SN/T 4181-2015.Detection and identification of Ramularia beticola.
1范围
SN/T 4181规定了甜菜叶斑病菌的检疫和鉴定方法。
SN/T 4181适用于甜菜种子、植株中甜菜叶斑病菌的检疫和鉴定。
2基本信息
中文名称:甜菜叶斑病菌
拉丁学名:Ramularia beticola Fautr.et
分类地位:真菌界(Fungi)，子囊菌门(Ascomyoota) ,座囊菌纲(Dothideomycetes) ,煤炱目(Capno-diales) ,球腔菌科( Mycosphaerellaceae) ,柱隔孢属( Ramularia).
传播途径:该病菌依靠风雨等近距离传播，以病株的组织尤其是叶片、种子远距离传播。
该病菌的其他信息参见附录A。
3方法原理
甜菜叶斑病菌具有分生孢子梗和分生孢子,其在寄主上危害的症状及形态特征是鉴定该病菌的主要依据。
4仪器设备
4.1 仪器
实体显微镜、生物显微镜、超净工作台、高压灭菌锅光照恒温培养箱、电子天平(1/1 000)、冰箱、振
荡器、离心机等。
4.2实验用具
三角瓶(250 mL、500 mL)、培养皿(9 cm)、烧杯、剪刀、解剖针解剖刀、滤纸、离心管、透明胶带、白瓷盘等。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T41812015
甜菜叶斑病菌检疫鉴定方法
Detection and identification of Ramularia beticola2015-02-09发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2015-09-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局。SN/T4181-2015
本标准主要起草人：杨立群、张洪祥、刘忠梅、程阳、严进、刘洪义、孟玉芹、文革。I
1范围
甜菜叶斑病菌检疫鉴定方法
本标准规定了甜菜叶斑病菌的检疫和鉴定方法。本标准适用于甜菜种子、植株中甜菜叶斑病菌的检疫和鉴定。2基本信息
中文名称：甜菜叶斑病菌
拉丁学名：Ramulariabeticola
SN/T4181—2015
分类地位：真菌界（Fungi），子囊菌门（Ascomyeota），座囊菌纲（Dothideomycetes），煤目（Capnodiales），球腔菌科（Mycosphaerellaceae），柱隔孢属（Ramularig传播途径：该病菌依靠风雨等近距离传播，以病株的组织尤其是叶片、种子远距离传播该病菌的其他信息参见附录A
3方法原理
甜菜叶斑病菌具有分生孢子梗和分生孢子，其在寄主上危害的症状及形态特征是鉴定该病菌的主要依据。
4仪器设备
4.1仪器
实体显微镜、生物显微镜、超净工作荡器、离心机等。
4.2实验用具
台、高压灭菌锅、
光照恒温培养箱、电子天平（1/1000）、冰箱、振三角瓶（250mL、500mL）、培养血（9.cm）、烧杯、剪刀、解剖针、解剖刀、滤纸、离心管、透明胶带、白瓷盘等。
5现场检查
检查种子中是否有可疑病粒（没有种衣剂的情况下）以及植物的病残体，并把可疑样品送到实验室做进一步鉴定。
6实验室检验
6.1非种衣剂种子检验
6.1.1洗涤检验
取50g种子样品放人灭菌的三角瓶中，加人300mL无菌水，在振荡器中震荡5min～10min，然后1Www.bzxZ.net
SN/T4181-2015
将震荡液在1500r/min下离心5min，倒掉上清液留下1mL左右沉淀液，在显微镜下观察6.1.2保湿培养
