SN/T 4575-2016.Determination of multiple prohibited and restricted colorants in cosmetics for export-HPLC method and LC-MS/MS method.
1范围
SN/T 4575规定了化妆品中颜料橙5、酸性黄36、颜料红53、酸性紫49、罗丹明B、溶剂蓝35、苏丹红I、苏丹红II、苏丹红IV、分散黄3和颜料红57的高效液相色谱测定方法和化妆品中颜料橙5.酸性黄36、颜料红53、酸性紫49、罗丹明B、结晶紫、溶剂蓝35、苏丹红工、苏丹红II、苏丹红IV、分散黄3和颜料红57的液相色谱串联质谱测定方法
SN/T 4575适用于指甲油、眼影和唇膏中颜料橙5、酸性黄36、颜料红53、酸性紫49.罗丹明B、溶剂蓝35、苏丹红I、苏丹红II、苏丹红IV、分散黄3和颜料红57的高效液相色谱检测及指甲油.眼影和唇膏中颜料橙5、酸性黄36、颜料红53、酸性紫49、罗丹明B、结晶紫、溶剂蓝35、苏丹红I、 苏丹红I、苏丹红IV、分散黄3和颜料红57的液相色谱-串联质谱检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
第一法液相色谱-串联质谱法
3方法提要
用四氢呋喃(THF)、二甲基亚砜(DMSO)和甲醇提取试样中的着色剂,HLB固相萃取柱净化或直接浓缩后定容,过0.22μm滤膜后、用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一-级水。
4.1四氢呋喃(THF):液相色谱级。
4.2二甲基亚砜(DMSO):液相色谱级。
4.3甲 醇:液相色谱级。
4.4乙腈:液相色谱级。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4575—2016
出口化妆品中多种禁限用着色剂的测定高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法Determination of multiple prohibited and restricted colorants incosmeticsforexportHPLCmethodandLC-MS/MSmethod2016-08-23发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-03-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。SN/T4575—2016
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心。本标准主要起草人：刘海山、吕春华、叶有标、蒋沁婷、朱晓雨、陈笑梅1范围
出口化妆品中多种禁限用着色剂的测定高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法SN/T4575—2016
本标准规定了化妆品中颜料橙5、酸性黄36、颜料红53、酸性紫49、罗丹明B、溶剂蓝35、苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红IV、分散黄3和颜料红57的高效液相色谱测定方法和化妆品中颜料橙5、酸性黄36、颜料红53、酸性紫49、罗丹明B、结晶紫、溶剂蓝35、苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红IV、分散黄3和颜料红57的液相色谱-串联质谱测定方法本标准适用于指甲油、眼影和膏中颜料橙5、酸性黄36、颜料红53、酸性紫49、罗丹明B、溶剂蓝35、苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红IV、分散黄3和颜料红57的高效液相色谱检测及指甲油、眼影和唇膏中颜料橙5、酸性黄36、颜料红53、酸性紫49、罗丹明B、结晶紫、溶剂蓝35、苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红IV、分散黄3和颜料红57的液相色谱-串联质谱检测。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法第
3方法提要
液相色谱-串联质谱法
