SN/T4346.8—2015 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 国境口岸烈性接触性传染病卫生检疫技术规范 第8部分：实验室检测 Technical specification for health quarantine to the fulminating and highly fatal contagious diseases at frontier ports - Part 8: Laboratory detection 2015-12-04 发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 2016-07-01 实施 前言 SN/T4346《国境口岸烈性接触性传染病卫生检疫技术规范》分为10个部分： 第1部分：总则； 第2部分：风险评估与预警； 第3部分：风险交流； 第4部分：交通工具、货物及集装箱卫生检疫查验； 第5部分：人员及行李卫生检疫查验； 第6部分：境外病例转运专用包机卫生检疫； 第7部分：卫生处理； 第8部分：实验室检测； 第9部分：个人防护； 第10部分：保障。 本部分为SN/T4346的第8部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院 本部分主要起草人：李小波、林燕如、肖利力、黄吉城、孙肖红、郑夔、师永霞、冯庆文、袁帅、毕英杰。 1 范围 SN/T4346.8—2015 SN/T4346的本部分规定了国境口岸出入境人员以接触传播为主要传播途径的烈性传染病实验室检测。实验室检测流程包括样本采集、处理，实验室检验程序、方法，结果判定及相关的生物安全要求。 本部分适用于口岸出入境人员烈性接触性传染病实验室检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 19489 实验室生物安全通用要求 SN/T1439 国境口岸埃博拉病毒分子生物学检测方法 SN/T3558 马尔堡病毒RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测方法 SN/T4346.9 国境口岸烈性接触性传染病卫生检疫技术规范 第9部分：个人防护 WS/T230 聚合酶链反应（PCR）技术的应用 人间传染的病原微生物名录 3 实验室资质要求 进行本标准规定的烈性接触性传染病检测的实验室须为通过国家CNAS认可并获得国家卫生和计划生育委员会实验活动资质认定的生物安全三级实验室。实验室生物安全应符合GB 19489相关规定；聚合酶链反应（PCR）防污染措施按照WS/T230执行。 4 检测对象 出入境口岸疑似感染埃博拉出血热、马尔堡出血热等烈性接触性传染病的人员。 5 样本采集、处理 5.1 由于烈性接触性传染病传染风险大，样本采集过程存在很大的生物安全风险，一般以采集患者血样为主，采样过程中应做好个人生物安全防护。一般发病14d内，可在患者血样中检测到病毒核酸和抗原；发病10d～14d后的血样中可检出特异性抗体。 5.2 血液样本采集：静脉采集疑似病人抗凝全血5mL。样本采集、运送人员应严格按照相关规定做好个人生物安全防护，所有使用过的消耗品均须进行严格的消毒灭菌处理。 5.3 血液样本保存、运输：样本采集后，应于4℃以下生物安全送样箱中尽快送到有资质的实验室检测，或于-70℃以下保存待检。样本保存、运输过程中须严格按照国家高致病性菌、毒种相关规定进行，个人生物安全防护详见SN/T4346.9。 6 检测方法 6.1 分子生物学检测 6.1.1 适用样本范围 适用于人全血样本中烈性接触性传染病病原体核酸的检测。 6.1.2 主要仪器和设备 下列仪器和设备适用于本部分： 生物安全柜； 高压灭菌器； 普通冰箱； 水浴锅或金属浴； 冷冻离心机（带密封的离心安全杯，转速可达20000g）； 实时荧光PCR仪。 6.1.3 主要试剂 下列试剂适用于本部分： 核酸提取试剂：使用QIAGEN公司的RNA提取试剂盒QIAamp Viral RNA Mini Kit，详见说明书； 一步荧光RT-PCR反应体系构建使用AMBION公司的AgPath-ID™ One-step RT-PCR Kit试剂盒进行； TRIZOL试剂。 6.1.4 血液样本处理 在具备检测活动资质的实验室生物安全柜内，取100μL全血样本与1mL TRIZOL试剂轻柔颠倒混合（1:10比例），室温放置10min备用。