SN/T 3449-2012
基本信息
标准号： SN/T 3449-2012
中文名称：昆虫介体中植原体检疫鉴定方法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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下载大小：3100432
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 3449-2012.Detection and identification of candidatus phytoplasma in insect vector.
1范围
SN/T 3449规定了昆虫介体中植原体的检疫和鉴定方法。
SN/T 3449适用于进出境及国内监测中同翅目和半翅目(具刺吸式口器)昆虫体内植原体的检疫和鉴定。
2原理
根据传播植原体的昆虫介体种类(参见附录A)及植原体的分子生物学特性进行鉴定。
3仪器和试剂
3.1仪器设备
PCR仪、超净工作台、高压灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机、台式小型离心机、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡振荡器、移液器、电泳仪.凝胶成像系统。
3.2主要试剂
甘油、75%乙醇、无水乙醇、冰醋酸、三氯甲烷、卡诺固定液(无水乙醇:冰醋酸:三氯甲烷=6: 1 : 3)、昆虫保存液(75%乙醇,1%甘油)、PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs.Taq DNA聚合酶、引物、TAE电泳缓冲液、DNA相对分子质量标准.SYBR Green I等。
4检测鉴定方法
4.1昆虫的前处理
昆虫饥饿处理12h,以防止昆虫肠道内食物DNA的污染。
4.2昆虫体内植原体基因组DNA提取
昆虫体内植原体基因组DNA的提取方法(见附录B)。
4.3巢式PCR扩增及凝胶电泳检测.
用两对植原体扩增通用引物进行巢式PCR扩增并进行凝胶电泳检测(见附录C)。
1范围
SN/T 3449规定了昆虫介体中植原体的检疫和鉴定方法。
SN/T 3449适用于进出境及国内监测中同翅目和半翅目(具刺吸式口器)昆虫体内植原体的检疫和鉴定。
2原理
根据传播植原体的昆虫介体种类(参见附录A)及植原体的分子生物学特性进行鉴定。
3仪器和试剂
3.1仪器设备
PCR仪、超净工作台、高压灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机、台式小型离心机、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡振荡器、移液器、电泳仪.凝胶成像系统。
3.2主要试剂
甘油、75%乙醇、无水乙醇、冰醋酸、三氯甲烷、卡诺固定液(无水乙醇:冰醋酸:三氯甲烷=6: 1 : 3)、昆虫保存液(75%乙醇,1%甘油)、PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs.Taq DNA聚合酶、引物、TAE电泳缓冲液、DNA相对分子质量标准.SYBR Green I等。
4检测鉴定方法
4.1昆虫的前处理
昆虫饥饿处理12h,以防止昆虫肠道内食物DNA的污染。
4.2昆虫体内植原体基因组DNA提取
昆虫体内植原体基因组DNA的提取方法(见附录B)。
4.3巢式PCR扩增及凝胶电泳检测.
