SN/T 4322-2015.Food contact material-Polymer materials-Determination of bisphenol A residue-Enzyme linked immunosorbent assay.
1范围
SN/T 4322规定了高分子材料中双酚A残留量的酶联免疫测定方法。
SN/T 4322适用于高分子材料中双酚A残留量的测定。
2规范性引用文 件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
试样中残留的双酚A与试剂盒中的双酚A竞争性结合已包被在板上的双酚A特异性抗体。再与随后加入的酶标二抗,形成抗原一抗-二抗复合物。复合物与显色剂发生反应,用酶标仪测定吸光度值。吸光度值与试样中双酚A残留量呈负相关。
4试剂和材 料
除另有规定外，所有试剂均采用分析纯或生化试剂,实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。
4.1双酚 A标准物质( Bisphenol A,CAS号:80-05-7):纯度≥99%。
4.2甲醇。
4.3 1X 样品提取液:试剂盒中提供8X样品提取液,使用前按照1 : 7(8X样品提取液:水)稀释,样品提取液主要成分为磷酸盐缓冲溶液(phosphatebufferedsolution)。
4.4双酚A抗试剂(一抗)。
4.5双酚 A酶标物(二抗)。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4322—2015
食品接触材料
高分子材料
双酚A残留量的测定
酶联免疫法
FoodcontactmaterialPolymermaterialsDeterminationofbisphenolAresidue-Enzymelinkedimmunosorbentassay2015-09-02发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
余展资高代
2016-04-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T4322—2015
本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、上海近岸科技有限公司本标准主要起草人：杨捷琳、缪文彬、冉晓园、朱化星、王敏、蒋伟、何宇平、潘良文、朱洪坤、吕蓉陈相、陶海华。
1范围
食品接触材料高分子材料
双酚A残留量的测定
酶联免疫法
本标准规定了高分子材料中双酚A残留量的酶联免疫测定方法。本标准适用于高分子材料中双酚A残留量的测定。2规范性引用文件
SN/T4322—2015
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
试样中残留的双酚A与试剂盒中的双酚A竞争性结合已包被在板上的双酚A特异性抗体。再与随后加入的酶标二抗，形成抗原-一抗-二抗复合物。复合物与显色剂发生反应，用酶标仪测定吸光度值。吸光度值与试样中双酚A残留量呈负相关。4试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均采用分析纯或生化试剂，实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。4.1双酚A标准物质（BisphenolA，CAS号：80-05-7）：纯度≥99%。4.2甲醇。
4.31×样品提取液：试剂盒中提供8×样品提取液，使用前按照1：7（8×样品提取液：水）稀释，样品提取液主要成分为磷酸盐缓冲溶液（phosphatebufferedsolution）。4.4双酚A抗试剂(一抗）。
双酚A酶标物（二抗）。
洗涤液（1×）：试剂盒中提供10×浓缩洗涤液，使用前按照1：9（10×浓缩洗涤液：水）稀释。4.6
底物液A液。
4.8底物液B液。
4.9终止液。
0双酚A标准工作溶液：可使用试剂盒中提供的标准工作溶液，浓度为0、0.3、1、3、10、30、100ng/mL，4.10
也可以自行配制标准工作溶液。标准工作溶液配制方法如下：准确称取50.0mg双酚A标准物质（4.1）于100mL容量瓶中，加人少量甲醇（4.2）溶解后，用甲醇定容至刻度，浓度为50mg/mL，然后根据需要的标准溶液工作浓度进行稀释。4.11双酚A酶联免疫吸附测定试剂盒（参见附录A）。1
SN/T4322—2015
5仪器和设备
酶标仪：波长450nm。
