SN/T 4545.2-2016.Commercial kit method-Salmonella-Test method II.
1范围
SN/T 4545.2规定了食品中沙门氏菌显色培养筛选和乳胶凝集快速检测方法。
SN/T 4545.2适用于食品中沙门氏菌的定性检测。
SN/T 4545.2应用的显色筛选培养基可检测所有血清型的沙门氏菌;乳胶凝集反应只适用于除A群和F群外的沙门氏菌。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 4789.4食 品安全国家标准食品 微生物学检验沙门氏菌检验
GB 19489实验室生物安 全通用要求
GB/T 27403实验室 质量控制规范食 品分子生物学检测
SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法
SN/T 3266食品 微生物检验方法确认技术规范
3生物安全措施
为了保护实验室人员的安全和防止污染,应由具备资格的工作人员检测沙门氏菌。所有培养物、DNA提取物和废弃物应按照GB19489和GB/T27403中的有关规定执行。
4方法原理
首先,利用显色筛选培养基来判定是否存在沙门氏菌,显色筛选培养基中添加C8酯酶和β-D葡糖苷酶,C8酯酶在24h内使沙门氏菌呈现紫红色菌落,β-D葡糖苷酶使非沙门氏菌呈其他颜色,即可通过菌落颜色进行判定。然后,利用乳胶凝集实验(latex agglutination test)来对除部分A群和F群以外的沙门氏菌进行确认,乳胶颗粒表面包被与除部分A群和F群以外的沙门氏菌的特异性抗原具有特异性的多价抗血清,可通过是否凝集对非A群和F群沙门氏菌进行判定,部分A群和F群沙门氏菌则需进一步实验确证。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4545.2—2016
商品化试剂盒检测方法
沙门氏菌方法二
Commercial kit methodSalmonella-Test method I2016-08-23发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-03-01实施
本部分是SN/T4545的第2部分
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草，SN/T4545.2—2016
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任，本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局，
本部分主要起草人：曾静、张西萌、付溥博、韩笑、王紫薇、汪琦、郑晶。1范围
商品化试剂盒检测方法
沙门氏菌方法二
SN/T4545.2—2016
SN/T4545的本部分规定了食品中沙门氏菌显色培养筛选和乳胶凝集快速检测方法。本部分适用于食品中沙门氏菌的定性检测。本部分应用的显色筛选培养基可检测所有血清型的沙门氏菌；乳胶凝集反应只适用于除A群和F群外的沙门氏菌。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB19489实验室生物安全通用要求GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测SN/T2775
商品化食品检测试剂盒评价方法SN/T3266
食品微生物检验方法确认技术规范3生物安全措施
为了保护实验室人员的安全和防止污染，应由具备资格的工作人员检测沙门氏菌。所有培养物、DNA提取物和废弃物应按照GB19489和GB/T27403中的有关规定执行。4方法原理
首先，利用显色筛选培养基来判定是否存在沙门氏菌，显色筛选培养基中添加C8酯酶和β-D葡糖苷酶，C8酯酶在24h内使沙门氏菌呈现紫红色菌落，β-D葡糖苷酶使非沙门氏菌呈其他颜色，即可通过菌落颜色进行判定。然后，利用乳胶凝集实验（latexagglutinationtest）来对除部分A群和F群以外的沙门氏菌进行确认，乳胶颗粒表面包被与除部分A群和F群以外的沙门氏菌的特异性抗原具有特异性的多价抗血清，可通过是否凝集对非A群和F群沙门氏菌进行判定，部分A群和F群沙门氏菌则需进一步实验确证。
5试剂和材料
5.1沙门氏菌快速检测试剂盒
本试剂盒参考SN/T2775和SN/T3266由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会组织评价。具体评价结果参见附录A。试剂盒组成如下：1
SN/T4545.2—2016
缓冲蛋白陈水(BPW)；
显色筛选培养基：伯乐生命医学产品（上海）有限公司的产品；抑菌胶囊：伯乐生命医学产品（上海）有限公司的产品；乳胶凝集试剂：伯乐生命医学产品（上海）有限公司的产品。d
试剂盒储存于2℃～8℃，有效期14个月。5.2
