SN/T 4632-2016.Detection and identification of Zucchini yellow mosaic virus.
1范围
SN/T 4632规定了小西葫芦黄花叶病毒的检疫鉴定方法。
SN/T 4632适用于进出境种子、苗木、组培苗等植物性繁殖材料及新鲜或保鲜瓜果中小西葫芦黄花叶病毒的检疫鉴定。
2规范性引用 文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T 1840植物病毒 免疫电镜检测方法
SN/T 2122进 出境植物及植物产品检疫抽样方法
3小西葫芦黄花叶病毒基本信息
学名:Zucchini yellow mosaic virus
缩写:ZYMV
分类地位:马铃薯Y病毒科(Potyviridae)、马铃薯Y病毒属( Potyvirus)
其他信息参见附录A。
4方法原理
小西葫芦黄花叶病毒的血清学特性和分子生物学特性是检疫鉴定的主要依据。
5仪器设备和主要试剂
5.1 仪器设备
酶联检测仪、天平(感量:1/10 000 g)、pH计(测量精度:±0.05 pH)、微量榨汁机、高速冷冻离心机、植物光照培养箱(温度可调范围0 °C~50 °C)、隔离温室、透射电子显微镜(放大倍数:20万倍)、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、恒温水浴锅、低温冰箱等。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4632—2016
小西葫芦黄花叶病毒检疫鉴定方法Detection and identification of Zucchini yellow mosaic virus2016-08-23发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-03-01实施
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
小西葫芦黄花叶病毒检疫鉴定方法SN/T4632—2016
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010)68533533
网址spc.net.cn
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*
开本880×12301/16印张1字数26千字2017年12月第一版2017年12月第一次印刷印数1-500
书号：155066·2-32378
定价21.00
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T4632-2016
本标准起草单位：中华人民共和国河南出人境检验检疫局、中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、广西大学、中国农业科学院郑州果树研究所。本标准起草人：赵忠懿、韩英、李萌、宋南、廖富荣、朱英芝、彭发青、代玉华、吴会杰。I
1范围
小西葫芦黄花叶病毒检疫鉴定方法本标准规定了小西葫芦黄花叶病毒的检疫鉴定方法。SN/T4632—2016
本标准适用于进出境种子、苗木、组培苗等植物性繁殖材料及新鲜或保鲜瓜果中小西葫芦黄花叶病毒的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T1840植物病毒免疫电镜检测方法SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样方法3小西葫芦黄花叶病毒基本信息
学名：Zucchiniyellowmosaicvirus缩写：ZYMV
分类地位：马铃薯Y病毒科（Potyviridae）、马铃薯Y病毒属（Potyvirus）其他信息参见附录A。
方法原理
小西葫芦黄花叶病毒的血清学特性和分子生物学特性是检疫鉴定的主要依据。5仪器设备和主要试剂
5.1仪器设备
酶联检测仪、天平（感量：1/10000g）、pH计（测量精度：士0.05pH)、微量榨汁机、高速冷冻离心机、植物光照培养箱（温度可调范围0℃～50℃）、隔离温室、透射电子显微镜（放大倍数：20万倍）、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、恒温水浴锅、低温冰箱等。5.2用具