用两对植原体扩增通用引物进行巢式PCR扩增并进行凝胶电泳检测(见附录C)。
标准图片预览
标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3449—2012
昆虫介体中植原体检疫鉴定方法Detection and identification of candidatus phytoplasma in insect vector2012-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2013-07-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T3449—2012
本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国宁夏出人境检验检疫局。本标准主要起草人：赵文军、陈岩、杨毅、杨旭光、牟海青、朱水芳、1范围
昆虫介体中植原体检疫鉴定方法本标准规定了昆虫介体中植原体的检疫和鉴定方法。SN/T3449-2012
本标准适用于进出境及国内监测中同翅目和半翅目（具刺吸式口器）昆虫体内植原体的检疫和鉴定。
2原理
根据传播植原体的昆虫介体种类（参见附录A)及植原体的分子生物学特性进行鉴定。3仪器和试剂
仪器设备
PCR仪、超净工作台、高压灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机、台式小型离心机、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡振荡器、移液器、电泳仪、凝胶成像系统。3.2主要试剂
甘油、75%乙醇、无水乙醇、冰醋酸、三氯甲烷、卡诺固定液（无水乙醇：冰醋酸：三氯甲烷=6：1：3）、昆虫保存液（75%乙醇，1%甘油）、PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物、TAE电泳缓冲液、DNA相对分子质量标准，SYBRGreenI等。检测鉴定方法
4.1昆虫的前处理
昆虫饥饿处理12h，以防止昆虫肠道内食物DNA的污染。4.2昆虫体内植原体基因组DNA提取昆虫体内植原体基因组DNA的提取方法（见附录B)。4.3巢式PCR扩增及凝胶电泳检测用两对植原体扩增通用引物进行巢式PCR扩增并进行凝胶电泳检测（见附录C)。4.4虚拟RFLP指纹图谱检测
见附录D。
结果判定
5.1在4.3检测中，若用通用引物R16F2n/R16R2进行第二轮PCR后，PCR扩增产物经凝胶电泳检1
SN/T3449--2012
测结果为阳性，而且片段大小为1.2kb左右，可初步判定该昆虫样品中携带植原体.但需通过4.4方案进一步检测。
5.2在4.4检测中，克隆并测序植原体16SrDNA序列（引物R16F2n/R16R2扩增部分）.经17种限制性内切酶进行虚拟酶切后获得虚拟RFLP指纹图谱，若与已知植原体的虚拟RFI.P指纹图谱-致，则可判定该样品携带该植原体。6样品保存与复核
样品保存与处理
样品经登记和经手人签字同
对检出植原体的同批昆虫蛋
冻于一20℃冰箱中保存。昆典
以备发核市
机俄处理12.h后浸泡于卡诺固定液20min.然后转人昆虫保存液，A东存手200冰箱中。
所有样品保存期满后应经高压灵菌后方可处理。6.2结果记录与资料保存
完整的实验记录包括：样品的来源种类时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有实验人员和审核人员签字。PCR凝胶电源签测有电泳结果照片测序结果要保存序列文件和序列比对文件。6.3复核
由国家质量监督检验检疫总指定的单位或大员负责。主要考察实验记录、照片等资料的完整性和真实性，必要时进行复核试验。9
昆虫介体名称
叶蝉科（Cicadellidae)
附录A
（资料性附录）
植原体主要昆虫传播介体种类
植原体主要昆虫传播介体种类
寄主植物
Acinopterus angulatus LawsonAlebroides nigroscutell&tus
Amrasca deuastans
Aphrodesbicincta（双带脊冠叶蝉Austroagalica torride
Butruchomorphus punctatus
Circulifer haematoceps
Circuliferlenellus（甜菜叶蝉）Colladonusclitellarius（鞍形叶蝉）Coladonus gemindtus
Colladonus momtanus（深山叶蝉）Dalbuluselimatus（墨西哥玉米叶蝉）Dalbulusmaidis（玉米叶蝉）
Empoasca papa yae Oman
Endrig inimicg（胭脂叶蝉）
Escelidius lineolatus BrulleEuscelidius uariegates Kirschbaum（秧叶蝉）
不同科的植物
核果类树木
茄属植物
三叶草
不同科的植物
草莓、三叶草
三叶草
核果类树木
不同科的植物
核果类树木
核果类树木
翠菊黄化病
番木瓜
三叶草
三叶草
不同科的植物
核果类树木
病害名称/植原体组
攀菊黄化病
西方X病（16SrⅢ-A）
SN/T3449—2012
地理分布
土豆紫顶卷曲病（16SrⅢI-B）
茄小叶病
三叶草变叶病（16SrIV）
顽固病（16SrXI-A）
草莓花变叶病（16SrI-C)）
叶皱缩卷曲病
番茄巨芽病（16SrV-A）
芝麻变叶病
16SrV-16SrX
甜菜叶蝉传播的绿变病
番茄目芽病（16SrM-A）
165rV-16SrX
东方X病（16SrⅢ-A）
翠菊黄化病
西方x病（16SrⅢ-A）
西方X病（16SrⅢ-A）
不同科的植物
玉米丛枝矮化病(16SrI-B)
玉米丛枝矮化病(16SrI-B）
番木瓜束项顶病
翠菊黄化病（16SrI）
三叶草绿变病(16SrI-C)
花瓣变绿病（16SrI-C)
三叶草变叶病（16SrI-C)
翠菊黄化病
西方X病（16SrⅢ-A）
葡葡金黄化病（16SrV-C）
菊花黄化病（16SrI-B）
东南亚
东南亚
澳大利亚
澳大利亚
中东地区
以色列
以色列
北美/墨西哥
北美/墨西哥
加勒比海地区
SN/T3449—2012
昆虫介体名称
Fieberiella florii
Graminella nigrifroms
Gra phocephala confl uens
Gyponana lamina Delong
（片拟扁叶蝉）
Hishimonoides chinensis Anufriev（中华拟菱纹叶蝉）
Hishimonoides sellatiformis Ishihara（桑拟菱纹叶蝉）
Hishimonoides phycitis
Hishimonoides sellatus UhlerMacrosteles striifrons AnufrievMacrostelesuiridigriseus（灰绿叶蝉）Macropsisfuscula（嗨广头叶蝉）Macropsis menda?
