SN/T 4638-2016.Detection and identification of Cochlicella acuta (Miller, 1774).
1范围
SN/T 4638规定了尖头旋蜗牛Cochlicella acuta (Miller,1774)的检疫鉴定方法。
SN/T 4638适用于尖头旋蜗牛的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注文件的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T 3067- 2011软体动物常规检疫规范
3术语与定义
SN/T 3067界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
3.1鞭状体flagellum
蜗牛雄性生殖系统中的附器，一般在阴茎本体末端分枝形成鞭状体。
注:鞭状体的有无和形态常用于分类。
3.2阴茎鞘penial sheath
阴茎外围一薄层,紧贴于阴茎。
3.3贮液囊reservoir
受精囊的附属器,着生于受精囊与受精囊柄连接处,用于贮存外来精液。
3.4缝合线suture
蜗牛贝壳各螺层之间下陷的连接处。缝合线有深有浅,有简单的或锯齿形的,这些特征常用于分类鉴定。
3.5螺轴columella
蜗牛贝壳的旋转中轴即称螺轴。
3.6轴唇columella lip
贝壳壳口的边缘为口唇,按其在壳口中的位置不同可分为内唇、外唇、轴唇、基唇、上唇和下唇,靠近螺轴的部位。
注:有些种类的轴唇常外折导致脐孔部分或完全被覆盖。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4638—2016
尖头旋蜗牛检疫鉴定方法
Detectionandidentification of Cochlicellaacuta(Miller,1774)2016-08-23发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-03-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T4638—2016
本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、中华人民共和国中山出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国宁波出人境检验检疫局、中华人民共和国张家港出人境检验检疫局。本标准主要起草人：王沛、周卫川、黄蓬英、王章根、徐浪、崔俊霞、陆军、林阳武。I
尖头旋蜗牛检疫鉴定方法
本标准规定了尖头旋蜗牛Cochlicellaacuta（Muller，1774）的检疫鉴定方法。本标准适用于尖头旋蜗牛的检疫鉴定。2
规范性引用文件
SN/T4638—2016
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注文件的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T3067—2011软体动物常规检疫规范3术语与定义
SN/T3067界定的以及下列术语和定义适用于本文件3.1
鞭状体flagellum
蜗牛雄性生殖系统中的附器，一般在阴茎本体末端分枝形成鞭状体，注：鞭状体的有无和形态常用于分类。3.2
阴茎鞘penial sheath
阴茎外围一薄层，紧贴于阴茎。3.3
购液囊
reservoir
受精囊的附属器，着生于受精囊与受精囊柄连接处，用于贮存外来精液3.4
缝合线suture免费标准bzxz.net
蜗牛贝壳各螺层之间下陷的连接处。缝合线有深有浅，有简单的或锯齿形的，这些特征常用于分类鉴定。
螺轴columella
