中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4676—2016 出口食品中联二脲的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of biurea in foods for export - LC-MS/MS method 2016-12-12 发布 2017-07-01 实施 前言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草，本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国重庆出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：王俊苏、彭涛、胡雪艳、关天横、陈辉、常巧英、存显、王国民。 1 范围 本标准规定了出口食品中联二脲的液相色谱-串联质谱测定及确证方法。本标准适用于面包、馒头、油条、方便面等食品中联二脲的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 试样中的联二脲采用水振荡提取，经高锰酸钾氧化后，转变为偶氮甲酰胺，再加入对甲苯亚磺酸钠使偶氮甲酰胺衍生为对甲苯磺酰氨基脲，采用液相色谱-串联质谱测定和确证，内标法定量。 4 试剂材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 正己烷：色谱纯。 4.2 二甲基亚砜：色谱纯。 4.3 乙腈：色谱纯。 4.4 甲酸：色谱纯。 4.5 乙酸铵：色谱纯。 4.6 冰乙酸。 4.7 对甲苯亚磺酸钠：纯度大于 95%。 4.8 亚铁氰化钾。 4.9 乙酸锌。 4.10 高锰酸钾。 4.11 2.5 mmol/L 对甲苯亚磺酸钠溶液：称取 0.044 g 对甲苯亚磺酸钠，加乙腈-水（1:1，体积比）溶液稀释并定容至 100 mL。 4.12 1.0 mol/L 乙酸锌溶液：称取 183 g 乙酸锌，加 30 mL 冰乙酸溶解，用水稀释至 1 L。 4.13 0.25 mol/L 亚铁氰化钾溶液：称取 106 g 亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至 1 L。 4.14 10 g/L 高锰酸钾溶液：称取高锰酸钾 1 g，用水溶解并稀释至 100 mL。室温保存，有效期 90 d。 4.15 0.2% 甲酸-2 mmol/L 乙酸铵溶液：取 2 mL 甲酸和 0.154 g 乙酸铵，用水稀释并定容至 1 L。 4.16 标准物质：联二脲分子式 C2H6N4O2，相对分子质量 118.1，CAS 号 110-21-4；13C2, 15N2-联二脲分子式 13C2, 15N2-C2H6N4O2，相对分子质量 122.0，CAS 号 1189730-21-9。 4.17 联二脲标准储备液（20 mg/L）：准确称取适量联二脲标准物质（精确至 0.01 mg），用水配制成浓度为 20 mg/L 的联二脲标准储备液。 4.18 13C2, 15N2-联二脲内标储备液（20 mg/L）：准确称取适量 13C2, 15N2-联二脲标准物质（精确至 0.01 mg），用水配制成浓度为 20 mg/L 的 13C2, 15N2-联二脲内标储备液。 4.19 13C2, 15N2-联二脲内标溶液（10 mg/L）：准确移取 13C2, 15N2-联二脲内标储备液（4.18），用水稀释成浓度为 10 mg/L 的 13C2, 15N2-联二脲内标溶液。 4.20 混合标准溶液：准确移取联二脲标准储备液（4.17）和 13C2, 15N2-联二脲内标储备液（4.18），混合，根据需要用水稀释成合适的浓度，使系列混合标准溶液中联二脲浓度为 0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.1 mg/L、1 mg/L、2 mg/L，13C2, 15N2-联二脲浓度为 1 mg/L。 4.21 微孔滤膜：0.22 μm，水相。 5 仪器与设备 5.1 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。 5.2 天平：感量为 0.01 g 和 0.01 mg。 5.3 离心机：转速不低于 8000 r/min。 5.4 振荡器。 5.5 旋涡混匀器。 5.6 离心管：具塞，50 mL。 5.7 比色管：25 mL。 6 试样制备与保存 6.1 试样制备 从所取样品中取出具有代表性样品适量，磨碎混匀后，装入洁净的塑料袋中，密封，并标明标记存放。 6.2 试样保存 将试样于 -18 ℃ 下存放。 7 分析步骤 7.1 前处理 7.1.1 提取 称取 2 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL 离心管中，加 0.2 mL 13C2, 15N2-联二脲内标溶液（4.19）和 10 mL 水，旋涡混匀 1 min，振荡提取 15 min，以 8000 r/min 的转速离心 5 min，移取上