SN/T4630—2016 植物病原菌及病害标本采集保存规范 Criterion for collection and preservation of plant pathogens and disease specimen 2016-08-23 发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 2017-03-01 实施 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：刘鹏、郭京泽、张莹、胡佳续、林宇、王禹、姜一、廖芳、赵文军、封立平、黄国明。 1 范围 植物病原菌及病害标本采集保存规范。本标准规定了植物病原菌及病害标本的采集、保存和记录方面的要求和规范。本标准适用于植物和植物产品中植物病原菌及病害标本的采集和保存。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T4630—2016 SN/T2589 植物病原真菌检测规范 SN/T2601 植物病原细菌常规检测规范 SN/T2682 植物有害生物信息采集要求 SN/T2964 植物病毒检测规范 SN/T3689 植物检疫性有害生物实验室生物安全操作规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 植物病原菌 (plant pathogen) 能侵染寄生于植物体并导致侵染性病害发生的生物。本标准中植物病原菌的定义包括有植物病原真菌、细菌、病毒、类病毒和植原体。 3.2 病害标本 (disease specimen) 本标准中特指带有症状的植株或植物组织。 4 基本原则 植物病原菌及病害标本的采集和保存应用于病害识别、检测和鉴定依据及科研工作中，保存的菌种和标本须满足以上的工作要求。 5 器具和试剂 5.1 仪器和工具 常用的工具有刀、剪、锄、锯等，以及标本夹、标本箱、标本纸、小玻瓶、塑料袋、标签、便携保温箱等。分离纯化病原菌需要的工具和仪器有酒精灯、接种针、手术刀、镊子、玻片、超净台、显微镜、灭菌锅等。植物病原菌保存常用到玻璃试管、安瓶、冰箱、培养箱、冷冻干燥机等。 5.2 试剂 标本保存会用到多种浸渍液，其用途是保持植物标本的稳定性，例如防腐浸渍液等。用于菌种和核酸保存的保护剂和缓冲液，例如甘油缓冲液、矿物油、二甲基亚砜（DMSO）、奶粉溶液、TE缓冲液等。常用试剂见附录A。 6 植物病原菌及病害标本的采集和制作 6.1 准备 对于植物病原菌及病害标本的采集需要了解待研究病害的发生发展规律、症状特征，选择合适的季节、时间以及植株部位，选用合适的工具。 6.2 症状观察 根据具体病害的症状特征，选取典型症状的发病植株部位和病原菌存活部位进行采集。 6.3 病害标本的采集 选用合适的工具对带有症状的植株或植物组织进行取样。对于病害症状标本要尽量保持原有性状；用于分离纯化的样品要保证病原菌能够得到有效分离，例如在采集过程中携带保温箱，可将采集样品及时放置于低温条件以免性状改变，保证样品的密封，防止污染和扩散。 6.4 病害标本的制作 采集的标本通过鉴定后，尽量保持标本的本来性状。注意避免采集的样品之间交叉污染，以及在储存和运输过程中变化。除作为分离用组织材料外，一般采用干燥法和浸渍法进行保存。干燥法是指用吸水纸、脱脂棉等吸取植物组织水分，压制成干燥的标本并保存，对于水分多和较大的标本一般采用冷冻干燥或烘箱脱水等方法；浸渍法是指用具有防腐和保持标本色泽的浸渍液对标本进行浸泡保存的方法。 6.5 记录 依据SN/T2682要求，对于采集的标本要及时记录信息，主要包括寄主名称、时间和地点、主要发生情况、生态环境因子等。典型病害症状其性状容易发生变化的标本要保存照片资料。信息记录表格见附录B。 6.6 病害标本的保存 植物病害标本一般放置于干燥、避光的室温环境，每3个月～6个月进行定期检查。干燥法制作的标本主要防止发霉和虫蛀，可定期更换吸水纸等干燥材料并使用除虫药剂。浸渍法制作的标本要注意避光或在暗处保存，以延缓浸渍液的氧化，增加保存时间，同时定期检查标本瓶的密封情况。 6.7 病原菌的分离纯化和鉴定 植物病原真菌和细菌的分离纯化要注意的方面包括实验环境条件、材料选择、表面消毒、分离方法和转