蜗牛贝壳的旋转中轴即称螺轴。3.6
轴唇columellalip
贝壳壳口的边缘为口唇，按其在壳口中的位置不同可分为内唇、外唇、轴唇、基唇、上唇和下唇，靠近螺轴的部位，
注：有些种类的轴唇常外折导致脐孔部分或完全被覆盖。4基本信息
学名：Cochlicellaacuta（Muller，1774）SN/T4638—2016
异名：HeliracutaMuller，1774英文名：Pointed snail,Conical snail俗名：尖头蜗牛、圆锥蜗牛
分类地位：软体动物门Mollusca，腹足纲Gastropoda，柄眼目Stylommatophora，旋蜗牛科Cochli-cellidaeSchileyko，1972，旋蜗牛属CochlicellaFerussac，1821。尖头旋蜗牛同属的近似种有巴布拉旋蜗牛C.barbara（Linnaeus，1758）、圆锥旋蜗牛C.conoidea（Draparnaud，1801）。尖头旋蜗牛的其他信息参见附录A。
5方法原理
尖头旋蜗牛主要通过运输工具、木质包装材料和污染的农副产品远距离传播，污染的谷物、油菜籽和柑橘类水果是其最重要的传播媒介。其传播特点是不需要特定的寄主，凡接触过地面的物品都有可能传播。传播方式和传播途径是确定现场检疫方式的依据。贝壳形态、解剖结构和分子生物学特征是实验室鉴定的主要依据。
6器具和药品
6.1仪器和用具
设备：体视显微镜、微型离心机、恒温金属浴、PCR仪、凝胶照相系统。器具：放大镜、手电筒、塑料自封袋、广口标本瓶、4mm孔径土壤筛、小铁铲、游标卡尺、塘瓷盘、培养皿、镊子、剪刀、小剪刀、显微镊子、显微剪刀、微针（直径0.15mm）、解剖蜡盘、标签、1.5mL离心管、0.2mLPCR反应管、移液器。
药品和试剂
除另有规定外，所有试剂均为分析纯。75%乙醇、无水乙醇、硫酸镁、DNA提取试剂盒、PCRMasterMix、ddHzO。7现场检疫
对来自疫区（参见附录A）的运输工具和货物实施重点查验。仔细检查运输工具、木质包装物、未经加工的植物性材料、大麦、小麦、油菜籽、水果、牧草等是否有蜗牛附着其上，尖头旋蜗牛叠伏夜出，尤其要注意阴暗蔽光处的检查，用手电筒仔细寻找蜗牛的行迹。蜗牛爬行过后，一般会留下银灰色的丝带状黏液痕迹，这是判定是否有蜗牛污染的重要依据。发现蜗牛，随时装人塑料自封袋或标本瓶带回实验室做进一步的检验鉴定。发现盆景等携带土壤或其他细碎衬垫材料时，需过筛检查是否有卵或幼螺。8实验室鉴定
8.1测量、观察、解剖和饲养
用游标卡尺测量蜗牛贝壳的壳高和壳宽、壳口高和壳口宽、卵粒直径。用肉眼或放大镜或体视显微镜仔细观察卵和螺的形态特征。将杀处理（见10.1)后的标本，参照SN/T3067一2011中8.3.1进行软体解剖，分离出生殖系统单独查获的卵粒，参照SN/T3067一2011中8.4方法，将其孵化和饲养为成螺后，再做鉴定。2
8.2旋蜗牛属CochlicellaFerussac，1821鉴定特征SN/T4638—2016
贝壳较小，高塔形，颜色多变。壳质薄易碎。壳口简单，椭圆形。脐孔微小，几乎完全被反折的轴唇所覆盖。体螺层周缘下常有黑褐色螺旋状色带。阴茎本体很长，阴茎具有长短不一的鞭状体。8.3尖头旋蜗牛Cochlicellaacuta（Miller，1774）鉴定特征8.3.1卵
白色，圆球形，直径约1.0mm。
8.3.2贝壳
8.3.2.1成螺
壳高10mm~20mm，壳宽5mm~8mm，呈高塔形，有8个~10个螺层和锯齿状的缝合线。壳质薄易碎。壳顶尖，褐色。壳口椭圆形，壳口高超过壳口宽的长度，无环唇肋。轴向刻纹由生长线构成，脐孔微小，几乎完全被反折的轴唇所覆盖。在同一种群的个体间，壳面颜色差异很大，基色为纯白色至浅黄色，体螺层周缘下常有黑褐色螺旋状色带。壳面基色与螺轴反圈形成的淡褐色或黑褐色条带相重叠或分隔，产生特殊的斑驳色块。（参见附录B中图B.1）8.3.2.2幼螺
