烂症状很像灰葡萄孢或腐霉引起的症状，菊花花枯病引起的叶斑，边缘清晰，中间部位具特殊光泽。8.2病菌的培养性状
病原真菌在PDA培养基上，能在很广的温度范围内生长。15℃～27℃都能生长良好，最高温度是30℃，最适温度24℃，在6℃下还能生长。在室温下培养4d，菌落直径达2.7cm，菌丝密集，绒状。菌落下层后转橙红色，中心部分呈黑褐色。菌落边缘不整齐，越向中心菌丝层越紧密，絮状，分生孢子器就在中心区形成，形成最适温度为26℃；接种后25℃下3d，20℃下5d形成分生孢子器；子囊壳形成最适温度为20℃，培养7d可形成，24℃以上不形成。（参见图B.1）8.3病菌形态特征
分生孢子器，埋生于寄主表皮以下，用15倍放大镜观察可见，壁薄，球形，大小有两种：在花瓣上的小（72μm～180μm），聚生；在茎和叶上的大（111m～325m），散生。分生孢子以液滴状或短柱形渗出，无色，具油滴，无隔（10%～40%）或有隔（66%～90%）；通常1个隔，偶而多个隔：卵形至圆柱形，常呈不规则形：无隔孢子大小为（6μm>22μm）×（25um~8μm），多数为（8.5μm~13μm）×(3.5μm~5.5μm）；有隔孢子大小为（9μm23um）×（3μm6.5μm），多数为（13μm~15.5μm）×(4μm~5μm)。
成熟的子囊壳比分生孢子器更突出，接近寄主表皮，球形，直径96um224um，具由2～3层厚壁细胞组成黑褐色的外层，顶部有乳突状孔口空腔基部有聚集的拟薄壁组织，上面着生大量子囊，拟侧丝长，包埋全部子囊，并在子囊壳顶部聚集。子囊倒棍棒形基部明显收缩，看似有柄，（49um～81um）×（8μm～10μm）。每个子囊内含8个子囊孢子，无色到灰色，长椭圆形或纺锤形，双胞，上胞在隔膜上方膨大，下胞则较窄，尖锐，大小为（12m~16μm）×（4.u中~6μm）（参见图B.2）。8.4致病性实验
接种10d后，花和叶片即可形成典型的菊花花枯病症状，从病部可分离获得纯菌株，其菌落特征、分生孢子形态大小与供试接种菌株一致。9结果判定
根据菊花花枯病菌（D.ligulicola)的鉴定特征对病菌分离物进行综合判定，如病菌的症状学特征、形态学特征、致病性实验结果与第7章各项鉴定指标吻合，则可鉴定为菊花花枯病菌Didymellaligulicola(K.F.Baker,Dimock&.L.H.Davis)vonArx。10样品和资料的保存
10.1样品的保存
样品经标注菌株来源、寄主、分离时间、鉴定人后置于4℃冰箱保存；菊花花枯病菌（D.ligulicota）纯分离物标注后，菌株在含20%甘油的冻存管中于一80℃保存，或将菌株转接在PDA斜面上培养，待菌丝体长满斜面后，置于4℃下保存，并定期（180d)转管。对鉴定为菊花花枯病菌（D.ligulicola）的样品至少应保存6个月，以备复核谈判和仲裁，样品保存期满后，需经无害化处理。
SN/T3425—2012
2检验资料的保存
妥善保存检验资料，以备复验、谈判和仲裁。检验报告必须注明检验日期、方法、结果等，并有检验人签名；检验图片包括症状、病菌等。A.1分布
亚洲：日本（本州）、以色列。附录A
（资料性附录）
菊花花枯病菌的分布和寄主
SN/T3425—2012
欧洲：比利时、丹麦、芬兰、法国、德国、爱尔兰、以色列、意大利、卢森堡、摩尔多瓦、荷兰、挪威、罗马尼亚、英国、南斯拉夫。
大洋洲：新西兰、澳大利亚、巴布亚新几内亚。美洲：加拿大、美国、墨西哥。非洲：突尼斯、肯尼亚、马拉维、坦桑尼亚、津巴布韦。A.2寄主范围
主要侵害菊科植物Dendranthemaspp.，主要是D.morifolium。除侵染菊花外，人工接种试验表明还可侵染菊苣Cichoriumintybus、莴苣Lactuca satiua L.、洋蓟Gomphrena globosa、金光菊Rudbeckiahirta、百日草Zinniaelegans、向日葵Helianthusannuns、大丽菊Dahliapinnata等。SN/T3425--2012
说明：
附录B
（资料性附录）
菊花花枯病菌的形态特征图
图B.1菊花花枯病菌的PDA上菌落形态（25℃，15d)78
于囊及子囊孢子：
分生孢子。
880080
图B.2菊花花枯病菌的形态特征图（仿Sivinesan，A.1984）a）为害花症状
注：eppo.org。
附录C
（资料性附录）
菊花花枯病为害症状
图C.1菊花花枯病为害症状
SN/T3425-2012
b）为害茎秆症状
c）为害叶症状
SN/T3425—2012
附录D
（资料性附录）
马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA)的配制D.1马铃薯葡萄糖琼脂粉剂成分的每升含量马铃薯
葡萄糖
配制方法
称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水煮沸30min，用四层纱布过滤，滤液加人葡萄糖20g、琼脂18g，继续加热搅拌混匀，稍冷却后定容至1000mL，分装三角瓶，加塞、包扎，121℃高压灭菌20min。
分生孢子器
无隔分生孢子
有隔分生孢子
子囊孢子
附录E
（资料性附录）
D.ligulicola与D.bryoniae的形态学特征主要区别表E.1D.ligulicola与D.bryoniae的形态学特征主要区别D.ligulicola
72μm~180μm或
111μm~325μm
(6μm~22μm）×(2.5μm~8μm)(13μm~15.5μm)X(4μm5μm）
(49μm~81μm)×(8μm~10μm）(12μm~16μm)x(4μm~6μm)
主要侵害菊科植物Dendranthema spp.SN/T3425—2012
D.bryomiae
95μm~137.5μm
(5.3μm~10.5μm）×(2.8μm~5μm）(7.5μm~17μm)×(2.5μm~5.5μm）(27.9μm47.1μm）x(5.9μm9.9μm）(5.5μm~12.5μm）x(2μm~5μm）主要侵害哈密瓜、梨瓜、西葫芦、西瓜、籽西瓜等葫芦科植物
SN/T3425—2012
参考文献
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