Macropsistrimaculata（李广头叶蝉）Neoaliturus fenestratus
Nephotettircincticeps（黑尾叶蝉）Nethotettirwirescens（二点黑尾叶蝉）Nesophrosyne orientalis
表A.1(续）
寄主植物www.bzxz.net
苹果、核果类树木
不同科的植物
核果类树木
核果类树木
核果类树木
核果类树木
盐肤木、三叶
草、长春花
野蜀葵
不同科的植物
茄科植物
Japanese
honewort
茄科植物
三叶草，车前草
三叶草，车前草
悬钩子属植物
李属植物
菊科植物
豆科，花生
病害名称/植原体组
苹果丛生植原体
(16SrX-A)
翠菊黄化病（16Srl）
西方X病（16Srl-A）
东方X病（16SrlⅢ-A）
玉米丛枝矮缩病
西方X病（16Srl-A）
东方X病（16SrⅢ-A）
枣疯病（16SrV-B）
桑矮缩病（16SrI-B）
茄子小叶病
桑矮缩病（16SrI-B）
漆树科黄化病
枣疯病（16SrV-B)
野蜀葵丛枝病
银莲花丛枝病
菊花黄化病（16SrI-B)
茄矮缩病
蒿蒿菜丛枝病（16SrI）
Marguerite黄化病
Mitsuba丛枝病（16SrI）
洋葱黄化病
番茄黄化病
三叶草变叶病（16SrI-C）
三叶草丛枝病
榆树黄化病（16SrV）
桃黄化
变叶病
水稻黄化矮缩病（16SrXI-A）
水稻黄化矮缩（16SrXI-A）
丛枝病
地理分布
以色列
菱蜡蝉科
昆虫介体名称
Norvellina seminuda
Orosiusargentatus（烟草叶蝉）Osbornellus borealis
Recilia dorsalis Motschulsky（电光叶蝉）
Sca phoideus luleolus van Duzee（榆白带叶蝉）
Scaphoideus titanus Ball
Sca phytopius acutus
Scaphytopius delongi Young
Scaphytopius diutius
Seaphytopius fuliginosus OsbornScaphytopius irroratus
Scaphytopius nitrides DelLongSeleroracus flauopictus IshiharaRhytidodus decimusquartus
Tremulicerus vitreus
Cirius wagneri
Hyalesthes obsoletus Signoret表A.1（续）
寄主植物
核果类树木
豆科植物
核果类树木
核果类树木
核果类树木
核果类树木，
核果类树木
核果类树木，芹菜
龙胆科植物
大吴风草
杨属植物
杨属植物
病害名称/植原体组
东方X病（16Srl-A）
番茄巨芽病（16SrV-A）
Lucerne 丛枝病
马铃薯紫顶萎焉病
(16SrI-B)
豆科植物小叶病
烟草黄化矮缩病
西方X病（16Sr-A）
水稻橙叶病
SN/T3449—2012
地理分布
澳大利亚
澳大利亚
澳大利亚
澳大利亚
澳大利亚
东南亚
美国榆树黄化病（16SrV-A）
葡萄金黄化病(16SrV-C）
葡萄金黄化病（16SrV-D）
菊花黄化病(16SrI-B)
大豆芽增生
西方X病（16SrI-A）
东方X病（16SrI-A）
西方X病（16SrⅡl-A）
西方X病（16SrⅡ-A）
豆类病
西方翠菊黄化病
西方X病（16Sr-A）
马铃薯紫项病（16SrⅡ-B）
龙胆属植物丛枝病
(16SrI-B)
Tsuwabuki丛枝病
丛枝（16SrI-A）
丛枝（16SrI-A）
顽固病（16SrXI-A）
预固病（16SrXI-A）
Vergilbungskrankheit
(16SrXI-A)
葡萄黑木病（16SrXI-A）
美国、墨西哥
欧洲-土耳其
SN/T34492012
昆虫介体名称
Myndus crudus van Duzee
Oliarius alkinsoni Meyers
飞虱科（Delphacidae）
