SN/T 4065—2014 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 出口植物性中药材中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯残留量的测定 液相色谱法 Determination of methyl hydrogen fumarate and dimethyl fumarate in botanic Chinese medicinal material for export. Liquid chromatography method. 2014-11-19 发布 国家质量监督检验检疫总局 2015-05-01 实施 前言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国重庆出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：唐柏彬、曹淑瑞、郑小玲、邓晓军、都存显、张雷、王国民。 1 范围 本标准规定了出口植物性中药材中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯残留量的液相色谱测定方法。 本标准适用于出口植物性中药材五味子、陈皮、枸杞、苦杏仁、决明子、山茱萸、豆蔻和牛蒡子中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是在日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 试样中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯经氨基复合石墨碳固相萃取分离、净化，提取液经离心、过滤、浓缩后，经浓缩、定容后，用液相色谱仪测定，采用外标法定量。 4 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 乙酸乙酯：色谱纯。 4.3 冰乙酸：色谱纯。 4.4 磷酸。 4.5 无水硫酸钠：650℃ 灼烧 4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。 4.6 0.05% 磷酸：移取 0.5 mL 磷酸，用水稀释至 1000 mL。 4.7 液相色谱流动相：甲醇-0.05% 磷酸（35:65，体积比）。 4.8 冰乙酸-乙酸乙酯溶液（2:98，体积比）：移取 2 mL 冰乙酸用乙酸乙酯稀释至 100 mL。 4.9 标准品和标准储备液：富马酸单甲酯标准品（Methyl hydrogen fumarate, C4H4O4, CAS号 27564-98-7）：纯度大于等于 99%；富马酸二甲酯标准品（Dimethyl fumarate, C4H6O4, CAS号 624-49-7）：纯度大于等于 98%。准确称取适量标准品，用甲醇配制成 1000 μg/mL 的单个标准储备溶液，0℃～4℃ 保存。 4.10 混合标准中间液（10 μg/mL）：分别移取 1.00 mL 富马酸单甲酯储备液和富马酸二甲酯标准储备溶液（4.9）于 100 mL 容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，0℃～4℃ 保存。 4.11 混合标准工作溶液：临用前取适量 10 μg/mL 混合标准中间液（4.10），用流动相（4.7）稀释成 0.025 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL 和 5.0 μg/mL 的标准工作液。 4.12 氨基复合石墨碳固相萃取柱：各 0.5 g, 6 mL，或相当者。使用前用 10 mL 甲醇、10 mL 冰乙酸-乙酸乙酯溶液（4.8）活化，保持柱体湿润。 4.13 微孔滤膜：0.22 μm，有机系。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2 分析天平：感量 0.00001g、0.01g。 5.3 高速粉碎机。 5.4 二号筛：24 目，850 μm±29 μm。 5.5 振荡器。 5.6 离心机：转速不小于 7000 r/min。 5.7 固相萃取装置。 5.8 氮吹仪。 5.9 减压旋转蒸发器。 5.10 具塞离心管：50 mL。 5.11 浓缩瓶：150 mL。 6 试样制备与保存 6.1 五味子、陈皮、苦杏仁、决明子、豆蔻、牛蒡子等取不少于 200g 样品，用高速粉碎机粉碎，过二号筛，取通过筛网的药材粉末装入洁净的容器内，密闭并标明标记，于 0℃～4℃ 保存。 6.2 枸杞、山茱萸等取不少于 200g 样品，于 -18℃ 冷冻 2h 以上，取出后迅速进行高速粉碎，粉碎后的样品再装入洁净容器内，密闭并标明标记，于 -18℃ 保存。 7 测定步骤 7.1 提取 称取 2.5g（精确至...