SN/T 4676-2016
基本信息
标准号： SN/T 4676-2016
中文名称：出口食品中联二脲的测定液相色谱-串联质谱法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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下载大小：2685484
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 4676-2016.Determination of biurea in foods for export-LC-MS/MS method.
1范围
SN/T 4676规定了出口食品中联二脲的液相色谱-串联质谱测定及确证方法。
SN/T 4676适用于面包、馒头、油条、方便面等食品中联二脲的测定。
2规范性引 用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
试样中的联二脲采用水振荡提取，经高锰酸钾氧化后,转变为偶氮甲酰胺,再加入对甲苯亚磺酸钠使偶氮甲酰胺衍生为对甲苯磺酰氨基脲,液相色谱-串联质谱测定和确证:内标法定量。
4试剂材料
除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
4.1 正己烷:色谱纯。
4.2二 甲基亚砜:色谱纯。
4.3乙 腈:色谱纯。
4.4甲 酸:色谱纯。
4.5乙酸铵:色谱纯。
4.6冰乙酸。
4.7对甲 苯亚磺酸钠:纯度大于95%。
4.8亚 铁氰化钾。
4.9乙酸锌。
4.10高锰酸钾。
4.112.5 mmol/L对甲苯亚磺酸钠溶液:称取0.044 g对甲苯亚磺酸钠,加乙腈-水(1 : 1,体积比)溶液稀释并定容至100mL。
4.121.0 mol/L乙酸锌溶液:称取183 g乙酸锌,加30 mL冰乙酸溶解,用水稀释至1L。
4.130.25mol/L亚铁氰化钾溶液:称取106 g亚铁氰化钾,用水溶解并稀释至1L。
1范围
SN/T 4676规定了出口食品中联二脲的液相色谱-串联质谱测定及确证方法。
SN/T 4676适用于面包、馒头、油条、方便面等食品中联二脲的测定。
2规范性引 用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
试样中的联二脲采用水振荡提取，经高锰酸钾氧化后,转变为偶氮甲酰胺,再加入对甲苯亚磺酸钠使偶氮甲酰胺衍生为对甲苯磺酰氨基脲,液相色谱-串联质谱测定和确证:内标法定量。
4试剂材料
除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
4.1 正己烷:色谱纯。
4.2二 甲基亚砜:色谱纯。
4.3乙 腈:色谱纯。
4.4甲 酸:色谱纯。
4.5乙酸铵:色谱纯。
4.6冰乙酸。
4.7对甲 苯亚磺酸钠:纯度大于95%。
4.8亚 铁氰化钾。
4.9乙酸锌。
4.10高锰酸钾。
4.112.5 mmol/L对甲苯亚磺酸钠溶液:称取0.044 g对甲苯亚磺酸钠,加乙腈-水(1 : 1,体积比)溶液稀释并定容至100mL。
4.121.0 mol/L乙酸锌溶液:称取183 g乙酸锌,加30 mL冰乙酸溶解,用水稀释至1L。
4.130.25mol/L亚铁氰化钾溶液:称取106 g亚铁氰化钾,用水溶解并稀释至1L。
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4676—2016
出口食品中联二脲的测定此内容来自标准下载网
液相色谱-串联质谱法
Determination of biurea in foods for export-LC-MS/MS method2016-12-12发布
刮净思竞真保
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-07-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T4676—2016
本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国重庆出人境检验检疫局本标准主要起草人：王俊苏、彭涛、胡雪艳、关天横、陈辉、常巧英、存显、王国民I
1范围
出口食品中联二脲的测定
液相色谱-串联质谱法
本标准规定了出口食品中联二脲的液相色谱-串联质谱测定及确证方法。本标准适用于面包、馒头、油条、方便面等食品中联二腺的测定。2规范性引用文件
SN/T4676—2016
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