Saccharosydme saccharivora
（甘蕉长飞虱）
袖蜡蝉科（Derbidae)）
木虱科（Psyllidae）
Proutista moesta
Cacopsylla melanoneuru
Cacopsylla picta
Cacopsylla pruni Scopol
Cacopsylla pyri
Cacopsylla pyricola
Cacopsylla pyrisugy
蝽科（Pentatomidae)
Halyomorpha hiys
网蝽科（Tingidae）
Stephanitistypica（香蕉冠网情）表A.1（续）
寄主植物
核果类树术
梨属植物
泡桐/
病害名称/植原体组
椰子致死黄化（16SrIV）
新西兰麻黄叶病
(16SrX-B)
甘蔗黄化病
椰子根枯病（16SrIV）
草状丛枝病
苹果丛生病（16SrX-A）
苹果丛生病（16SrX-A）
欧洲核果类树木黄化病
（16SrX-B）
苹果丛生病（16SrX-A）
梨衰退病（16SrX-C）
梨衰退（16SrX-C）
梁衰退（16SrX-C）
泡桐丛枝病（16SrI-B）
根枯病
地理分布
Subtropical
America
新西兰
东南亚
东南亚
俄罗斯
东南亚
B.12%CTAB配制
附录B
（规范性附录）
昆虫体内植原体基因组DNA的提取方法2%（质量浓度)CTAB（十六烷基三乙基溴化铵，C1HazNBr）1oommol/LTris-Cl.pH8.
20mmol/LEDTA.pH8.0
1.4mol/LNaCl
B.2DNA提取步骤
SN/T3449—2012
B.2.1取单头昆虫，去翅，于双蒸水中漂洗.，吸水纸吸干B.2.2将虫体放人2.0ml.离心管中，加人20L2%CTAB，-20℃冰箱放置4min，取出用小研棒或牙签捣碎，勾浆，小研棒或牙签用200μL2%CTAB冲洗。@
B.2.365℃水浴温育45min期间不断的颠倒混勾），放人55℃水浴2min使其温度降到55℃。B.2.4加人10μL蛋白酶K（20mg/mL）.5.5_C.40min（期间不断的颠倒混匀）。B.2.5冷却后，加人等体积的24：1三氯甲烷/异戊醇颠倒使充分混合，于4℃，7500g离心5min回收上层水相、
B.2.6加人2倍体积预冷的无水乙醇，混匀，放置20℃，1h以上。B.2.7
12000g，离心15min/弃上清液，收集沉淀，晾于，用70%4醇洗1次。室温干燥10min后，人20ri
，TE于-20/C保存
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昆虫介体中植原体检疫鉴定方法Detection and identification of candidatus phytoplasma in insect vector2012-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2013-07-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T3449—2012
本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国宁夏出人境检验检疫局。本标准主要起草人：赵文军、陈岩、杨毅、杨旭光、牟海青、朱水芳、1范围
昆虫介体中植原体检疫鉴定方法本标准规定了昆虫介体中植原体的检疫和鉴定方法。SN/T3449-2012
本标准适用于进出境及国内监测中同翅目和半翅目（具刺吸式口器）昆虫体内植原体的检疫和鉴定。
2原理
根据传播植原体的昆虫介体种类（参见附录A)及植原体的分子生物学特性进行鉴定。3仪器和试剂
仪器设备
PCR仪、超净工作台、高压灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机、台式小型离心机、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡振荡器、移液器、电泳仪、凝胶成像系统。3.2主要试剂