用四氢呋喃（THF）、二甲基亚（DMSO)和甲醇提取试样中的着色剂，HLB固相萃取柱净化或直接浓缩后定容，过0.22μm滤膜后用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。四氢呋喃（THF）：液相色谱级。4.1
二甲基亚矾（DMSO)：液相色谱级。甲醇：液相色谱级。
乙腈：液相色谱级。
甲酸：液相色谱级。
6乙酸铵。
4.70.02mol/L乙酸铵溶液（pH=4.60）：称取0.77g乙酸铵（4.6），用水溶解并定容至500mL，用甲酸（4.5）凋节pH值至4.60。
4.8甲醇-0.02mol/L乙酸铵溶液（1+3，体积比）：取100mL甲醇（4.3），与300mL0.02mol/L乙酸铵溶液（4.7)混匀。
4.90.05%甲酸溶液：准确移取0.5mL甲酸（4.5），用水溶解并定容至1000mL。1
SN/T4575-2016
0乙睛-0.05%甲酸溶液（4+1，体积比）：取80mL乙腈（4.4)，与20mL0.05%甲酸溶液（4.9）混勾。4.10
4.11着色剂标准品：颜料红57（纯度大于或等于99.0%）、颜料红53：1（纯度大于或等于90.0%）、颜料橙5（纯度大于或等于97.0%）、苏丹红I（纯度大于或等于90.0%）、苏丹红Ⅱ（纯度大于或等于87.0%）、苏丹红IV（纯度大于或等于94.0%）、罗丹明B（纯度大于或等于95.0%）、结晶紫（纯度大于或等于92.5%）、酸性黄36（纯度大于或等于99.0%）、分散黄3（纯度大于或等于30.0%）、酸性紫49（纯度大于或等于90.5%）、溶剂蓝35（纯度大于或等于99.0%）。标准物质详细信息见表A.14.12着色剂标准储备溶液：准确称取适量着色剂标准品（折合成目标化合物），颜料红57、颜料红53：1用DMSO溶解并配制成浓度为500μg/mL的标准储备溶液；颜料橙5用THF溶解并配制成200μg/mL的标准储备溶液；苏丹红1、苏丹红Ⅱ、苏丹红NV用THF溶解并配制成500μg/mL的标储备溶液；罗丹明B、结晶紫、酸性黄36、酸性紫49用甲醇溶解并配制成1000μg/mL的标准储备溶液；分散黄3和溶剂蓝35用甲醇溶解并配制成500g/mL的标准储备溶液，一18℃以下避光保存。4.13混合标准中间溶液：根据需要，用甲醇（较高浓度可加入少量四氢味哺）将标准储备液（4.12）稀释成适当浓度的标准中间溶液，0℃～4℃避光保存4.14基质混合标准工作溶液：根据需要，将混合标准中间溶液（4.13）用空白样品溶液稀释至适当浓度的标准工作溶液，现配现用，供液相色谱-质谱/质谱测定时使用。4.15N-乙烯吡咯烷酮-二乙烯基苯共聚硅质填料固相萃取柱（60mg，3mL)\，或相当者。使用前依次用3mL乙睛和3mL水预处理，保持柱体湿润。50.22um亲水性聚四氟乙烯滤膜。4.16
仪器和设备
液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI)。5.2分析天平：感量0.0001g和0.001g。5.3
涡旋混匀器。
5.4超声波清洗器：工作频率不低于30kHz。5.5离心机：转速不低于8500r/min。5.6旋转蒸发仪。
pH计。
固相萃取装置。
氮吹仪。
6测定步骤
6.1提取
称取0.5g试样（精确至0.001g），置于10mL比色管中，加人2mL四氢呋喃（4.1），涡旋混匀2min，加入1mL二甲基亚（4.2），涡旋混匀后超声提取15min，再加入7mL甲醇，混匀后超声提取15min，冷却至室温，用甲醇定容至10mL，并将全部溶液转移至50mL离心管中，以8500r/min离心10min，取上清液待净化
1）OasisHLB固相萃取柱（60mg，3mL）是适合的市售产品的实例。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对这一产品的认可。2
6.2净化
SN/T4575—2016
油状样品：准确移取400uL的提取液（6.1）至平底烧瓶中.40℃以下浓缩于.准确加入1mL乙睛0.05%甲酸溶液（4.10），涡旋使其充分溶解，过0.22μm滤膜（4.16）后供液相色谱-串联质谱测定。粉状和膏状样品：取400μL的提取液（6.1），加人3mL甲醇-0.02mol/L乙酸铵溶液（4.8），转移至固相萃取柱（4.15）。控制流速小于2mL/min，依次用3mL甲醇-0.02mol/L乙酸铵溶液（4.8）、3mL水淋洗，弃去全部淋出液。减压抽干后用8mL乙洗脱，收集洗脱液，40℃以下氮气吹干，准确加入1mL乙睛-0.05%甲酸溶液（4.10），涡旋使其充分溶解，过0.22μm滤膜（4.16）后供液相色谱-串联质谱测定。
