SN/T4877.4—2017 基因条形码筛查方法 第4部分：检疫性茎点霉 前言 SN/T4877《基因条形码筛查方法》分为10个部分：第1部分：检疫性棒形杆菌；第2部分：检疫性黄单胞菌；第3部分：检疫性植原体；第4部分：检疫性茎点霉；第5部分：检疫性拟茎点霉；第6部分：检疫性嗜酸菌；第7部分：检疫性轮枝菌；第8部分：检疫性炭疽菌；第9部分：检疫性腥黑粉菌；第10部分：检疫性疫霉。本部分为SN/T4877的第4部分。本部分按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本文件的某些内容可能涉及专利，发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国宁波出入境检验检疫局、中国科学院微生物研究所、中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本部分起草人：段维军、蔡磊、陈倩、廖芳、郭立新、张慧丽、陈先锋、朱水芳。 1 范围 本部分规定了检疫性茎点霉DNA条形码筛查方法，适用于进境植物及其产品中检疫性茎点霉的筛查。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡注日期的引用文件，仅注日期版本适用。凡不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改单）适用。 SN/T1135.8 马铃薯环疽病菌检疫鉴定方法 SN/T2589 植物病原真菌检测规范 SN/T3288 柠檬干枯病菌检疫鉴定方法 SN/T3682 葡萄茎枯病菌检疫鉴定方法 SN/T3755 豌豆脚腐病菌检疫鉴定方法 3 术语和定义 3.1 DNA条形码：生物体内能够代表该物种的标准DNA片段，具有足够变异、易扩增且相对较短。 3.2 内部转录间隔区序列（Internal Transcribed Spacer, ITS）：存在于核糖体DNA中18S、5.8S和28S基因间的非编码区域，ITS1和ITS2进化速度快、种内保守、种间差异大，可用于系统学分析。 3.3 β-微管蛋白基因（beta-tubulin, TUB）：含保守外显子和多个内含子，用于真菌各级分类和种内地域株亲缘关系研究，在茎点霉属物种中显示良好区分能力。 3.4 检疫性茎点霉（Quarantine Phoma spp.）：根据农业部和国家质检总局2007年第862号公告，马铃薯环疽病菌Phoma erigua f.sp. foveata、葡萄茎枯病菌Phoma glomerata、豌豆脚腐病菌Phoma pinodella及柠檬干枯病菌Phoma tracheiphila列为禁止进境检疫性有害生物。详细分类见SN/T1135.8、SN/T3682、SN/T3755、SN/T3288。 4 方法原理 根据茎点霉属真菌的核糖体转录间隔区（ITS）和β-微管蛋白片段（TUB）的序列特征，应用DNA条形码技术对检疫性茎点霉进行种类筛查，确定目标真菌是否为检疫性茎点霉及其种属归类。 5 仪器设备和试剂 5.1 仪器设备与用具：显微镜、高压灭菌锅、生化培养箱、离心机、核酸分析仪、PCR仪、电泳设备、凝胶成像系统、冰箱等。 5.2 主要试剂：真菌DNA提取试剂盒、PCR Premix、超纯水、DNA marker等。