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SN/T 4542.1-2016

基本信息

标准号: SN/T 4542.1-2016

中文名称:商品化试剂盒检测方法链霉素和双氢链霉素方法一

标准类别:商检行业标准(SN)

标准状态:现行

出版语种:简体中文

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相关标签: 商品化 试剂盒 检测 方法 链霉素 双氢

标准分类号

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出版信息

相关单位信息

标准简介

SN/T 4542.1-2016.Commercial kit method-Streptomycin and dihydrostreptomycin-Test method I.
1范围
SN/T 4542.1规定了蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素和双氢链霉素残留量的酶联免疫测定方法。
SN/T 4542.1适用于蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素和双氢链霉索残留量的筛选检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法
3方法提要
本部分以酸性缓冲液来沉淀蜂王浆中蛋白质、提取残留的链霉素和双氢链霉素,提取液过HLB柱净化处理。净化后样液中的链霉素和双氢链霉素与酶标记链霖素共同竞争结合链霉素抗体,同时链霉素抗体结合至包被有绵羊抗兔IgG的抗体的微孔板上。通过洗涤除去未结合的链霉素、双氢链霉素和酶标记链霉素,然后加人底物显色,用酶标仪测定吸光度,根据吸光度值得出试样中链霉素和双氢链霉素的含量。
4试 剂和材料
除去另外说明外,所有试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1链霉素检测试剂盒参考SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会组织评价。具体评价参见附录A。试剂盒应在4℃~8℃闭光条件下保存,溶解后的酶标记物需-15℃条件冻存。试剂盒组成如下:

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标准内容

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4542.1-—2016
代替SN/T2059—2008
商品化试剂盒检测方法
链霉素和双氢链霉素
方法—
Commercialkitmethod-
Streptomycin and dihydrostreptomycin-Test method I2016-08-23发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-03-01实施
本部分为SN/T4542的第1部分。
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。SN/T4542.1—2016
本部分代替SN/T2059一2008《进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量的测定方法酶联免疫法》。
本部分与SN/T2059—2008主要技术变化如下:一标准名称改为《商品化试剂盒检测方法链霉素和双氢链霉素方法一》。
一附录中增加了试剂盒的评价结果。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位:中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、浙江迪恩生物科技股份有限公司。本部分主要起草人:张晓峰、邵宏宏、李可、吴娜、帅江冰、王曼子。1
1范围
商品化试剂盒检测方法
链霉素和双氢链霉素
方法一
SN/T4542.1—2016
SN/T4542的本部分规定了蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素和双氢链霉素残留量的酶联免疫测定方法。
本部分适用于蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素和双氢链霉素残留量的筛选检测。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T2775
3方法提要
商品化食品检测试剂盒评价方法本部分以酸性缓冲液来沉淀蜂王浆中蛋白质、提取残留的链霉素和双氢链霉素,提取液过HLB柱净化处理。净化后样液中的链霉素和双氢链霉素与酶标记链素共同竞争结合链霉素抗体,同时链霉素抗体结合至包被有绵羊抗兔IgG的抗体的微孔板上。通过洗涤除去未结合的链霉素、双氢链霉素和酶标记链霉素,然后加人底物显色,用酶标仪测定吸光度,根据吸光度值得出试样中链霉素和双氢链霉素的含量。
4试剂和材料
除去另外说明外,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。链霉素检测试剂盒参考SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会组织评4.1
价。具体评价参见附录A。试剂盒应在4℃~8℃闭光条件下保存,溶解后的酶标记物需一15℃条件冻存。试剂盒组成如下:
预包被抗体的96孔板:12条×8孔。a)
链霉素标准溶液:0ng/mL、0.5ng/mL、1.5ng/mL、4.5ng/mL、13.5ng/mL、40.5ng/mL。b)
链霉素酶标记物浓缩液:根据链霉素试剂盒中说明,可用稀释缓冲液配制成链霉素酶标记物溶液。
酶标物稀释液。
样品稀释液:根据链霉素试剂盒中说明,可用去离子水稀释成样品稀释工作液。1
SN/T4542.1—2016
显色剂应避免光线直照。
清洗液(20倍浓缩):可用水稀释后使用。g)
反应终止液。
磷酸氢二钠。
磷酸二氢钾。
氯化钾。
氯化钠。
吐温-80。
磷酸。
甲醇。
氢氧化钠。
庚烷磺酸钠CH(CH,),SONa]
磷酸钠(NasPO,·12H,O)。
SDB缓冲液:称取1.15g磷酸氢二钠,0.2g磷酸二氢钾,0.2g氯化钾,30g氯化钠,0.5mL吐温-80,用水定容至1L,用磷酸/氢氧化钠调节pH至7.5。4.13
庚烷磺酸钠缓冲液:称取10.1g庚烷磺酸钠(4.10),11.4g磷酸钠(4.11)用水溶解并定容至1000mL,用磷酸调节pH至2.0。
10%甲醇:量取10mL甲醇(4.8)用水定容至100mL。HLB小柱:Oasis(或相当产品),3mL(60mg)。链霉素和双氢链霉素标准物质:纯度≥98%。链霉素和双氢链霉素标准品溶液的配制:称取0.25g链霉素或双氢链霉素,用甲醇定容至10mL,配制成25mg/mL的储存液,于一20℃条件下保存。5仪器
酶标仪。
8道移液器:10μL~100μL。
单道移液器:10μL~100μL,20μL~200μL100μL~1000μL和2mL~10mL。混合振荡器。
高速低温离心机(15℃,6000r/min以上)。固相萃取装置。
氮吹仪
具塞试管:50mL。
电子天平:0.01g~100g。
酸度计:精确到0.1。
试样的制备和保存
试样的制备
原始样品总量不得少于200g,蜂王浆充分搅拌均匀后,将样品分成两等份;冻干粉采用四分法,将样品分成两等份。分好的样品装人洁净容器,加封并做标识。2
6.2试样的保存
试样放置一20℃~-18℃条件下保存。7分析步骤
7.1提取
SN/T4542.1-2016
称取2.0g蜂王浆样品,置于50mL具塞试管中,加人8mL庚烷磺酸钠缓冲液(4.13),充分混匀15℃条件下6000r/min离心10min直至清亮,取上层备用。HLB小柱(4.15),依次用1mL甲醇(4.8)和1mL水活化,吸取1.5mL样品提取液上柱,然后3mL水洗,1mL10%甲醇(4.14)洗柱,去除残留的液体,氮气吹2min干燥柱子。然后以2mL甲醇(4.8)洗脱,将样品收集于干净塑料试管,氮气吹干。以3mLSDB缓冲液(4.12)溶解吹干残留物,用于ELISA检测。最后稀释倍数为10。王浆冻干粉则用水以1:2比例稀释,充分浸泡(2h以上)后,称取2.0g按照上述王浆前处理方法进行提取,最后以2mLSDB缓冲液溶解吹干残留物,最后样品稀释倍数为20。7.2测定条件
7.2.1操作条件
所有操作应在室温下(20℃24℃)进行,链霉素试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温(20℃~24℃)后方可使用。
7.2.2洗板条件
人工洗涤次数5次以上,每次注水量为250μL;自动洗板可以预定5次周期。7.2.3酶标仪测定条件
酶标仪测定波长为450nm。
7.3测定步骤
7.3.1将测定需用的微孔板备齐并插入微孔架上,记录标准品及样品等在微孔架上的位置。7.3.2吸取150μL零浓度标准品于孔A1、A2;并吸取50μL零浓度标准品于孔B1、B2;分别吸取50μL链霉素标准溶液(浓度分别为:0.5ng/mL、1.5ng/mL、4.5ng/mL、13.5ng/mL、40.5ng/mL)于孔C1、C2一H1、H2;吸取50μL样品提取液于其余微孔中。测定中吸取不同的试剂和样品溶液时应更换吸头。
7.3.3分别吸取100μL链霉素酶标记物溶液于除A1、A2外的每一个微孔。7.3.4用封口膜封孔条,并持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀。7.3.5将酶标板置于20℃~25℃,避光孵育30min。7.3.6倒出孔中的液体,将微孔架反扣在吸水纸上反复拍打,以除去孔中过多的残液,但不能使微孔干燥。然后立即用洗涤缓冲液按7.2.2条件进行洗板。要注意不能使微孔干燥。7.3.7迅速加入100μL显色剂溶液于每一个微孔底部,然后持微孔板在台面上以圆周运运方式混匀后,于20℃~25℃避光孵育10min。7.3.8加人100μL反应终止液于每一个微孔,然后持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后,将微孔架置于酶标仪中,在450nm处测量吸光度(应在加人反应终止液后10min内读取吸光度)。3
SN/T4542.1-2016
7.4平行试验
按以上步骤,对同一标准溶液、同一样品溶液均应进行2孔平行试验测定。7.5空自试验
除不称取试样外,均按上述步骤进行。7.6监控试验
每次测定均应做一个添加链霉素和双氢链霉素标准溶液(4.17)的监控样品测定,以确定实验过程的操作准确性。
8结果计算
从标准品和样品的板孔的吸光度(OD)值中,减去空自孔A1、A2的平均OD值。标准品和样品的OD平均值除以零标准(B1、B2)的平均OD值,再乘以100。零标准为100%(最大百分比吸光度值),其他OD值为最大吸光度值的百分数。以百分比吸光度值为纵坐标(%),链霉素标准溶液浓度(ng/mL)为横坐标,绘制标准工作曲线。从标准工作曲线上得到试样中相应的链霉素浓度后,结果按式(1)进行计算X-cXVX1000
mX1000
式中:
·(1)
样品中链素的残留量,单位为微克每千克(ag/kg);从标准工作曲线上得到的样品中链素/双氢链霉素浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);样品溶液的最终定容体积,单位为毫升(mL):样品溶液所代表的最终试样质量,单位为克(g)。也可以用各种酶标仪的数据处理软件进行计算。所得结果表示至9确证试验www.bzxz.net
如被测样品中为阳性结果时,应用其他方法进行确证10方法性能指标
10.1检出限和定量限
检出限4.0ug/kg,定量限12.0μg/kg。10.2交叉反应率
位小数。
链霉素100%;双氢链霉素163.38%;四环素<0.1%;氨青霉素<0.1%;新霉素<0.1%;庆大霉素;卡那霉素<0.1%。
附录A
(资料性附录)
链霉素试剂盒评价结果
SN/T4542.1—2016
线性:链霉素和双氢链霉素的线性范围均为0.5ng/mL~40.5ng/mL,相关系数R≥0.98。A.1
A.2交叉反应率:链霉素100%;双氢链霉素163.38%;四环素<0.1%;氨苄青霉素<0.1%;新霉素<0.1%;庆大霉素;卡那霉素<0.1%。A.3检出限和定量限:链霉素和双氢链霉素的检出限均为4.0μg/kg,定量限均为12.0μg/kg。1)本评价结果仅适用于浙江迪恩生物科技股份有限公司的链霉素试剂盒S
SN/T4542.1-2016
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
商品化试剂盒检测方法
链霉素和双氢链霉素
方法一
SN/T4542.1—2016
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号(100029)北京市西城区三里河北街16号(100045)总编室:(010)68533533
网址spc.net.cn
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*
开本880×12301/16印张0.75字数12千字2017年12月第一版2017年12月第一次印刷印数1-500
书号:155066·2-32441
定价16.00元
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