微量移液器（2.5uL、10μL、20μL、100μL、200μL、1000μL）、酶联板、研钵、eppendorf管、铜网（40o目）、滴管、尖头小镊子、Whatman滤纸、塑料培养皿、洁净玻璃片、Parafilm、花盆、灭菌土等。5.3主要试剂
酶联免疫吸附测定试剂(见附录B)、RT-PCR检测试剂(见附录C)。1
SN/T4632-—2016
6抽样与样品制备
6.1抽样
按照SN/T2122的规定执行。
6.2样品制备
6.2.1种子样品
将种子播于灭菌土中，于25℃生长并进行症状观察。待长出3片～4片叶后将表现症状的植株编号，未表现症状的植株分组（10株为1组）并编号。采集叶片进行酶联免疫吸附测定及RT-PCR检测。6.2.2苗木样品
将苗木种植于隔离温室中，于25C生长并进行症状观察。有症状的苗木或种薯单独检测。没有症状的分组检测，分组方法和检测方法同6.2.1。6.2.3组培苗样品
直接取组培苗进行分组和检测，方法同6.2.1。6.2.4瓜果样品
直接取新鲜或保鲜瓜果样品（重点选取带有畸形、变色等病毒病症状的样品）进行分组和检测，方法同6.2.1。
检测方法
7.1酶联免疫吸附测定
见附录B。
7.2免疫电镜检测
按照SN/T1840的规定执行。
7.3RT-PCR检测
见附录C。
8结果判定
酶联免疫吸附测定或免疫电镜检测为阳性，RT-PCR检测亦为阳性，可判定待检样品带有小西葫芦黄花叶病毒。
9样品保存
9.1样品保存
经检验确定携带小西葫芦黄花叶病毒的种子保存在4℃，病株在－20℃或者－80℃冰箱中保存，2
做好标记和登记工作。
结果记录与资料保存
SN/T4632—2016
完整的实验记录包括：样品的来源、种类、时间、实验时间、地点、方法和结果等，并要有经手人和实验人员的签字。酶联测定需有酶联板反应的原始数据，RT-PCR检测需有电泳结果图片。3
SN/T4632—2016
A.1寄主范围
（资料性附录）
小西葫芦黄花叶病毒其他相关信息ZYMV主要侵染葫芦科植物，也可侵染苋科、豆科、菊科、藜科、唇形科、伞形科、玄参科、毛科和番杏科等9个科的部分植物。
2病害症状bzxZ.net
被ZYMV侵染的葫芦科植物，叶片大多黄化并带有严重花叶、畸形等症状，果实常表现为颜色改变或严重畸形（图A.1)
ZYMV在特定寄主上引起的症状与病毒株系密切相关，不同株系病毒在寄主植物上引起的症状、发病症状程度均有差异。ZYMV引起症状类型还与环境条件相关。3分布
国外：意大利、法国、德国、西班牙、英国、美国、日本及澳大利亚等50多个国家和地区。国内：新疆、河南、陕西、河北、山西、北京、广州、浙江及广西等省市。传播方式
主要通过蚜虫以非持久性方式传播，通过种子、苗木等繁殖材料及果实进行远距离传播5粒子形态
线状，长约750nm。
5基因组
ZYMV的基因组为一条由9593个核苷酸组成的正义单链RNA，基因组翻译的起始位点始于第140位核苷酸，结束于第9379位核苷酸，编码一个大的多聚蛋白。ZYMV的外壳蛋白由837个核苷酸编码，核苷酸位点始于第8546位核苷酸，结束于9382位核苷酸。4
说明：
西葫芦叶片和果实畸形：
-ZYMV在甜瓜上引起的症状；
叶片畸形、褪色，节间缩短：
果肉硬化；
果皮开裂：
种子畸形（上部为健康种子）。注：引自plantpathology(1997)46，809-829。图A.1ZYMV在瓜类作物上引起的症状SN/T4632—2016
SN/T4632—2016
B.1试材
酶联板的要求
附录B
（规范性附录）
双抗体夹心酶联免疫吸附测定
使用质量有保证厂商生产的酶联板B.1.2
包被抗体
特异性的小西葫芦黄花叶病毒抗体B.1.3酶标抗体
碱性磷酸酯酶标记的小西葫芦黄花叶病毒抗体B.1.4底物溶液
对硝基苯磷酸二钠(PNPP)。
样品抽提缓冲液（pH7.4）
亚硫酸钠（NazCO3）
PVP(MW24000~40000)
叠氮钠（NaN，）
4℃储存。
包被缓冲液（pH9.6）
Na2CO3
NaHCOs
蒸馏水定容至1000mL，4℃保存。B.1.7PBST缓冲液（洗涤缓冲液pH7.4）氯化钠（NaCI）
磷酸氢二钠（NazHPO,）
磷酸二氢钾（KH2PO,）
氯化钾（KCI)
吐温-20
蒸馏水定容至1L。
B.1.8酶标抗体稀释缓冲液（pH7.4）PBST
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