试样中的联二脉采用水振荡提取，经高锰酸钾氧化后，转变为偶氮甲酰胺，再加人对甲苯亚磺酸钠使偶氮甲酰胺衍生为对甲苯磺酰氨基脲，液相色谱-串联质谱测定和确证,内标法定量。4试剂材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水4.1
正己烷：色谱纯。
二甲基亚：色谱纯。
乙睛：色谱纯。
甲酸：色谱纯。
乙酸铵：色谱纯。
冰乙酸。
对甲苯亚磺酸钠：纯度大于95%。亚铁氰化钾。
乙酸锌。
4.10高锰酸钾。
4.112.5mmol/L对甲苯亚磺酸钠溶液：称取0.044g对甲苯亚磺酸钠，加乙腈-水（1：1，体积比）溶液稀释并定容至100mL。
4.121.0mol/L乙酸锌溶液：称取183g乙酸锌，加30mL冰乙酸溶解，用水稀释至1L。4.130.25mol/L亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至1L。4.1410g/L高锰酸钾溶液：称取高锰酸钾1g，用水溶解并稀释至100mL。室温保存，有效期90d。4.150.2%甲酸-2mmol/L乙酸铵溶液：取2mL甲酸和0.154g乙酸铵，用水稀释并定容至1L。4.16标准物质：联二脲分子式C,H。N,O2，相对分子质量118.1,CAS号110-21-4；13Cz，15N2-联二脲分子式13C2，15N2-C,H。N,O2，相对分子质量122.0，CAS号1189730-21-9。1
SN/T4676—2016
4.17联二脲标准储备液（20mg/L）：准确称取适量联二脲标准物质（精确至0.01mg），用水配制成浓度为20mg/L的联二脲标准储备液，4.1813C2，15N2-联二脲内标储备液（20mg/L）：准确称取适量13C2，15N2-联二脲标准物质（精确至0.01mg），用水配制成浓度为20mg/L的13C2，15N2-联二脲内标储备液。4.1913C2，15Nz-联二脲内标溶液（10mg/L）：准确移取13C2，15Nz-联二脲内标储备液（4.18），用水稀释成浓度为10mg/L的13C2，15N2-联二内标溶液。4.20混合标准溶液：准确移取联二脲标准储备液（4.17）和13C2，15N2-联二脲内标储备液（4.18），混合，根据需要用水稀释成合适的浓度，使系列混合标准溶液中联二脲浓度为0.005mg/L、0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L、2mg/L,13Cz，15Nz-联二脲浓度为1mg/L。4.21微孔滤膜：0.22μm，水相。仪器与设备
液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。天平，感量为0.01g和0.01mg。
离心机：转速不低于8000r/min。5.4振荡器。
旋涡混匀器。
5.6离心管，具塞，50mL。
比色管，25mL。
试样制备与保存
6.1试样制备
从所取样品中取出具有代表性样品适量，磨碎混匀后，装入洁净的塑料袋中，密封，并标明标记存放。
试样保存
将试样于-18℃下存放。
7分析步骤
7.1前处理
7.1.1提取
称取2g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加0.2mL13Cz，15N2-联二脲内标溶液（4.19）和10mL水，旋涡混匀1min，振荡提取15min，以8000r/min的转速离心5min，移取上层清液于25mL比色管（5.7)中，残留物再用10mL水提取1次，合并提取液。7.1.2净化
提取液中分别加入2mL乙酸锌溶液（4.12）和2mL亚铁氰化钾溶液（4.13），加水定容至刻度，振荡混匀，溶液转移至50mL离心管，加人5mL正已烷（4.1)脱脂，以8000r/min的速度离心3min，弃去正已烷层，准确移取5mL上清液于另一离心管中2
衍生化
SN/T4676—2016
加人200μL高锰酸钾溶液（4.14），振荡反应30min后，加入50μL二甲基亚（4.2），振荡3min后，加人5mL对甲苯亚磺酸钠溶液（4.11），振荡衍生10min，以8000r/min的速度离心5min，过0.22μm微孔滤膜后供液相色谱-串联质谱测定。7.2测定
液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱ShimpakXR-ODS，2.2μm，2.0mmX150mm。流动相及梯度洗脱程序见表1。
流速：0.3mL/min。
柱温：40℃。
进样量：10μL。
表1流动相梯度洗脱程序
质谱条件
质谱条件如下：
离子源：电喷雾离子源（ESI)；扫描方式：正离子；
监测方式：多反应监测（MRM)；其他条件参见附录A。
液相色谱-串联质谱测定
0.2%甲酸-2mmol/L乙酸铵溶液