沙门氏菌质控菌株
沙门氏菌标准菌株。
仪器和设备
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a)
冰箱：2℃~5℃。
恒温培养箱：41.5℃±1℃，37℃±1℃。均质器、振荡器。
电子天平：感量0.1g。
无菌锥形瓶：容量500mL，250mL。无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。无菌培养皿：直径90mm。
pH计或pH比色管或精密pH试纸。7
检测程序
食品中沙门氏菌快速检测方法二的流程图见图！2
8操作步骤
8.1样品制备、增菌培养
待测样品
25g(mL)样品+BPW225mL+一个胶囊41.5℃±1℃,18h±2h
显色筛选培养基
37°C±1℃,培养24h±2h
挑取可凝菌落
传统方法确认
图1食品中沙门氏菌快速检测方法流程图称取25g（mL）样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中，加人10000r/min均质1min~2min，或置于盛有225SN/T4545.2—2016
一个抑菌胶囊，以8000r/min～
mL的无菌均质袋中，加人
一个抑菌胶囊，用拍击式
。若样品为液态，不需要均质，加人均质器拍打1min～2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。个抑菌胶囊后，震荡混勾。测定pH值，用1mol/mL无菌氢氧化钠或盐酸调pH至6.8士0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中；如使用均质袋，可直接进行培养，于41.5℃±1℃培养18h士2h。
如为冷冻产品，在45℃以下不超过15min，8.2
～5℃不超过18h解冻。
用接种环取增菌液1环，划线接种于显色筛选平板，于37℃土1℃培养24h士2h。观察平板上生长的菌落，沙门氏菌典型菌落特征为紫红色。8.3
乳胶凝集
自显色筛选培养基上挑取两个以上典型或可疑菌落，作为乳胶凝集试验用的抗原。凝集即为阳性反应，可报告阳性结果。
如凝集为阴性反应，应采用其他标准方法进行结果确认。SN/T4545.2—2016
结果判定与报告
综合以上显色筛选平板、乳胶凝集和其他确认实验的结果，报告25g（mL）样品中检出或未检出沙门氏菌。
附录A
（资料性附录）
沙门氏菌显色培养筛选和乳胶凝集快速检测试剂盒评价结果1A.1
包容性和排他性
SN/T4545.2—2016
选择100株经确认的沙门氏菌标准菌株和分离菌株，用显色培养筛选和乳胶凝集快速检测试剂盒方法进行测试，结果全部为阳性。选择30株经确认的非沙门氏菌的标准菌株，用试剂盒方法进行测试，结果全部为阴性。灵敏度、特异性、准确度及检测限A.2
选择5个食品种类，15个食品类型的样品，采用人工污染的方式分别制备未接种（L。）、低（L，）、高（L2）三个污染水平试验样品，分别用显色培养筛选和乳胶凝集快速检测方法和GB4789.4方法进行测试，相对灵敏度、特异性、准确度及检测限结果如表A.1。表A.1
食品基质
鱼与海产制品
蔬菜与水果下载标准就来标准下载网
奶制品
A.3耐变性
灵敏度、特异性、准确度及检测限相对准确度AC
相对特异性 SP
相对灵敏度SE
检出限/(CFU/g）
分别对增菌温度（正常设置为41.5℃）、增菌时间（正常设置为18h）、显色筛选平板培养温度（正常设置为37℃）和显色筛选平板培养时间（正常设置为24h）四个变量进行耐变性实验，检测结果表明，该试剂盒增菌培养温度和时间，平板培养温度和时间在一定的波动范围内，对检测结果不影响，与说明书标示相符。
A.4批间变异
取3个不同批号试剂盒分别对含目标菌和非目标菌样品进行批间变异实验，检测结果表明，该试剂盒的批间差异不显著。
1）本评价结果仅适用于伯乐生命医学产品（上海）有限公司的沙门氏菌显色培养筛选和乳胶凝集快速检测试剂盒。
SN/T4545.2-2016
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
商品化试剂盒检测方法
沙门氏菌方法二
SN/T4545.2—2016
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010)68533533
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中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*
开本880×12301/16
印张0.75字数12千字
2017年11月第一版2017年11月第一次印刷印数1—500
书号：155066·2-32121
定价16.00
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