SN/T 4050—2014 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 鲍鱼疱疹病毒感染检疫技术规范 (Quarantine Protocol for infection with abalone herpesvirus) 发布日期：2014-11-19 实施日期：2015-05-01 国家质量监督检验检疫总局 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国烟台出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：赵玉然、尹伟力、蒋玉婷、郑晓聪、孙明君、郑小龙、何俊强、于力、王津津、岳志芹。 1 范围 本标准规定了鲍鱼疱疹病毒感染的临床诊断、病理组织学方法和分子生物学方法。本标准适用于鲍鱼疱疹病毒感染的诊断和监测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18088 出入境动物检疫采样 GB 19489 实验室生物安全通用要求 SN/T 1193 基因检验实验室技术要求 3 缩略语 下列缩略语适用于本文件： AbHV：鲍鱼疱疹病毒 (Abalone herpesvirus) BCIP：5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐 (5-Bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate) Ct值：荧光信号达到设定阈值所需的循环次数 (Cycle threshold value) EDTA：乙二胺四乙酸 (Ethylenediaminetetraacetic acid) NBT：氯化硝基四氮唑蓝 (Nitroblue tetrazolium chloride) PCR：聚合酶链式反应 (Polymerase chain reaction) SDS：十二烷基硫酸钠 (Sodium dodecyl sulfate) 4 试剂和材料 4.1 水：符合GB/T 6682中三级水的规格。 4.2 苏木精。 4.3 伊红。 4.4 引物（见表1）： 表1 引物序列 - AbHVORF66F1: 5'-TCC-CGG-ACA-CCA-GTA-AGA-AC-3' - AbHVORF66R1: 5'-CAA-GGC-TGC-TAT-GCG-TAT-GA-3' - AbHV66Prb1: 5'-6FAM-TGG-CCG-TCG-AGA-TGT-CCA-TG-TAMRA-3' - AbHVORF77F1: 5'-CAA-CCA-CTT-GTT-CGG-GTT-CT-3' - AbHVORF77R1: 5'-CAG-GGT-GAT-TAA-TGC-GGA-GT-3' - AbHV77Prb1: 5'-6FAM-TCC-GTA-CGC-GGG-ATC-TTC-GT-TAMRA-3' - 18SF1: 5'-CGG-CTA-CCA-CAT-CCA-AGG-AA-3' - 18SR1: 5'-GCT-GGA-ATT-ACC-GCG-GCT-3' - 18SPrb: 5'-6VIC-TGC-TGG-CAC-CAG-ACT-TGC-CCT-C-TAMRA-3' - AbHV-16: 5'-GGC-TCG-TTC-GGT-CGT-AGA-ATG-3' - AbHV-17: 5'-TCA-GCG-TGT-ACA-GAT-CCA-TGT-C-3' - AbHVORF66f1: 5'-TCC-CGG-ACA-CCA-GTA-AGA-AC-3' - AbHVORF66r2: 5'-GCC-GGT-CTT-TGA-AGG-ATC-TA-3' 4.5 EDTA。 4.6 SDS。 4.7 蛋白酶K（见附录A）。 4.8 TaqMan Fast Universal PCR MasterMix 实时PCR反应液预混液（含热启动DNA聚合酶、buffer、UNG酶）。 4.9 Taq聚合酶预混液（含Taq酶、Mg2+、dNTP、缓冲液）。 4.10 地高辛标记试剂盒。 5 仪器设备与检测环境要求 5.1 切片机。 5.2 显微镜。 5.3 PCR扩增仪。 5.4 水平电泳仪。 5.5 实时PCR仪。 5.6 检测实验室符合GB 19489的要求。 6 样品采集 参照GB/T 18088规定进行，采样应采集出现疑似临床症状或死亡的样品。 7 检测方法 7.1 临床症状观察 患病个体的临床症状主要表现为：