SN 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 SN 0296-93 出口禽肉中莫能菌素残留量检验方法 生物自显影法 Method for the determination of monensin residues in poultry meat for export — Bioautography method 1993-12-28发布 1994-05-01实施 中华人民共和国国家进出口商品检验局发布 1 主题内容与适用范围 本标准规定了出口禽肉中莫能菌素残留量的抽样、制样和生物自显影测定方法。本标准适用于出口冻鸡中莫能菌素残留量的检验。 2 抽样和制样 2.1 检验批 以不超过2500件商品为一检验批，同一检验批商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。 2.2 抽样数量 批量与最低抽样数如下： 1～25件：抽样1件 26～100件：抽样5件 101～250件：抽样10件 251～500件：抽样15件 501～1000件：抽样17件 1001～2500件：抽样20件 2.3 抽样方法 按上述规定随机抽取样品，逐件开启，每件至少取一袋作为原始样品，总量不少于2kg。样品装入清洁容器，加封标识后送检。 2.4 样品制备 从每袋原始样品中取代表性样品，将可食部分用高速组织捣碎机均质混匀，用四分法缩分出不少于1kg试样，装入清洁容器密封标识。 2.5 样品保存 试样于-18℃冷冻保存。抽样及制样过程中应防止污染及残留物变化。 3 测定方法 3.1 方法提要 用甲醇提取肉样中莫能菌素，经四氯化碳萃取后浓缩至干，用甲醇溶解残留物，经薄层分离后采用生物自显影法测定。 3.2 设备和材料 微量注射器（50μL）；硅胶薄层板（5cm×20cm，110℃活化2h）；展开缸（240mm×57mm×32mm）；游标卡尺（0～200mm，精度0.02mm）或抑菌圈测量仪；离心机（3000r/min）；旋转浓缩器；恒温培养箱（37±1℃）；高压灭菌器；培养皿（20cm×10cm×5cm）；均质器（250mL）。 3.3 试剂和培养基 3.3.1 试剂 甲醇（分析纯）；四氯化碳（分析纯）；乙酸乙酯（分析纯）；莫能菌素标准品（960μg效价/mg）；试验菌种为枯草杆菌ATCC6633。 3.3.2 培养基 菌种用培养基；生物自显影用培养基；肉汤培养基（详见附录A）。 3.4 测定步骤 3.4.1 工作液制备 3.4.1.1 标准贮备液 称取莫能菌素标准品，用甲醇配制成500μg（效价）/mL标准溶液，冰箱保存，一周内使用。 3.4.1.2 标准工作液 将标准贮备液用甲醇稀释为2、3、4、5、10、15μg（效价）/mL标准工作液，当日配制。 3.4.1.3 菌种培养及芽胞悬浮液制备 将菌种接种于肉汤培养基，在37±1℃培养24h后转入培养基培养一周，芽胞形成率达85%以上后制备悬浮液。经离心、洗涤、热处理及再离心后制得芽胞菌悬浮液，4℃保存，可使用一个月。 3.4.2 试液制备 称取绞碎试样10g（精确至0.1g），加入20mL甲醇均质2min（后续内容在原文中截断未完整提供）。