甘油、75%乙醇、无水乙醇、冰醋酸、三氯甲烷、卡诺固定液（无水乙醇：冰醋酸：三氯甲烷=6：1：3）、昆虫保存液（75%乙醇，1%甘油）、PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物、TAE电泳缓冲液、DNA相对分子质量标准，SYBRGreenI等。检测鉴定方法
4.1昆虫的前处理
昆虫饥饿处理12h，以防止昆虫肠道内食物DNA的污染。4.2昆虫体内植原体基因组DNA提取昆虫体内植原体基因组DNA的提取方法（见附录B)。4.3巢式PCR扩增及凝胶电泳检测用两对植原体扩增通用引物进行巢式PCR扩增并进行凝胶电泳检测（见附录C)。4.4虚拟RFLP指纹图谱检测
见附录D。
结果判定
5.1在4.3检测中，若用通用引物R16F2n/R16R2进行第二轮PCR后，PCR扩增产物经凝胶电泳检1
SN/T3449--2012
测结果为阳性，而且片段大小为1.2kb左右，可初步判定该昆虫样品中携带植原体.但需通过4.4方案进一步检测。
5.2在4.4检测中，克隆并测序植原体16SrDNA序列（引物R16F2n/R16R2扩增部分）.经17种限制性内切酶进行虚拟酶切后获得虚拟RFLP指纹图谱，若与已知植原体的虚拟RFI.P指纹图谱-致，则可判定该样品携带该植原体。6样品保存与复核
样品保存与处理
样品经登记和经手人签字同
对检出植原体的同批昆虫蛋
冻于一20℃冰箱中保存。昆典
以备发核市
机俄处理12.h后浸泡于卡诺固定液20min.然后转人昆虫保存液，A东存手200冰箱中。
所有样品保存期满后应经高压灵菌后方可处理。6.2结果记录与资料保存
完整的实验记录包括：样品的来源种类时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有实验人员和审核人员签字。PCR凝胶电源签测有电泳结果照片测序结果要保存序列文件和序列比对文件。6.3复核
由国家质量监督检验检疫总指定的单位或大员负责。主要考察实验记录、照片等资料的完整性和真实性，必要时进行复核试验。9
昆虫介体名称
叶蝉科（Cicadellidae)
附录A
（资料性附录）
植原体主要昆虫传播介体种类
植原体主要昆虫传播介体种类
寄主植物
Acinopterus angulatus LawsonAlebroides nigroscutell&tus
Amrasca deuastans
Aphrodesbicincta（双带脊冠叶蝉Austroagalica torride
Butruchomorphus punctatus
Circulifer haematoceps
Circuliferlenellus（甜菜叶蝉）Colladonusclitellarius（鞍形叶蝉）Coladonus gemindtus
Colladonus momtanus（深山叶蝉）Dalbuluselimatus（墨西哥玉米叶蝉）Dalbulusmaidis（玉米叶蝉）
Empoasca papa yae Oman
Endrig inimicg（胭脂叶蝉）
Escelidius lineolatus BrulleEuscelidius uariegates Kirschbaum（秧叶蝉）
不同科的植物
核果类树木
茄属植物
三叶草
不同科的植物
草莓、三叶草
三叶草
核果类树木
不同科的植物
核果类树木
核果类树木
翠菊黄化病
番木瓜
三叶草
三叶草
不同科的植物
核果类树木
病害名称/植原体组
攀菊黄化病
西方X病（16SrⅢ-A）
SN/T3449—2012
地理分布
土豆紫顶卷曲病（16SrⅢI-B）
茄小叶病
三叶草变叶病（16SrIV）
顽固病（16SrXI-A）
草莓花变叶病（16SrI-C)）
叶皱缩卷曲病
番茄巨芽病（16SrV-A）
芝麻变叶病
16SrV-16SrX
甜菜叶蝉传播的绿变病
番茄目芽病（16SrM-A）
165rV-16SrX
东方X病（16SrⅢ-A）
翠菊黄化病
