中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4811—2017 进出口食用动物艾玛菌素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of emamectin benzoate residues in live animal for import and export LC-MS/MS method 2017-07-21发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 2018-03-01实施 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草，本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：陈兵、肖陈贵、林彦星、胡运发、沈金灿、刘建利、陈沛金、孙洁、杨俊兴、秦智锋、花群义、卢体康。 1 范围 本标准规定了猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅等进出口食用动物中艾玛菌素药物残留量的液相色谱-质谱/质谱检测和确证方法。 本标准适用于猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅的血液以及猪、牛、羊尿液中艾玛菌素药物残留量的测定。本标准适用于出入境检验检疫工作。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 试样中艾玛菌素药物残留用乙腈提取，经无水硫酸镁及NaCl粉末净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。 4 试剂材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 甲酸：色谱纯。 4.3 净化填料：500mg硫酸镁与100mgNaCl粉末的混合物。 4.4 0.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸（4.2）用去离子水定容到1000mL，摇匀。 4.5 0.1%甲酸乙腈溶液：取1mL甲酸（4.2）用乙腈（4.1）定容到1000mL，摇匀。 4.6 标准曲线配制溶液：取50mL 0.1%甲酸水溶液（4.4）和50mL 0.1%甲酸乙腈溶液（4.5）混合，摇匀。 4.7 标准物质：艾玛菌素（Emamectin Benzoate），纯度≥99.4%（艾玛菌素的基本信息见附录A）。 4.8 标准储备溶液：100mg/L。准确称取适量的艾玛菌素（4.7），用乙腈配制成浓度为100mg/L的艾玛菌素标准储备溶液。 4.9 标准工作溶液：吸取适量的标准储备溶液（4.8），用标准曲线配制溶液（4.6）配制成不同浓度系列的标准工作溶液（现用现配）。 4.10 微孔滤膜：0.22μm有机膜。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2 高速组织匀浆机。 5.3 旋涡混匀器。 5.4 分析天平：感量0.0001g、0.001g和0.1g；移液器：量程10μL~100μL、100μL~1000μL和1000μL~5000μL。 5.5 聚丙烯离心管：50mL和15mL，具塞。 5.6 离心机：转速不低于5000r/min。 6 试样制备与保存 血浆：将新鲜血液采集后加入含抗凝剂的试管中，混匀，5000r/min离心10min（温度低于10℃），取上层血浆； 尿液：5000r/min离心去除沉淀物，取上清液备用。 血浆、尿液试样均分为2份，装入洁净容器，密封，并标明标记，于-18℃以下冷冻存放。在制样操作过程中，应防止样品被污染或残留物含量发生变化。 7 测定步骤 7.1 提取 吸取5mL试样于50mL聚丙烯离心管中，加入20mL乙腈（4.1），漩涡混匀1min，超声提取20min，5000r/min离心5min，将提取液转移至另一离心管中，待净化。 7.2 净化 吸取5mL提取液至装有净化填料（4.3）的15mL离心管中，漩涡混匀1min，5000r/min离心5min，取上层溶液过0.22μm有机滤膜，液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.3 测定 7.3.1 液相色谱条件 液相色谱条件如下： a) 色谱柱：C18柱，2.1×100mm，2.7μm，或相当者； b) 流动相及梯度洗脱条件见表1； c) 柱温：40℃； d) 进样量：10μL； e) 流速：0.3mL/min。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间(min) | 0.1%甲酸水溶液(%) | 0.1%甲酸乙腈溶液(%) 0 | 50 | 50 5.0 | 5 | 95 6.0 | 5 | 95 6.1 | 50 | 50 10.0 | 50 | 50