6.3测定
参考色谱条件
色谱柱：C18柱，50mm×2.1mm（内径），粒度1.7um，或相当的色谱柱。流动相：梯度洗脱条件见表1。
流速：0.3mL/min。
进样量：5μL。
柱温：40℃。
质谱条件
离子源：电喷雾离子源。
扫描方式：多反应监测（MRM)。其他质谱条件参见附录B。
定性测定
梯度洗脱条件
0.05%甲酸
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，样品的质量色谱峰保留时间与标准品中对应的保留时间一致；且样品中各组分定性离子的相对丰度与接近浓度的标准工作溶液中相应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对应的被测物。3
SN/T4575—2016
相对离子丰度
允许的相对偏差
6.3.4定量测定
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差>50
>20~50
>10~20
在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样测定，以待测物的浓度为横坐标，以待测物的峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线按外标法对待测样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，待测着色剂的参考保留时间参见表C.1，待测着色剂的多反应监测（MRM)色谱图参见图C.16.4空白试验
除不加试样外，均按上述步骤进行结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中待测着色剂的含量.计算结果须扣除空白值。G,XVX1000
式中：
试样中待测着色剂的含量，单位为毫克每于（mg/kg）
基质混合标准工作液中待测着色剂的浓度·单位为微克每毫升（μg/mL）；样液最终定容体积，单位为毫升（ml最终样液所代表的试样量单位
8测定低限、回收率
8.1测定低限
本方法对化妆品中罗丹明B、结晶紫、溶剂蓝35的测定低限为0.025mg/kg，对化妆品中酸性黄36、分散黄3、颜料橙5、苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红IV的测定低限为0.5mg/kg，对化妆品中颜料红53、颜料红57、酸性紫49的测定低限为2.0mg/kg。8.2回收率
在眼影、唇膏和指甲油样品中添加待测着色剂的浓度为0.025mg/kg~20mg/kg时，液相色谱-串联质谱法测定的回收率范围见表3。4
SN/T4575—2016
液相色谱-串联质谱法测定眼影、唇膏和指甲油样品中待测着色剂的回收率范围添加浓度
待测物
酸性黄36
分散黄3
颜料红57
颜料红53
颜料橙5
苏丹红I
苏丹红Ⅱ
苏丹红IV
罗丹明B
结晶紫
酸性紫49
84.8~101.7
87.1~105.5
87.5104.6
85.0~104.6
90.8~106.8
84.2~104.0
95.2~106.9
88.2~106.6
85.3~99.8
99.7106.8
86.0~103.6
9.1~107.0
89.2~104.9
88.6~103.8
83.9~105.7
86.7~106.7
90.2~106.8bzxz.net
84.6~103.5
86.5~104.7
84.7~106.8
85.1~106.6
95.2~105.8
88.2~105.8
92.5~106.7
94.5~106.4
回收率范围
84.9~103.7
96.2~105.9
93.4~106.0
91.1~104.9
96.0~105.0
89.8-104.6
89.4~102.2
82.5~102.2
84.6~101.8
89.6~101.0
84.0~94.4
84.0~98.2
85.5~94.1
84.6~98.8
85.3101.9
85.0~98.3
87.9~102.1
88.5~102.4
91.9~102.7
指甲油
82.8~102.0
93.8~102.5
89.1103.1
82.4~102.2
85.9103.0
87.0~100.5
87.2101.7
84.4~97.1
86.7~99.6
82.4~99.8
85.7~103.7
87.7103.3
83.3~102.6
85.2~103.5
88.6~103.9