根据试样中被测物的含量，选取响应值适宜的标准工作溶液进行分析。在相同的实验条件下，样液中被测物的色谱峰保留时间与标准工作溶液相同，并且在扣除背景后的样液图谱中，所选择的离子对均出现，各定性离子的相对丰度与标准品离子的相对丰度相比，偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。
ShimpakXR-ODSIⅡI色谱柱是岛津公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表1)
示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可以使用这些等效产品。3
SN/T4676—2016
相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
7.2.3.2定量
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差>50
>20~50
>10~20
在仪器最佳工作条件下，对标准工作溶液和样液进样，内标法定量。标准工作液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述色谱和质谱条件下联二脲的保留时间为4.8min，联二脲和13C2，15N2-联二标准物质衍生产物的多反应监测(MRM)图参见附录B中图B.1和图B.2。空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行标准工作溶液的制备
准确量取2.0mL混合标准溶液（4.20）按照7.1和7.7.2进行处理，制备标准工作溶液。8结果计算
按式(1)进行计算：
试样中联二脲的含量，单位为微克每千克（ug/kg)：关二溶液浓度，单位为微克每升（ug/L）；从标准工作曲线得到的联
样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）注：计算结果需将空白值扣除。测定低限和回收率
测定低限
本方法联二脲的测定低限为5μg/kg。9.2
2回收率
样品的添加浓度及回收率的实验数据见表3。表3添加浓度及回收率的实验数据基质
添加水平
平均回收率
89.6~119.2
100.6~116.6
90.6~102.0
·（1）
方便面
表3（续）
添加水平
μg/kg
SN/T4676—2016
平均回收率
70.6~84.4
88.7~98.6
77.8~102.4
81.4~99.2
91.0~102.3
85.0~101.8
88.1~103.3
93.4~102.6
SN/T4676—2016
参考质谱条件如下：
电喷雾电压(IS)：5500V；
雾化气压力（GS1)：80psi；
气帘气压力（CUR）：35psi；
辅助气压力（GS2)：50psi；
离子源温度（TEM）)：650℃；
碰撞室人口电压（EP)：10V；
碰撞室出口电压（CXP)：12V；
附录A
（资料性附录）
参考质谱条件2）
定性离子对、定量离子对、驻留时间、去簇电压(DP)、碰撞电压(CE)等参数见表A.1。表A.1
化合物名称
对甲苯磺酰氨基脲
13C,15N-对甲苯磺酰氨基脲
注：带“*”的离子为定量离子
待测物离子对、驻留时间、去电压和碰撞电压离子对
230.0/157.0
230.0/91.3
232.3/157.2*
232.3/91.1
驻留时间
去簇电压
碰撞电压
2）非商业性声明：表A.1所列参数是用API4000质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。6
附录B
（资料性附录）
SN/T4676-—2016
联二脲和13C2，15N2-联二脲标准物质衍生产物的多反应监测（MRM)图11 000
0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0t/min
联二脲衍生产物的多反应监测（MRM)图0.0e0L
0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0t/min
13C2，15N2-联二脲衍生产物的多反应监测（MRM)图
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液相色谱-串联质谱法
Determination of biurea in foods for export-LC-MS/MS method2016-12-12发布
刮净思竞真保
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-07-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T4676—2016
本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国重庆出人境检验检疫局本标准主要起草人：王俊苏、彭涛、胡雪艳、关天横、陈辉、常巧英、存显、王国民I