天平：感量为0.1mg。
5.3均质器。
5.4旋涡振荡器。
离心机：转速不低于4000r/min。5.6bZxz.net
注射过滤器：2mL，并带有孔径为0.45um的水相针头式过滤膜，微量单道/多道移液器：10μL
6测定方法
6.1试样提取
￥L～300μL。
将塑料制品切割或剪成长1cm、宽2mm的小段。称取（0.5士0.01)g塑料制品至玻璃管中，加入1×样品提取液（4.3)10mL，于7080℃超声提取60min；取适量的样品上清液用注射过滤器过滤。吸取300μL滤液，冷却至室温后用于酶联免疫分析。6.2酶联免疫测定
试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温（20℃～24℃)后方可使用。将测定所需的微孔条插入微孔架上，记录标准工作溶液与样液等在微孔架上的位置。分别加入50μL的标准工作溶液（4.10）和100uL
样液于对应的孔中；在每孔中加入抗（4.4），轻轻摇动微孔板以圆周运动方式混匀；室温（20℃～25℃）孵育30min；洗板3次，每次加人250μL1×洗液，最后一次尽量吸干；每孔加人150μL1×二抗（4.5）；室温（20℃~25℃）孵育80min；洗板
250μL1×洗液，最后一次尽量吸次，每次加入2
干；加入50μL的底物A溶液
夜（4.7)和
50μL的底物B溶液（4.8），室温避光显色15min；加人100μL的终止液（4.9)终止反应，10min内用波6.3平行试验
nm的酶标仪测定吸光度值。
按以上步骤，对同一标准溶液、同一样品溶液均应进行平行试验测定。6.4空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。6.5监控试验
每次测定均应做一个添加双酚A标准工作溶液（4.10）的样品，添加浓度为本方法的检测低限。7结果计算
相对吸光度值的计算
分别计算标准和样品的平均吸光值。按式（1)计算标准液和样液的相对吸光度值。A=B/B。×100%
式中：
相对吸光度值；
标准工作溶液和样液的平均吸光度值；B。
-0ng/mL标准工作溶液的平均吸光度值。7.2绘制标准工作曲线
SN/T4322—2015
以相对吸光度值为纵坐标，标准工作溶液中双酚A浓度为横坐标绘制标准曲线。每次实验均需重新绘制标准工作曲线，参见附录B。7.3试样中双酚A残留量的计算
从标准曲线上读取相对吸光度值所对应的双酚A浓度（c），按式（2)计算试样中的双酚A残留量：X-cXR
式中：
试样中双酚A残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；C
...........................(2)根据相对吸光度值查得试样中双酚A浓度，单位为微克每升（μg/L)；R——稀释倍数，其数值为20。
计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留三位有效数字确证试验
如果试样中双酚A残留量大于限量要求时，应用仪器法进行确证。9测定低限
本方法的测定低限为1ng/mL
10精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的30%。3
SN/T4322—2015
试剂盒组成
酶标板
附录A
（资料性附录）
双酚A（BisphenolA)ELISA检测试剂盒（北京华安麦科公司）\）96孔板
双酚A抗试剂(一抗）
双酚A酶标物（二抗）
标准液（Standards）（0、1、5、10、30、90ng/mL）底物液A液
底物液B液
终止液
浓缩洗涤液（10X）
双酚A浓缩样品提取液（8X）
双酚A样品稀释液
试剂盒的保存
本试剂盒应当在2℃～8℃的温度下储存，有效期为1年。如果超过3个月不使用试剂盒，请将抗和二抗放置一20℃保存。
3试剂盒验收
试剂盒到货时或放置后一段时间仍未使用时，使用前应对试剂盒进行验收核查，以确保试剂盒质量及检测结果的准确性。
1）该试剂盒可用于食品包装袋、塑料瓶等样品中双酚A残留量的定性、定量检测。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，可经实验计估后使用这些等效产品。
附录B
（资料性附录）
双酚A标准工作曲线
y=0. 248 7 Ig(x)+1. 260 2
R2=0.9873
标准工作溶液中双酚A浓度/(ng/mL)图B.1
双酚A标准工作曲线
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