中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4545.2—2016 商品化试剂盒检测方法 沙门氏菌方法二 （2016-08-23 发布，2017-03-01 实施） 前言 本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本部分是SN/T 4545的第2部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局。本部分主要起草人：曾静、张西萌、付溥博、韩笑、王紫薇、汪琦、郑晶。 1 范围 SN/T 4545的本部分规定了食品中沙门氏菌显色培养筛选和乳胶凝集快速检测方法。本部分适用于食品中沙门氏菌的定性检测。本部分应用的显色筛选培养基可检测所有血清型的沙门氏菌；乳胶凝集反应只适用于除A群和F群外的沙门氏菌。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4789.4 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验 GB 19489 实验室生物安全通用要求 GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 SN/T 2775 商品化食品检测试剂盒评价方法 SN/T 3266 食品微生物检验方法确认技术规范 3 生物安全措施 为了保护实验室人员的安全和防止污染，应由具备资格的工作人员检测沙门氏菌。所有培养物、DNA提取物和废弃物应按照GB 19489和GB/T 27403中的有关规定执行。 4 方法原理 首先，利用显色筛选培养基来判定是否存在沙门氏菌。显色筛选培养基中添加C8酯酶和β-D-葡糖苷酶，C8酯酶在24h内使沙门氏菌呈现紫红色菌落，β-D-葡糖苷酶使非沙门氏菌呈其他颜色，即可通过菌落颜色进行判定。然后，利用乳胶凝集实验（latex agglutination test）来对除部分A群和F群以外的沙门氏菌进行确认。乳胶颗粒表面包被与除部分A群和F群以外的沙门氏菌的特异性抗原具有特异性的多价抗血清，可通过是否凝集对非A群和F群沙门氏菌进行判定，部分A群和F群沙门氏菌则需进一步实验确证。 5 试剂和材料 5.1 沙门氏菌快速检测试剂盒 本试剂盒参考SN/T 2775和SN/T 3266由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会组织评价。具体评价结果参见附录A。试剂盒组成如下： a) 缓冲蛋白陈水(BPW); b) 显色筛选培养基：伯乐生命医学产品（上海）有限公司的产品; c) 抑菌胶囊：伯乐生命医学产品（上海）有限公司的产品; d) 乳胶凝集试剂：伯乐生命医学产品（上海）有限公司的产品。 试剂盒储存于2℃～8℃，有效期14个月。 5.2 沙门氏菌质控菌株 沙门氏菌标准菌株。 5.3 仪器和设备 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： a) 冰箱：2℃~5℃; b) 恒温培养箱：41.5℃±1℃，37℃±1℃; c) 均质器、振荡器; d) 电子天平：感量0.1g; e) 无菌锥形瓶：容量500mL、250mL; f) 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头; g) 无菌培养皿：直径90mm; h) pH计或pH比色管或精密pH试纸。 7 检测程序 食品中沙门氏菌快速检测方法二的流程图见图1。 8 操作步骤 8.1 样品制备、增菌培养 称取25g（mL）样品放入盛有225mL BPW的无菌均质杯中，加入一个抑菌胶囊，以8000r/min～10000r/min均质1min~2min，或置于盛有225mL的无菌均质袋中，加入一个抑菌胶囊，用拍击式均质器拍打1min～2min，或用振荡器震荡混匀。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。测定pH值，用1mol/mL无菌氢氧化钠或盐酸调pH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中；如使用均质袋，可直接进行培养，于41.5℃±1℃下培养18h±2h。随后，使用显色筛选培养基在37℃±1℃下培养24h±2h。通过观察菌落颜色进行判定，若为阳性，则挑取可凝菌落进行乳胶凝集实验确认；若为阴性，则通过传统方法确认并报告结果。