西方x病（16SrⅢ-A）
西方X病（16SrⅢ-A）
不同科的植物
玉米丛枝矮化病(16SrI-B)
玉米丛枝矮化病(16SrI-B）
番木瓜束项顶病
翠菊黄化病（16SrI）
三叶草绿变病(16SrI-C)
花瓣变绿病（16SrI-C)
三叶草变叶病（16SrI-C)
翠菊黄化病
西方X病（16SrⅢ-A）
葡葡金黄化病（16SrV-C）
菊花黄化病（16SrI-B）
东南亚
东南亚
澳大利亚
澳大利亚
中东地区
以色列
以色列
北美/墨西哥
北美/墨西哥
加勒比海地区
SN/T3449—2012
昆虫介体名称
Fieberiella florii
Graminella nigrifroms
Gra phocephala confl uens
Gyponana lamina Delong
（片拟扁叶蝉）
Hishimonoides chinensis Anufriev（中华拟菱纹叶蝉）
Hishimonoides sellatiformis Ishihara（桑拟菱纹叶蝉）
Hishimonoides phycitis
Hishimonoides sellatus UhlerMacrosteles striifrons AnufrievMacrostelesuiridigriseus（灰绿叶蝉）Macropsisfuscula（嗨广头叶蝉）Macropsis menda?
Macropsistrimaculata（李广头叶蝉）Neoaliturus fenestratus
Nephotettircincticeps（黑尾叶蝉）Nethotettirwirescens（二点黑尾叶蝉）Nesophrosyne orientalis
表A.1(续）
寄主植物www.bzxz.net
苹果、核果类树木
不同科的植物
核果类树木
核果类树木
核果类树木
核果类树木
盐肤木、三叶
草、长春花
野蜀葵
不同科的植物
茄科植物
Japanese
honewort
茄科植物
三叶草，车前草
三叶草，车前草
悬钩子属植物
李属植物
菊科植物
豆科，花生
病害名称/植原体组
苹果丛生植原体
(16SrX-A)
翠菊黄化病（16Srl）
西方X病（16Srl-A）
东方X病（16SrlⅢ-A）
玉米丛枝矮缩病
西方X病（16Srl-A）
东方X病（16SrⅢ-A）
枣疯病（16SrV-B）
桑矮缩病（16SrI-B）
茄子小叶病
桑矮缩病（16SrI-B）
漆树科黄化病
枣疯病（16SrV-B)
野蜀葵丛枝病
银莲花丛枝病
菊花黄化病（16SrI-B)
茄矮缩病
蒿蒿菜丛枝病（16SrI）
Marguerite黄化病
Mitsuba丛枝病（16SrI）
洋葱黄化病
番茄黄化病
三叶草变叶病（16SrI-C）
三叶草丛枝病
榆树黄化病（16SrV）
桃黄化
变叶病
水稻黄化矮缩病（16SrXI-A）
水稻黄化矮缩（16SrXI-A）
丛枝病
地理分布
以色列
菱蜡蝉科
昆虫介体名称
Norvellina seminuda
Orosiusargentatus（烟草叶蝉）Osbornellus borealis
Recilia dorsalis Motschulsky（电光叶蝉）
Sca phoideus luleolus van Duzee（榆白带叶蝉）
Scaphoideus titanus Ball
Sca phytopius acutus
Scaphytopius delongi Young
Scaphytopius diutius
Seaphytopius fuliginosus OsbornScaphytopius irroratus
Scaphytopius nitrides DelLongSeleroracus flauopictus IshiharaRhytidodus decimusquartus
Tremulicerus vitreus
Cirius wagneri
Hyalesthes obsoletus Signoret表A.1（续）
寄主植物
核果类树木
豆科植物
核果类树木
核果类树木
