中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4876.3—2017 DNA条形码方法 第3部分：检疫性卷蛾 Method for DNA barcode Part 3: Quarantine species of Tortricidae 2017-11-07 发布 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 2018-06-01 实施 前言 SN/T4876《DNA条形码方法》共分为5个部分：第1部分：检疫性乳白蚁；第2部分：检疫性断眼天牛；第3部分：检疫性卷蛾；第4部分：检疫性高粱属；第5部分：曼陀罗属。本部分为SN/T4876的第3部分。 本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草SN/T4876.3—2017。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国珠海出入境检验检疫局。 本部分主要起草人：钱路、安榆林、徐森锋、李艳华、叶兼菱、廖力、张卫东、徐梅、梁照文、李健、汤晓军、伏建国。 1 范围 SN/T4876的本部分规定了我国检疫性卷蛾的DNA条形码检测鉴定方法。本部分适用于我国进境植物检疫性卷蛾DNA条形码的测定、结果的比对分析与判定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 DNA barcodes DNA条形码 一段短的、标准化的基因片段，用于区分不同的物种。该片段在种间存在明显的遗传变异和分化并容易进行PCR扩增。DNA条形码技术主要用于物种识别和新种发现。 3.2 Voucher specimens 凭证标本 DNA条形码的实物参考凭证，凭证标本信息包括馆藏信息、采集信息、鉴定信息，用于复核。模式标本是用于分类学研究的凭证标本。 3.3 COI基因 COI gene 线粒体基因组的蛋白质编码基因，全称为细胞色素c氧化酶亚基I（cytochrome c oxidase subunit I）。由于该基因进化速率较快，常用于分析亲缘关系密切的种、亚种及地理种群之间的系统关系。 4 检疫性卷蛾基本信息 中文名：卷蛾 学名：Tortricidae 英文名：Leafroller Moths, Tortricid Moths 中国进境植物检疫性卷蛾包括11种：黑头长翅卷蛾 Acleris variana (Fernald, 1886)、荷兰石竹卷蛾 Cacoecimorpha pronubana (Hubner, 1800)、云杉色卷蛾 Choristoneura fumiferana (Clemens, 1865)、苹果异形小卷蛾 Thaumatotibia (Cryptophlebia) leucotreta (Meyrick, 1913)、斜纹卷蛾 Ctenopseustis obliquana (Walker, 1863)、山楂小卷蛾 Cydia janthinana (Duponchel, 1835)、樱小卷蛾 Grapholita (Cydia) packardi Cydia packardi (Zeller, 1875)、苹果蛾 Cydia pomonella (Linnaeus, 1758)、杏小卷蛾 Grapholita (Cydia) prunivora (Walsh, 1868)、梨小卷蛾 Cydia pyrivora (Danilevsky, 1947)、葡萄花翅小卷蛾 Lobesia botrana (Denis & Schiffermuller, 1775)。 目前全世界已定名的卷蛾科种类有9800余种。卷蛾科种类寄主范围广泛，大部分为重要害虫，其幼虫常对农林生产造成严重的经济损失。 5 方法原理 根据卷蛾的COI序列特征，应用DNA条形码技术对检疫性卷蛾进行鉴定。 6 仪器设备、用具及试剂 6.1 仪器设备与用具 常规PCR仪、微量分光光度仪、电泳仪、凝胶成像系统、酸度计、测序仪、高速冷冻离心机、生物安全柜、烘箱、高压灭菌锅、解剖镜、天平（感量1/10000）、勺浆研磨器、摇床、水浴锅、制冰机、纯水仪、旋涡震荡器、70℃冰箱、冰箱、微量移液器 (0.5μL, 2μL, 10μL, 20μL, 100μL, 200μL, 1000μL)、PCR管 (0.2mL, 0.5mL)。 6.2 主要试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T 6