82.0~103.9
87.4~105.0
87.1~102.8
82.5104.8
83.1~104.9
85.2~97.4
86.1~99.2
90.2~105.0
85.2~97.2
83.0103.7
91.3~104.7
87.4~103.9
82.1~104.6
83.6~102.3
90.1~104.2
82.6~104.2
85.3~105.0
94.4~104.2
SN/T4575—2016
待测物
溶剂蓝35
9方法提要
添加浓度
表3（续）
83.5~102.3
84.4~104.8
87.1~104.9
高效液相色谱法
第二法
回收率范围
82.1~101.6
97.1~103.0
指甲油
89.5~104.1
89.2~104.9
95.5~105.0
用四氢呋喃（THF）、二甲基亚(DMSO)和甲醇提取试样中的着色剂，高速离心净化，过0.22μm滤膜后，用高效液相色谱仪测定，外标法定量。试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。四氢呋喃（THF）：液相色谱级，10.1
二甲基亚砜（DMSO)：液相色谱级。甲醇：液相色谱级。
乙腈：液相色谱级。
乙酸铵：液相色谱级。
甲酸：液相色谱级。
0.05%甲酸溶液：移取0.5mL甲酸（10.6），用水稀释并定容至1000mL10.8着色剂标准品：颜料红57（纯度大于或等于99.0%）、颜料红53：1（纯度大于或等于90.0%）、颜料橙5（纯度大于或等于97.0%）、苏丹红I（纯度大于或等于90.0%）、苏丹红Ⅱ（纯度大于或等于87.0%）、苏丹红IV（纯度大于或等于94.0%）、罗丹明B（纯度大于或等于95.0%）、酸性黄36（纯度大于或等于99.0%）、分散黄3（纯度大于或等于30.0%）、酸性紫49（纯度大于或等于90.5%）、溶剂蓝35（纯度大于或等于99.0%）。标准物质详细信息见表A.1。10.9着色剂标准储备溶液：准确称取适量着色剂标准品（折合成目标化合物），颜料红57、颜料红53：1用DMSO(10.2)溶解并配制成浓度为500μg/mL的标准储备溶液；颜料橙5用THF（10.1)溶解并配制成200μg/mL的标准储备溶液；苏丹红Ⅱ、苏丹红IV用THF溶解并配制成500μg/mL的标准储备溶液；罗丹明B、酸性黄36、酸性紫49用甲醇溶解并配制成1000μg/mL的标准储备溶液；分散黄3和溶剂蓝35用甲醇溶解并配制成500μg/mL的标准储备溶液，一18℃以下避光保存。10.10混合标准工作溶液：根据需要，用甲醇（较高浓度可加人少量四氢呋喃）将标准储备液（10.9）稀释成适当浓度的标准工作溶液，0℃～4℃避光保存。10.110.22μm亲水性聚四氟乙烯滤膜。6
仪器和设备
高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器。11.2
分析天平：感量0.0001g和0.001g。涡旋混勾器。
超声波清洗器，工作频率不低于30kHz。离心机：转速不低于8500r/min。测定步骤
12.1提取
SN/T4575—2016
称取0.5g试样（精确至0.001g），置于10mL比色管中。加入2.0mL四氢呋喃（10.1），涡旋混匀2min，加人1.0mL二甲基亚（10.2），涡旋混匀后超声提取15min，再加人7.0mL甲醇，混匀后超声提取15min，冷却至室温，用甲醇定容至10.0mL，并将全部溶液转移至50.0mL离心管中，以8500r/min离心10min。取上清液过0.22μm滤膜（10.11)后供高效液相色谱分析。12.2测定
色谱条件
色谱柱：Cls柱，150mmX4.6mm（内径），粒度3.5uμm，或相当的色谱柱。流动相：梯度洗脱条件见表4。
梯度洗脱条件
流速：1.0mL/min。
0.05%甲酸溶液
检测波长：酸性黄36和分散黄3为417nm；颜料红53、颜料橙5、苏丹红I、苏丹红Ⅱ为485nm；颜料红57和苏丹红IV为485nm；罗丹明B为550nm；酸性紫49和溶剂蓝35为590nm。12.2.1.5进样量：10μL。
柱温：室温。
色谱测定
在仪器最佳工作条件下，对混合标准工作溶液进样测定，以待测物的浓度为横坐标，以待测物的峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线按外标法对待测样品进行定量，样品溶液中待测物的7
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