核果类树木
核果类树木，
核果类树木
核果类树木，芹菜
龙胆科植物
大吴风草
杨属植物
杨属植物
病害名称/植原体组
东方X病（16Srl-A）
番茄巨芽病（16SrV-A）
Lucerne 丛枝病
马铃薯紫顶萎焉病
(16SrI-B)
豆科植物小叶病
烟草黄化矮缩病
西方X病（16Sr-A）
水稻橙叶病
SN/T3449—2012
地理分布
澳大利亚
澳大利亚
澳大利亚
澳大利亚
澳大利亚
东南亚
美国榆树黄化病（16SrV-A）
葡萄金黄化病(16SrV-C）
葡萄金黄化病（16SrV-D）
菊花黄化病(16SrI-B)
大豆芽增生
西方X病（16SrI-A）
东方X病（16SrI-A）
西方X病（16SrⅡl-A）
西方X病（16SrⅡ-A）
豆类病
西方翠菊黄化病
西方X病（16Sr-A）
马铃薯紫项病（16SrⅡ-B）
龙胆属植物丛枝病
(16SrI-B)
Tsuwabuki丛枝病
丛枝（16SrI-A）
丛枝（16SrI-A）
顽固病（16SrXI-A）
预固病（16SrXI-A）
Vergilbungskrankheit
(16SrXI-A)
葡萄黑木病（16SrXI-A）
美国、墨西哥
欧洲-土耳其
SN/T34492012
昆虫介体名称
Myndus crudus van Duzee
Oliarius alkinsoni Meyers
飞虱科（Delphacidae）
Saccharosydme saccharivora
（甘蕉长飞虱）
袖蜡蝉科（Derbidae)）
木虱科（Psyllidae）
Proutista moesta
Cacopsylla melanoneuru
Cacopsylla picta
Cacopsylla pruni Scopol
Cacopsylla pyri
Cacopsylla pyricola
Cacopsylla pyrisugy
蝽科（Pentatomidae)
Halyomorpha hiys
网蝽科（Tingidae）
Stephanitistypica（香蕉冠网情）表A.1（续）
寄主植物
核果类树术
梨属植物
泡桐/
病害名称/植原体组
椰子致死黄化（16SrIV）
新西兰麻黄叶病
(16SrX-B)
甘蔗黄化病
椰子根枯病（16SrIV）
草状丛枝病
苹果丛生病（16SrX-A）
苹果丛生病（16SrX-A）
欧洲核果类树木黄化病
（16SrX-B）
苹果丛生病（16SrX-A）
梨衰退病（16SrX-C）
梨衰退（16SrX-C）
梁衰退（16SrX-C）
泡桐丛枝病（16SrI-B）
根枯病
地理分布
Subtropical
America
新西兰
东南亚
东南亚
俄罗斯
东南亚
B.12%CTAB配制
附录B
（规范性附录）
昆虫体内植原体基因组DNA的提取方法2%（质量浓度)CTAB（十六烷基三乙基溴化铵，C1HazNBr）1oommol/LTris-Cl.pH8.
20mmol/LEDTA.pH8.0
1.4mol/LNaCl
B.2DNA提取步骤
SN/T3449—2012
B.2.1取单头昆虫，去翅，于双蒸水中漂洗.，吸水纸吸干B.2.2将虫体放人2.0ml.离心管中，加人20L2%CTAB，-20℃冰箱放置4min，取出用小研棒或牙签捣碎，勾浆，小研棒或牙签用200μL2%CTAB冲洗。@
B.2.365℃水浴温育45min期间不断的颠倒混勾），放人55℃水浴2min使其温度降到55℃。B.2.4加人10μL蛋白酶K（20mg/mL）.5.5_C.40min（期间不断的颠倒混匀）。B.2.5冷却后，加人等体积的24：1三氯甲烷/异戊醇颠倒使充分混合，于4℃，7500g离心5min回收上层水相、
B.2.6加人2倍体积预冷的无水乙醇，混匀，放置20℃，1h以上。B.2.7
12000g，离心15min/弃上清液，收集沉淀，晾于，用70%4醇洗1次。室温干燥10min后，人20ri
，TE于-20/C保存
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