SN/T4542.1—2016 商品化试剂盒检测方法 链霉素和双氢链霉素 Commercial kit method - Streptomycin and dihydrostreptomycin - Test method 代替SN/T2059—2008 2016-08-23发布 2017-03-01实施 国家质量监督检验检疫总局 本部分为SN/T4542的第1部分。 前言 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分代替SN/T2059—2008《进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量的测定方法 酶联免疫法》。 本部分与SN/T2059—2008主要技术变化如下： 一、标准名称改为《商品化试剂盒检测方法 链霉素和双氢链霉素方法》； 二、附录中增加了试剂盒的评价结果。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、浙江迪恩生物科技股份有限公司。 本部分主要起草人：张晓峰、邵宏宏、李可、吴娜、帅江冰、王曼子。 1 范围 SN/T4542.1—2016规定了蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素和双氢链霉素残留量的酶联免疫测定方法。本部分适用于蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素和双氢链霉素残留量的筛选检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 SN/T2775 商品化食品检测试剂盒评价方法 3 方法提要 本部分以酸性缓冲液来沉淀蜂王浆中蛋白质，提取残留的链霉素和双氢链霉素，提取液过HLB柱净化处理。净化后样液中的链霉素和双氢链霉素与酶标记链霉素共同竞争结合链霉素抗体，同时链霉素抗体结合至包被有绵羊抗兔IgG的抗体的微孔板上。通过洗涤除去未结合的链霉素、双氢链霉素和酶标记链霉素，然后加入底物显色，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出试样中链霉素和双氢链霉素的含量。 4 试剂和材料 除去另外说明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。链霉素检测试剂盒参考SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会组织评价。具体评价参见附录A。试剂盒应在4℃～8℃闭光条件下保存，溶解后的酶标记物需-15℃条件冻存。 试剂盒组成如下： a) 预包被抗体的96孔板：12条×8孔； b) 链霉素标准溶液：0ng/mL、0.5ng/mL、1.5ng/mL、4.5ng/mL、13.5ng/mL、40.5ng/mL； c) 链霉素酶标记物浓缩液：根据链霉素试剂盒中说明，可用稀释缓冲液配制成链霉素酶标记物溶液； d) 酶标物稀释液； e) 样品稀释液：根据链霉素试剂盒中说明，可用去离子水稀释成样品稀释工作液； f) 显色剂：应避免光线直照； g) 清洗液（20倍浓缩）：可用水稀释后使用； h) 反应终止液。 其他试剂： 4.1 磷酸氢二钠 4.2 磷酸二氢钾 4.3 氯化钾 4.4 氯化钠 4.5 吐温-80 4.6 磷酸 4.7 甲醇 4.8 氢氧化钠 4.9 庚烷磺酸钠 [CH₃(CH₂)₁₇]SO₃Na 4.10 磷酸钠 [Na₃PO₄·12H₂O] 4.11 SDB缓冲液：称取1.15g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，30g氯化钠，0.5mL吐温-80，用水定容至1L，用磷酸/氢氧化钠调节pH至7.5。 4.12 庚烷磺酸钠缓冲液：称取10.1g庚烷磺酸钠（4.9），11.4g磷酸钠（4.10）用水溶解并定容至1000mL，用磷酸调节pH至2.0。 4.13 10%甲醇：量取10mL甲醇（4.7）用水定容至100mL。 4.14 HLB小柱：Oasis（或相当产品），3mL（60mg）。 4.15 链霉素和双氢链霉素标准物质：纯度≥98%。 4.16 链霉素和双氢链霉素标准品溶液的配制：称取0.25g链霉素或双氢链霉素，用甲醇定容至10mL，配制成25mg/mL的储存液，于-20℃条件下保存。 5 仪器 5.1 酶标仪 5.2 8道移液器：10μL~100μL 5.3 单道移液器：10μL~100μL, 20μL~200μL