SN/T4677—2016 出口食品中偶氮甲酰胺的测定方法 高效液相色谱法 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草，本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国重庆出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：王俊苏、彭涛、刘念源、关天横、王国民、唐伯彬、郑晓玲。 1 范围 本标准规定了出口面粉中偶氮甲酰胺的高效液相色谱测定方法。本标准适用于面粉中偶氮甲酰胺的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 样品经丙酮超声提取后，脱脂，高效液相色谱-二极管阵列检测器检测，基质匹配标准工作曲线外标法定量。 4 试剂材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 丙酮：色谱纯。 4.2 正己烷：色谱纯。 4.3 磷酸。 4.4 磷酸氢二钾。 4.5 0.02%磷酸氢二钾溶液：准确称取0.2g磷酸氢二钾，加水溶解并定容至1L，用磷酸(4.3)调节pH至2.4。 4.6 0.5%磷酸氢二钾溶液：准确称取0.5g磷酸氢二钾，加水溶解并定容至100mL。 4.7 偶氮甲酰胺标准物质：CAS号123-77-3，分子式C4H4N4O2，相对分子质量116.1。 4.8 偶氮甲酰胺标准储备溶液：准确称取适量偶氮甲酰胺标准物质，用温水（60℃～70℃）超声溶解并稀释成浓度为100mg/L的标准储备溶液。 4.9 偶氮甲酰胺标准工作溶液：根据需要用水稀释成适当浓度的标准工作溶液。 4.10 微孔滤膜：0.45μm，水相。 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器。 5.2 电子天平：感量为0.0001g和0.01g。 5.3 离心机：转速不低于7500r/min。 5.4 旋转蒸发仪。 5.5 振荡器。 5.6 涡旋混合器。 5.7 离心管：聚丙烯，具塞，50mL。 6 分析步骤 6.1 提取 称取2.00g试样（精确至0.01g）于50mL离心管(5.7)中，加10mL丙酮(4.1)，振荡提取15min，以7500r/min的转速离心5min，将丙酮层小心取出到100mL旋蒸瓶中。残留物再用10mL丙酮重复提取一次。合并提取液于上述旋蒸瓶中，40℃下旋转蒸发至干，用5mL 0.5%磷酸氢二钾溶液(4.6)溶解，再加入5mL正己烷(4.2)涡旋1min脱脂，静置分层后，取下层溶液过0.45μm滤膜(4.10)，备用。 6.2 高效液相色谱条件 a) 色谱柱：C18色谱柱（150mm×4.6mm，5μm），或相当者。 b) 流动相：0.02%磷酸氢二钾溶液(4.5)。 c) 流速：0.5mL/min。 d) 检测波长：245nm。 e) 柱温：30℃。 f) 进样量：50μL。 6.3 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 6.4 基质匹配标准工作曲线绘制 分别准确称取空白面粉2.00g（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，分别添加0.4mg/L，2mg/L，4mg/L，8mg/L，18mg/L，36mg/L偶氮甲酰胺标准工作溶液(4.9)，按照6.1进行分析，得到基质匹配标准工作溶液。基质匹配标准工作溶液和试样中偶氮甲酰胺的响应值均应在仪器线性范围内。将系列基质匹配标准工作溶液依次按上述色谱条件测定，记录色谱峰面积。