1范围
出口食品中联二脲的测定
液相色谱-串联质谱法
本标准规定了出口食品中联二脲的液相色谱-串联质谱测定及确证方法。本标准适用于面包、馒头、油条、方便面等食品中联二腺的测定。2规范性引用文件
SN/T4676—2016
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
试样中的联二脉采用水振荡提取，经高锰酸钾氧化后，转变为偶氮甲酰胺，再加人对甲苯亚磺酸钠使偶氮甲酰胺衍生为对甲苯磺酰氨基脲，液相色谱-串联质谱测定和确证,内标法定量。4试剂材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水4.1
正己烷：色谱纯。
二甲基亚：色谱纯。
乙睛：色谱纯。
甲酸：色谱纯。
乙酸铵：色谱纯。
冰乙酸。
对甲苯亚磺酸钠：纯度大于95%。亚铁氰化钾。
乙酸锌。
4.10高锰酸钾。
4.112.5mmol/L对甲苯亚磺酸钠溶液：称取0.044g对甲苯亚磺酸钠，加乙腈-水（1：1，体积比）溶液稀释并定容至100mL。
4.121.0mol/L乙酸锌溶液：称取183g乙酸锌，加30mL冰乙酸溶解，用水稀释至1L。4.130.25mol/L亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至1L。4.1410g/L高锰酸钾溶液：称取高锰酸钾1g，用水溶解并稀释至100mL。室温保存，有效期90d。4.150.2%甲酸-2mmol/L乙酸铵溶液：取2mL甲酸和0.154g乙酸铵，用水稀释并定容至1L。4.16标准物质：联二脲分子式C,H。N,O2，相对分子质量118.1,CAS号110-21-4；13Cz，15N2-联二脲分子式13C2，15N2-C,H。N,O2，相对分子质量122.0，CAS号1189730-21-9。1
SN/T4676—2016
4.17联二脲标准储备液（20mg/L）：准确称取适量联二脲标准物质（精确至0.01mg），用水配制成浓度为20mg/L的联二脲标准储备液，4.1813C2，15N2-联二脲内标储备液（20mg/L）：准确称取适量13C2，15N2-联二脲标准物质（精确至0.01mg），用水配制成浓度为20mg/L的13C2，15N2-联二脲内标储备液。4.1913C2，15Nz-联二脲内标溶液（10mg/L）：准确移取13C2，15Nz-联二脲内标储备液（4.18），用水稀释成浓度为10mg/L的13C2，15N2-联二内标溶液。4.20混合标准溶液：准确移取联二脲标准储备液（4.17）和13C2，15N2-联二脲内标储备液（4.18），混合，根据需要用水稀释成合适的浓度，使系列混合标准溶液中联二脲浓度为0.005mg/L、0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L、2mg/L,13Cz，15Nz-联二脲浓度为1mg/L。4.21微孔滤膜：0.22μm，水相。仪器与设备
液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。天平，感量为0.01g和0.01mg。
离心机：转速不低于8000r/min。5.4振荡器。
旋涡混匀器。
5.6离心管，具塞，50mL。
比色管，25mL。
试样制备与保存
6.1试样制备
从所取样品中取出具有代表性样品适量，磨碎混匀后，装入洁净的塑料袋中，密封，并标明标记存放。
试样保存
将试样于-18℃下存放。
7分析步骤
7.1前处理
7.1.1提取
称取2g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加0.2mL13Cz，15N2-联二脲内标溶液（4.19）和10mL水，旋涡混匀1min，振荡提取15min，以8000r/min的转速离心5min，移取上层清液于25mL比色管（5.7)中，残留物再用10mL水提取1次，合并提取液。7.1.2净化
提取液中分别加入2mL乙酸锌溶液（4.12）和2mL亚铁氰化钾溶液（4.13），加水定容至刻度，振荡混匀，溶液转移至50mL离心管，加人5mL正已烷（4.1)脱脂，以8000r/min的速度离心3min，弃去正已烷层，准确移取5mL上清液于另一离心管中2
衍生化
SN/T4676—2016
加人200μL高锰酸钾溶液（4.14），振荡反应30min后，加入50μL二甲基亚（4.2），振荡3min后，加人5mL对甲苯亚磺酸钠溶液（4.11），振荡衍生10min，以8000r/min的速度离心5min，过0.22μm微孔滤膜后供液相色谱-串联质谱测定。7.2测定