幼螺贝壳在外部形态上与成螺无太大差异，只是个体小，壳质更薄，在体螺层周缘有明显的棱角状外突，成螺则无此特征。
8.3.3螺体
动物呈淡黄色，背部从领到头部间有一条黑色的中线，头部两侧至前触角间各有一条黑线，为触角收缩肌。动物常以黏液附着在植株上栖息。（参见图B.2）8.3.4生殖系统
爪薄，部分隐藏。生殖腔非常短。输精管相当长，从端部斜插人阴茎本体。阴茎十分肿胀，膨大呈棍棒状，其宽度是阴茎本体4倍～5倍，阴茎鞘明显，阴茎本体较长。矢囊很长，壁厚。粘液腺一枝，分为两个树权。受精囊柄基部肿胀，受精囊小。（参见图B.3）Cochlicella和Prietocella解剖特征的不同在于：前者鞭状体较长，而后者较短或仅留痕迹8.3.5COI基因序列鉴定
按附录C方法提取DNA、PCR扩增和双向测序，将所测序列与Genbank登录号为KP233843已知尖头旋蜗牛的标准COI基因序列进行比对，相似度一般应≥95%。9结果评定
以贝壳形态为基本鉴定依据，螺体和生殖系统解剖形态为辅助鉴定特征，并注意与近似种鉴别（参见附录D)，对于贝壳特征典型的个体符合8.3.2鉴定为尖头旋蜗牛C.acuta（Muller，1774），对于贝壳特征有变异的个体，需同时符合8.3.2、8.3.3和8.3.4才能鉴定为尖头旋蜗牛C.acuta（Muller，1774）。符合8.3.5作为前期初筛或形态鉴定结果的分子佐证。3
SN/T4638—2016
10标本处理和保存
标本处理
将蜗牛置于盛满水的瓶中，盖上瓶盖，进行闷杀，蜗牛在慢慢室息的死亡过程中，逐渐伸展身体；或逐渐加人少量硫酸镁，进行麻醉闷杀。将闷杀后伸展的蜗牛标本置于无水乙醇中浸泡1d～2d，然后在75%的乙醇溶液中固定，每隔1d～2d换1次乙醇溶液，共换3次～4次，便可长期保存于75%的乙醇溶液中。解剖后的生殖系统可直接保存于75%的乙醇溶液中。
保存时间
6个月，并注明时间、产地、寄主、采集人等信息。经处理后的标本，至少妥善保存6S
A.1寄主
附录A
（资料性附录）
尖头旋蜗牛的寄主、地理分布及其他信息SN/T4638—2016
杂食性，幼螺以腐植质和植物的幼苗和嫩芽为食，成螺取食各种绿色植物的茎和叶。2地理分布
尖头旋蜗牛主要分布在地中海东部地区：希腊、以色列、埃及：欧洲西南及西部的大部分国家：西班牙、法国、比利时、荷兰；不列颠群岛：英格兰南部和西部沿海、威尔土、苏格兰、爱尔兰。传入地区：澳大利亚南部、美国。A.3生物学与危害性
尖头旋蜗牛对禾谷类作物、柑橘类和葡萄类水果以及豆科牧草危害特别严重，已被美国、澳大利亚、日本等国列为检疫性有害生物。1996年，美国从澳大利亚进境的一艘柑橘类水果船上截获大量尖头旋蜗牛，从而导致美国对澳大利亚进境的水果实施100%的强制性检疫，据澳方2009年统计：2006年～2008年美国各口岸多次检出尖头旋蜗牛，只要检出一头小蜗牛，同批次所有货物都要实施熏蒸处理，使部评估尖头旋蜗牛为第三大危害最为严重的螺类之澳大利亚出口柑橘严重受挫。2002年，美国农业一。尖头旋蜗牛起源于西欧，于19世纪来
天20世纪初传人澳大利亚·之后在澳大利亚南部塔斯马尼亚、维多利亚和新南威尔士等州的果园和牧场大暴发，现在正向其他地区扩散危害，对农牧业生产造成巨大损失。由于美国、日本等国家对其实施检疫，严重影响澳大利亚农副产品对北美和亚洲的出口贸易。另aima cribbi的中间寄主
外，尖头旋蜗牛也是人畜共患肺吸虫BBrachyla
严重危
及人类和家畜的健康。
SN/T4638—2016
附录B
（资料性附录）
尖头旋蜗牛形态特征
尖头旋蜗牛形态特征见图B.1、图B.2和图B.3。图B.1成螺贝壳形态特征（A：正侧面观，B：背侧面观）图B.2尖头旋蜗牛生态图（附着在植株上栖息；引自internet）SN/T4638—2016
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。