将种子样品倒入灭菌磁盘中，检查病残体和可疑的病粒、癌粒，然后用灭菌的镊子在无菌的情况下将其放人已灭菌的、具三层滤纸的培养皿中（直径9cm），加3mL的无菌水，每皿约35粒，放入10个培养血。将培养皿封闭在透明塑料袋中或用透明胶条封口，在16℃～20℃条件下光暗交替培养5d后用实体显微镜开始观察，也可肉眼观察，是否有真菌长出。将可疑病粒轻轻移放在另一个灭菌的培养皿中继续培养，3d后在显微镜下观察。2种衣剂种子检验
将带有种衣剂的种子直接放人灭过菌的培养皿中，进行保湿培养（方法同6.1.2)。6.3植株检验
6.3.1显微镜检查
采集的病叶，如果病部有霉层，可直接用灭菌解剖针挑取霉层，或者用透明胶带直接粘取霉层后镜检，观察病菌形态特征。
6.3.2保湿培养
将病叶用无菌水冲洗3次后，在无菌条件下用灭菌解剖刀在病斑的病健交界处切取4cm左右放人灭菌培养血中，培养方法同6.1.2。长出菌后，用显微镜检查。7隔离种植检验
种子经过实验室检疫后，必须进行田间隔离种植检疫，这是不可缺少的重要检疫手段。甜菜叶斑病一般可选择6月份和7月份调查，甜菜褐斑病（Cercosporabeticola）与甜菜叶斑病（Ramulariabeticola）是甜菜叶片上最重要的两种病害，危害症状有些相近，但病原菌有明显的区别。可参见附录A和附录B根据所描述的症状，采集可疑病叶，带回实验室，检验方法同6.3。8病原菌形态鉴定特征
菌丝无色有隔，分枝，分生孢子梗无色，常成簇从寄主气孔穿出，分生孢子梗短小不分枝，产孢梗顶端曲膝状，分生孢子卵形、长椭圆形、至圆柱状，单胞或双胞，单细胞孢子（8um～12um）×（3um～4μm），双细胞孢子（15μm~25μm）×（2μm~4μm）。参见图A.2。9结果评定
种子检验
如果在种子及其病残体中检查到与第8章中所描述的形态鉴定特征相一致的病原菌，则判定为甜菜叶斑病菌。
：植株检验
如果在病叶中观察到附录A中相类似的症状，且检查到与第8章中所描述的形态鉴定特征相一致2
的病原菌，则判定为甜菜叶斑病菌。10
结果记录
SN/T4181—2015
记录样品信息及各项检测数据，包括样品来源、采集时间、地点、方法、结果等信息，并保存病原菌显微摄影、叶片症状等相关照片。11
样品保存
检出甜菜叶斑病菌的样品应保持在冷藏箱中；分离的甜菜叶斑病菌用PDA培养基培养保存，保存至少1年，以备复核。保存期满后，须经灭菌处理。SN/T4181—2015
A.1分布
附录A
（资料性附录）
甜菜叶斑病菌基本信息
主要分布在欧洲和北美的一些地区，如比利时、丹麦、法国、德国、捷克、爱尔兰、俄罗斯、波兰、斯堪的纳维亚地区以及美国等。
A.2寄主
甜菜属BetaL.。
A.3田间危害症状
主要危害甜菜植株叶部、典型的叶部病害，最初叶片上产生褐色斑点，病害发展可产生多个斑点并连成片，通常产生灰褐色病斑，边缘浅黑或褐色，病斑圆形至卵形，病斑直径4mm～7mm，病斑上产生白色霉层，被害严重的叶片变黄，然后坏死至完全干枯，发病初期
发病后期
图A.1甜菜叶斑病菌在叶片上危害照片（马亚怀提供）A.4形态特征
说明：
分生孢子梗；
分生孢子。
2Ramulariabeticola形态特征图（马亚怀提供）图A.2
SN/T4181—2015
SN/T4181—2015
说明：
附录B
（资料性附录）
Cercosporabeticola田间危害症状及病原菌形态图图B.1
Cercosporabeticola在叶片上危害照片（杨立群，2008.8）分生孢子梗：
分生孢子。
图B.2Cercosporabeticola形态特征图（杨立群，2008.8）
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