液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱ShimpakXR-ODS，2.2μm，2.0mmX150mm。流动相及梯度洗脱程序见表1。
流速：0.3mL/min。
柱温：40℃。
进样量：10μL。
表1流动相梯度洗脱程序
质谱条件
质谱条件如下：
离子源：电喷雾离子源（ESI)；扫描方式：正离子；
监测方式：多反应监测（MRM)；其他条件参见附录A。
液相色谱-串联质谱测定
0.2%甲酸-2mmol/L乙酸铵溶液
根据试样中被测物的含量，选取响应值适宜的标准工作溶液进行分析。在相同的实验条件下，样液中被测物的色谱峰保留时间与标准工作溶液相同，并且在扣除背景后的样液图谱中，所选择的离子对均出现，各定性离子的相对丰度与标准品离子的相对丰度相比，偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。
ShimpakXR-ODSIⅡI色谱柱是岛津公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表1)
示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可以使用这些等效产品。3
SN/T4676—2016
相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
7.2.3.2定量
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差>50
>20~50
>10~20
在仪器最佳工作条件下，对标准工作溶液和样液进样，内标法定量。标准工作液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述色谱和质谱条件下联二脲的保留时间为4.8min，联二脲和13C2，15N2-联二标准物质衍生产物的多反应监测(MRM)图参见附录B中图B.1和图B.2。空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行标准工作溶液的制备
准确量取2.0mL混合标准溶液（4.20）按照7.1和7.7.2进行处理，制备标准工作溶液。8结果计算
按式(1)进行计算：
试样中联二脲的含量，单位为微克每千克（ug/kg)：关二溶液浓度，单位为微克每升（ug/L）；从标准工作曲线得到的联
样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）注：计算结果需将空白值扣除。测定低限和回收率
测定低限
本方法联二脲的测定低限为5μg/kg。9.2
2回收率
样品的添加浓度及回收率的实验数据见表3。表3添加浓度及回收率的实验数据基质
添加水平
平均回收率
89.6~119.2
100.6~116.6
90.6~102.0
·（1）
方便面
表3（续）
添加水平
μg/kg
SN/T4676—2016
平均回收率
70.6~84.4
88.7~98.6
77.8~102.4
81.4~99.2
91.0~102.3
85.0~101.8
88.1~103.3
93.4~102.6
SN/T4676—2016
参考质谱条件如下：
电喷雾电压(IS)：5500V；
雾化气压力（GS1)：80psi；
气帘气压力（CUR）：35psi；
辅助气压力（GS2)：50psi；
离子源温度（TEM）)：650℃；
碰撞室人口电压（EP)：10V；
碰撞室出口电压（CXP)：12V；
附录A
（资料性附录）
参考质谱条件2）
定性离子对、定量离子对、驻留时间、去簇电压(DP)、碰撞电压(CE)等参数见表A.1。表A.1
化合物名称
对甲苯磺酰氨基脲
13C,15N-对甲苯磺酰氨基脲
注：带“*”的离子为定量离子
待测物离子对、驻留时间、去电压和碰撞电压离子对
230.0/157.0
230.0/91.3
232.3/157.2*
232.3/91.1
驻留时间
去簇电压
碰撞电压
2）非商业性声明：表A.1所列参数是用API4000质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。6
附录B
（资料性附录）
SN/T4676-—2016
联二脲和13C2，15N2-联二脲标准物质衍生产物的多反应监测（MRM)图11 000
0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0t/min
联二脲衍生产物的多反应监测（MRM)图0.0e0L
0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0t/min
13C2，15N2-联二脲衍生产物的多反应监测（MRM)图
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