SN/T4848.5—2017 出口蜂蜜中常见蜜源植物成分的检测方法 实时荧光PCR法 第5部分：椴树 发布日期：2017-07-21 实施日期：2018-03-01 前言 SN/T4848《出口蜂蜜中常见蜜源植物成分的检测方法 实时荧光PCR法》共分为8部分：第1部分：荆条；第2部分：油菜；第3部分：洋槐；第4部分：椴树；第5部分：椴树；第6部分：龙眼；第7部分：荔枝和龙眼；第8部分：紫云英。 本部分为SN/T4848的第5部分。 本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国安徽出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。 本部分主要起草人：宗凯、李云飞、陈雪娇、吴亚君、孙娟娟、余晓峰、陈颖、周莉质、郑海松、杨艳歌、李想。 1 范围 SN/T4848的本部分规定了出口蜂蜜中椴树成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于出口蜂蜜中椴树成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限（LOD）为1%（质量百分比）。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 14963—2011 食品安全国家标准 蜂蜜 GB/T 27403—2008 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 蜂蜜 honey：蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经充分酿造而成的天然甜物质。 3.2 椴树 Tilia (Tilia auct. Szyszyl.)，别名：火绳树、家鹤儿、金桐力树、桐麻、叶上果、叶上果根，为椴树科、椴树属的植物。 3.3 实时荧光PCR real-time PCR：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程，实现对起始模板的定量及定性分析。 3.4 Ct值 cycle threshold：每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA：脱氧核糖核酸 (deoxyribonucleic acid) PCR：聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction) dNTP：脱氧核苷酸三磷酸 (deoxynucleoside triphosphate) dATP：脱氧腺苷三磷酸 (deoxyadenosine triphosphate) dCTP：脱氧胞苷三磷酸 (deoxycytidine triphosphate) dGTP：脱氧鸟苷三磷酸 (deoxyguanosine triphosphate) dTTP：脱氧胸苷三磷酸 (deoxythymidine triphosphate) UNG：尿啶N-糖基化酶 (uracil N-glycosylase) CTAB：十六烷基三甲基溴化铵 (cetyltrimethylammonium bromide) Tris：三羟甲基氨基甲烷 [Tris(Hydroxymethyl)aminomethane] EDTA：乙二胺四乙酸 (Ethylenediaminetetraacetic acid) Taq：水生栖热菌 (Thermus aquaticus) OD：光度密度 (optical density) FAM：羧基荧光素 (Carboxyfluorescein) TAMRA：羧基四甲基罗丹明 (Carboxy-tetramethyl-rhodamine) BHQ1：黑洞猝灭基团1 (Black hole quencher 1) 5 方法提要 提取样品DNA，以椴树来源DNA为阳性对照，以其他蜜源植物DNA为阴性对照，无菌水作为空白对照，使用椴树的特异性引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象判定是否存在椴树成分。 6 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T 6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。 6.1 检测用引物和